化学发光法以及酶联免疫法在乙型肝炎患者乙肝五项的应用检验价值及效果对比

王兰兰

（鹤壁市第三人民医院，河南 鹤壁 458030）

乙型肝炎是一种传染性疾病，乙型肝炎病毒感染是诱发疾病的主要原因［1］。该病属于世界性疾病，主要通过血液、性接触、血液制品、母婴渠道传播，发展中国家的乙型肝炎发病率更高［2］。有调查数据［3］表明，全球六十亿人中有一半生活在乙型肝炎病毒高流行区域，有近三分之一人被确诊乙型肝炎病毒感染，其中3-4 亿人被确诊乙型肝炎病毒慢性感染，每年有100万人因乙型肝炎病毒感染诱发的肝功能衰竭、原发性肝癌、肝硬化死亡。我国属于乙型肝炎高发地区，有1.2 亿人属于乙型肝炎病毒携带者，有1000 万人确诊乙型肝炎，每年患率是7%。早期诊断乙型肝炎，积极实施有效治疗措施，控制乙型肝炎病情，遏制乙型肝炎病毒继续复制繁殖，是改善疾病症状，预防并发症的主要原因。若患者疑似乙型肝炎，因第一时间前往医院检查，最大程度上消除疾病对患者生命健康及生命质量造成的影响。此次研究以疑似乙型肝炎患者154 例为对象，探讨疾病诊断中应用化学发光法、酶联免疫法检验的价值，报告内容如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2020 年1 月～2022 年3 月，选取154 例疑似乙型肝炎患者为研究对象。男93 例，女61 例，平均年龄（48.75±11.34）岁。纳入标准：患者具有乙肝症状表现，或和乙肝患者有密切接触；患者了解此次检验内容与检验意义，全面配合医院进行检验准备，提供高质量检验血样；患者知情此次研究，自愿参加本次研究，在同意书签字。排除标准：已经确诊乙型肝炎，并在接受对症治疗患者；合并原发性血液疾病，比如恶性贫血等；检验前有用药、剧烈运动等一系列会对检验结果造成影响的行为。

1.2 方法

提前向受检者阐述检查注意事项，要求受检者常规禁食，持续时间大于8h。次日清晨，用红色无抗凝剂普通管抽取两管静脉血液，每管5mL，在37℃水浴箱进行1h 水浴，直至血液自然凝固后离心，速度3500r/min，离心10 分钟。留取两份上层血清，血清置入干燥清洁试管，并标记好编号。若血清在48h 内检测，则置入2℃-8℃冰箱中保存。若血清在48h 后检测，则置入-20℃冰箱中冷冻保存。

化学发光法检验：检验原理是双抗体夹心法原理。用抗-HBs 抗体包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记的抗-11Bs 抗体制备酶结合物。通过免疫反应形成抗体- 抗原- 抗体- 酶复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HBSAg 含量成正比检测：将样本容器放置在仪器配套样本架中。装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作安图A2000plus 全自动仪器完成HBSAg 浓度检测。

酶联免疫法检验：采用抗-HBs 包被反应板，添加待测样本。进行温育处理，加人抗-HBS-HRP。若样本中有HBSAg 存在，该HBSAg 会和包被抗-HBs 进行有效结合并和抗-HBS-HRP 结台并形成抗-HBS-HBSAg- 抗-HBSHRP 复合物，添加TMB 底物会有显色反应。试剂从冰箱拿出，并置入室温平衡30min 静置。配制工作浓度洗涤液（以纯化水做25 倍稀释，量取480mL纯化水，加人20mL洗涤液充分混勾后，成500mL工作浓度洗涤液，待用。结合检验标本数量，选取一定量反应板条。加75uL 待测样本，另加阴性对照3 孔，阳性对照1孔。反应板覆盖封板纸，将反应板置入37°C 水浴箱中，持续孵育1 小时。取出反应板，将封片撕掉，加酶结合物50uL，在微孔振荡器中进行持续10s 的震荡操作，之后再次育30 分钟，然后用洗板板洗涤，持续5 次，加AB 显色剂各50ul，再次震荡10s，孵育30 分钟，在所有孔加50uL 终止液，之后应用酶标仪450/630 双波长读取结果。

1.3 观察指标

检验结果：包含三项检验方法（酶联免疫法、化学发光法、荧光定量PCR 法）的阳性率、阴性率；乙肝五项指标阳性率：包含HBsAg、HBsAb、乙型肝炎e 抗原（HBeAg）、乙型肝炎e 抗体（HBeAb）、乙型肝炎核心抗体（HBcAb），统计五项指标的阳性率。

1.4 统计学方法

所获取研究数据录入Excel 表格，并实施数据分析。

2 结果

2.1 检验结果比较（见表1）

表1 酶联免疫法、化学发光法、荧光定量PCR 法的检验结果比较 例

2.2 乙肝五项指标阳性率比较（见表2）

表2 酶联免疫法、化学发光法乙肝五项指标阳性率比较（n=154 例，n/%）

3 讨论

临床多通过放射免疫分析法、酶联免疫法分析、化学发光法分析、荧光定量PCR 法分析等检测乙型肝炎，其中荧光定量PCR 法属于金标准，检验准确性高，但检验操作复杂，但检测成本过高，不能作为首选筛查方法。酶联免疫法是近年来比较推崇的一种检验方法，操作简单快速，可迅速获取结果，早期确诊患者疾病，所以在临床广泛应用。伴随着酶联免疫法在临床的推广普及，酶联免疫法的检验缺陷逐步暴露出来，主要体现在标本待检物质浓度超标后会因钩状效应显现象诱发假阴性结果，继而导致漏检。酶联免疫法是通过酶完成检验，结合颜色深浅达到判断检验结果的目的，若抗原/抗体和酶结合物浓度较低时，吸光度太小，也会导致假阴性现象［4］。

本文研究结果表明，与酶联免疫法比较，化学发光法的阳性率更大，化学发光法HBsAg、HBcAb 阳性率更大，可见化学发光法的检验价值大于酶联免疫法。原因分析如下：化学发光法通过将高考灵敏度化学发光测定技术和高特异性免疫反应进行有效结合在酶促下通过鲁米诺发出光子信号，促使抗原抗体反应放大，可用于各种抗原、抗体、脂肪酸以及酶等检验分析［5］。化学发光法属于最新免疫分析技术，更是现今最先进的标记免疫检验技术，具有较高的精确度、敏感度，可完全代替放射免疫分析法，淘汰酶联免疫法。化学发光法的发光免疫试剂有效时间长达一年，明显长于放射免疫试剂的1 月有效期；试剂不会造成污染，可保护环境，安全性高；发光强度及测定物质浓度的线性关系达到0-105 范围；敏感度范围达到10-19mol/L 以上。

综上可知，酶联免疫法、化学发光法均可在乙型肝炎乙肝五项检验中应用，但后者的乙型肝炎检验准确性、敏感度及特异度更大，乙肝五项阳性率更大。