贵州省金银花白粉病病原鉴定、生物学特性及防治药剂筛选

2023-11-02 16:01崔文艳罗喜燕吴小云陈永超李明伟彭玲何朋杰
南方农业学报 2023年6期
关键词:生物学特性鉴定金银花

崔文艳 罗喜燕 吴小云 陈永超 李明伟 彭玲 何朋杰

DOI:10.3969/j.issn.2095-1191.2023.06.012

摘要:【目的】明確贵州省金银花白粉病的病原菌分类地位与生物学特性,筛选有效的防治药剂,为金银花白粉病的田间防治提供理论基础。【方法】分别于贵州省铜仁市沿河县和遵义市绥阳县采集具有典型白粉病症状的金银花叶片和花蕾,对获得的菌株进行致病性测定,结合形态特征和ITS序列测序及系统发育进化分析对病原菌进行分类鉴定;采用孢子萌发法和喷施接种法分析温度对病原菌分生孢子萌发率和致病性的影响;结合室内毒力测定和温室药效试验评估6种常见杀菌剂对金银花白粉病的防控效果。【结果】从贵州省遵义市和铜仁市金银花产区共获得33株疑似病原菌菌株,致病性测定结果表明,所有菌株均为金银花白粉病致病菌,其中代表性菌株BF1的形态特征与忍冬叉丝壳菌(Erysiphe lonicerae var. lonicerae)相似,且其ITS序列聚类分析显示与E. lonicerae var. lonicerae ITS序列聚为一类。菌株BF1生物学特性测定结果显示,菌株BF1最适孢子萌发温度为24~26 ℃,最适致病温度为24 ℃。防治药剂筛选试验结果显示,室内条件下1%多抗霉素、30%吡唑醚菌酯、5%已唑醇和0.3%四霉素对菌株BF1分生孢子萌发有较好的抑制作用,其EC50分别为0.3454、0.4347、0.5369和0.6315 g/L;温室条件下1%多抗霉素、30%吡唑醚菌酯、5%已唑醇和0.3%四霉素对金银花白粉病均表现出较好的防治效果,第2次药后的防治效果分别为88.53%、86.40%、84.00%和89.60%。【结论】引起贵州省铜仁市和遵义市金银花白粉病的病原菌为忍冬叉丝壳菌。0.3%四霉素水剂、1%多抗霉素水剂、30%吡唑醚菌酯悬浮剂和5%己唑醇乳剂能有效防控金银花白粉病,可在金银花生产中推广应用。

关键词:金银花;白粉病菌;鉴定;生物学特性;药效试验

中图分类号:S435.67                           文献标志码: A 文章编号:2095-1191(2023)06-1711-09

Identification and biological characteristics of honeysuckle

powdery mildew pathogen and screening of fungicide in Guizhou

CUI Wen-yan1, LUO Xi-yan1, WU Xiao-yun1, CHEN Yong-chao2, LI Ming-wei3,

PENG Ling1, HE Peng-jie1,4*

(1Guizhou University of Traditional Chinese Medicine,Guiyang,Guizhou  550025,China; 2Xiaoguan Township

Agricultural Service Center of Suiyang County,Zunyi,Guizhou  563303,China; 3Suiyang County Agricultural and Rural Bureau,Zunyi,Guizhou  563303,China; 4Key Laboratory of Green Pesticide and Agricultural Bioengineering,Ministry of Education,Guizhou University,Guiyang,Guizhou  550025,China)

Abstract:【Objective】This study clarified the taxonomic status and biological characteristics of the pathogen of honey-suckle powdery mildew in Guizhou and screened effective control agents, so as to provide a theoretical basis for disease control in the field. 【Method】In this study, typical diseased leaf samples and flower buds of honeysuckle powdery mildew in Yanhe County, Tongren City and Suiyang County, Zunyi City, Guizhou Province were collected. Pathogenicity of collected strains was determined. The pathogen was identified by morphological characteristics, ITS sequence analysis, and phylogenetic tree analysis. The effects of temperature on the germination rate and pathogenicity of conidia of the pathogen were analyzed by the spore germination method and the spray inoculation method. The prevention effect of six common fungicides on honeysuckle powdery mildew was evaluated under indoor and greenhouse conditions respectively. 【Result】Thirty-three suspected disease strains were obtained from planting bases of honeysuckle in Zunyi City and Tongren City, Guizhou Province. Pathogenicity test results showed that all strains were the pathogenic strain of honeysuckle powdery mildew. The morphological characteristics of the representative strain BF1 were similar to those of Erysiphe lonicerae var. lonicerae, and its ITS sequence clustering analysis showed that the pathogen was clustered with E. lonicerae var. lonicerae in the same branch of the phylogenetic tree. According to strain BF1 biological characteristics test, the optimum spore germination temperature of strain BF1 was 24-26 ℃; the optimum pathogenic temperature was 24 ℃. According to the results of screening control agents, under indoor conditions, 1% polyoxin, 30% pyraclostrobin, 5% hexaconazole, and 0.3% tetramycin showed good inhibitory effects on conidial germination of strain BF1, with EC50 values of 0.3454, 0.4347, 0.5369, and 0.6315 g/L respectively; under greenhouse conditions, 1% polyoxin, 30% pyraclostrobin, 5% hexaconazole, and 0.3% tetramycin showed good control effects on honeysuckle powdery mildew, with efficacies of 88.53%, 86.40%, 84.00%, and 89.60% after twice treatments respectively. 【Conclusion】The causative pathogen of honeysuckle powdery mildew in Tongren City and Zunyi City, Guizhou Province is E. lonicerae var. lonicerae. 0.3% tetramycin aquae, 1% polyoxin aquae, 30% pyraclostrobin suspending agent and 5% hexaconazole emulsion can effectively prevent and control the disease, which can be applied in the production of honeysuckle.

Key words: honeysuckle; powdery mildew pathogen; identification; biological characteristics; efficacy test

Foundation items: Guizhou Basic Research Plan Project (QKHJC-ZK〔2021〕Yiban 146); Guizhou Science and Technology Support Plan Project(QKHZC〔2020〕4Y099); Scientific Research Project for Institutes of Higher Learning in Guizhou(Youth Projects) (Qianjiaoji〔2022〕208)

0 引言

【研究意义】金银花(Lonicera japonica Thunb.) 为忍冬科忍冬属多年生植物,在我国各省(区)均有分布。金银花花蕾采摘加工后既可制成茶饮,又可入药,常用于治疗流感、咽喉肿痛等病症(王亚琼等,2016;张忠斌等,2019),还在新型冠状病毒的预防和治疗中发挥作用(胡芬等,2021)。贵州省地处我国西南,属于典型的亚热带湿润季风气候,特别适宜金银花生长。金银花在贵州省大多数县份有分布,以遵义市绥阳县产量最大,此外,铜仁、黔西南州、安顺和毕节等地亦有分布,但种植规模相对较小,每年種植面积不稳定。近年来,由于常年连作、栽培品种单一以及当地特殊的高温、高湿气候等原因,白粉病、叶斑病和根腐病等金银花病害也越来越严重,严重影响了金银花的产量和品质。金银花白粉病是一种真菌性病害,其侵染性和传播性强,在金银花主要生长期内均可发生,近年来发病率呈逐年上升趋势,是金银花产业中危害最严重的病害之一,给金银花产业造成严重威胁(He et al.,2022)。因此,明确引发金银花白粉病的病原菌分类学地位并筛选高效、低毒的防治药剂,对病害的有效防控具有重要意义。【前人研究进展】由白粉菌属(Erysiphe spp.)病原真菌引起的白粉病是一种在全球范围内广泛传播的植物叶部病害,该病害发生初期多在叶片表面呈灰白色霉斑,随着病情的发展逐渐扩展成片,严重影响植物光合作用和生长(Bradshaw and Tobin,2020)。在金银花上,白粉病菌不仅侵染叶片,还为害当年生嫩茎和花蕾,引起落叶、枝条枯死和落花,导致金银花产量和品质严重下降,造成巨大的经济损失(冯争光等,2022)。在世界范围内普遍发生的能侵染金银花等忍冬属植物引起白粉病的病原菌主要有忍冬叉丝壳埃氏变种(E. lonicerae var. ehrenbergii) (Braun et al.,1982)、二郎山叉丝壳(E. erlangshanensis)(Takamatsu et al.,2015)、忍冬叉丝壳(E. lonicerae var. lonicerae)(Lee et al.,2016)、三浦叉丝壳(E. miurae)和华北紫丁香叉丝壳(E. syringae)(Braun and Takamatsu,2020)、E. flexuosa和E. magnusii(Bradshaw et al.,2021)等。随着研究的深入,发现多种病原菌能侵染金银花引起白粉病,但病原菌种类、生物学特性、流行规律及危害程度等在不同国家和地区,甚至同一个国家不同地区也存在差异(Mieslerová et al.,2022)。在我国,不同金银花产地引起该病害的病原菌种类不同。孔涛等(2009)及欧善生等(2011)通过形态学特征和病害流行规律分析等方法分别证实山东和广西金银花白粉病均由忍冬叉丝壳菌侵染引起。刘中求等(2010)在湖南省隆回县发现由蓼白粉菌(E. polygoni DC.)侵染金银花植株引起白粉病,但并未对病原菌的生物学性状开展研究。He和Bai(2023)报道了国内新发现的一种侵染金银花叶片的病原菌为白粉菌属叉丝壳菌(Erysiphe sect. Microsphaera)。【本研究切入点】目前国内虽也有大量关于金银花白粉病的报道,但鲜见针对贵州金银花白粉病的研究,对引发该病害的病原菌生物学特性尚不明确,更缺乏针对该地区白粉病高效低毒防治药剂筛选等的相关报道。【拟解决的关键问题】分别于贵州省铜仁市沿河县和遵义市绥阳县采集具有典型白粉病症状的金银花叶片和花蕾,经致病性测定后,结合病原菌形态特征和ITS序列分析,确定金银花白粉病的病原菌种类,并进一步进行病原菌生物学性状测定及低毒防治药剂筛选,以期为金银花白粉病的田间防治提供理论基础。

1 材料与方法

1. 1 试验材料

1. 1. 1 供试植物 金银花品种为北花一号,对白粉病高感。

1. 1. 2 供试药剂 15%三唑酮粉剂(江苏剑牌农化股份有限公司)、5%己唑醇乳剂(江苏盐城利民农化有限公司)、30%吡唑醚菌酯悬浮剂(江西禾益化工股份有限公司)、1%多抗霉素水剂(陕西麦可罗生物科技有限公司)、0.3%四霉素水剂(辽宁微科生物工程股份有限公司)和0.3%苦参碱水剂(山东神星药业有限公司)。

1. 2 病害调查与样品采集

分别选取贵州省金银花种植早、规模大、种植面积稳定的遵义市绥阳县和金银花种植起步较晚、规模较小、种植面积不稳定的铜仁市沿河县为调查地点。分别于沿河县中界镇和绥阳县小关乡金银花种植基地对金银花白粉病发生情况进行调查。选取金银花代表性发病植株,对白粉病症状进行观察,包括病斑颜色、发病部位等。采集具有典型白粉病症状的金银花病叶和花蕾,装于无菌自封袋中带回实验室,置于4 ℃冰箱内保存备用。

在沿河县和绥阳县各调查10块田,采用5点调查法进行病害调查,每地块随机调查5株金银花植株,每株植株随机调查60片叶片和15个花蕾,计算白粉病发病率及病情指数。叶片和花蕾的病害严重程度评估方法及标准相似,按以下公式计算叶片(花蕾)的发病率及病情指数。

发病率(%)=(1-无白粉病病斑叶片数)/总叶片数×100

病情指数=Σ(病级×发病叶片数)/(9×发病叶片数)×100

白粉病分级标准(He et al.,2022):0级,叶片表面无病斑;1级,病斑面积占叶片面积(病斑面积/叶片面积×100%,下同)<5%;3级,5%≤病斑面積占叶片面积<10%;5级,10%≤病斑面积占叶片面积<20%;7级,20%≤病斑面积占叶片面积<40%;9级,病斑面积占叶片面积≥40%。

1. 3 病原菌形态特征观察

用透明胶带小心粘取金银花叶片白粉病病斑上的病原菌,轻放在预先滴有无菌水的载玻片上,在显微镜下观察其病原菌的形态特征,并测量分生孢子和分生孢子梗大小。观察20个视野,每个视野观察10个分生孢子。

1. 4 病原菌致病性测定

用毛刷将金银花叶片表面白色孢子粉刷至1.5 mL的无菌离心管中,加入无菌水将收集到的孢子粉配制成浓度为2.0×105个/mL的分生孢子悬浮液。采用喷雾法将分生孢子悬浮液均匀接种至健康金银花叶片表面,每株约喷施20 mL,以叶片表面均匀附着一层水膜且不下淌为宜。以接种等量无菌水为对照,每处理接种10盆,每盆1株。待其发病后观察病症,收集叶片上的病原菌,置于显微镜下与自然发病的病原菌形态特征进行比较。

1. 5 病原菌分子生物学鉴定

采用CTAB法提取白粉病菌的基因组DNA。采用真菌rDNA-ITS通用引物(ITS1:5'-TCCGTAGGTG AACCTGCGG-3';ITS4:5'-TCCTCCGCTTATTGAT ATGC-3')进行PCR扩增。PCR反应体系20.0 μL:10×Buffer 2.0 μL(含Mg2+),dNTPs(10 mmol/L) 1.6 μL,Taq酶(5 U/μL) 0.5 μL,ITS1和ITS4(10 μmol/L)各1.0 μL,DNA模板0.5 μL,ddH2O 13.4 μL。扩增程序:94 ℃预变性4 min 30 s;94 ℃ 40 s,53 ℃ 40 s,72 ℃ 1 min,进行32个循环;72 ℃延伸8 min。扩增产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳检测,回收后送至生工生物工程(上海)股份有限公司测序。将序列上传至GenBank进行BLAST同源性比对分析,选取相似性较高的同属和形态上相似种属关系不同的其他菌株ITS序列,采用MEGA 7.0中的邻接法构建系统发育进化树(1000次重复)。

1. 6 病原菌生物学特性测定

1. 6. 1 温度对分生孢子萌发的影响 采用载玻片孢子萌发法评估温度对白粉病菌分生孢子萌发的影响。用移液枪吸取200.0 μL孢子悬浮液于载玻片上,然后将载玻片放在预先垫有无菌滤纸的培养皿中,盖上皿盖,分别置于16、18、20、22、24、26、28和30 ℃条件下避光保湿培养,24 h后于光学显微镜下观察孢子的萌发情况(若芽管超过孢子直径一半则判定该孢子已萌发),计算孢子萌发率。每处理5次重复,每重复镜检3个视野。孢子萌发率(%)=(1-未萌发孢子数/总孢子数)×100。

1. 6. 2 温度对病原菌致病性的影响 病原孢子悬浮液接种方法同1.4。接种后将金银花植株分别置于16、18、20、22、24、26、28和30 ℃条件下培养,光周期L∶D=16 h∶8 h。接种7 d后统计植株发病情况,并计算病情指数。

1. 7 防治药剂筛选试验

1. 7. 1 室内药效试验 依次配制6种供试药剂的1000、1500和2000倍稀释液,然后将配制好的药液喷洒到载玻片上(以药液均匀布满载玻片不流淌为度),室温晾干后,按照1.6.1的方法接种孢子悬浮液。以预先喷洒无菌蒸馏水为空白对照。将培养皿置于25 ℃条件下避光保湿培养24 h,然后置于显微镜下观察孢子的萌发情况,计算孢子萌发率和萌发抑制率。以药剂浓度对数(x)为横轴,孢子萌发抑制率(y)为纵轴制作毒力曲线,求出毒力回归方程:y=ax+b,并计算不同药剂对白粉菌的有效抑制中浓度(EC50)。萌发抑制率(%)=(1-处理组孢子萌发率/对照组孢子萌发率)×100。

1. 7. 2 温室防效试验 分别于接种白粉菌孢子悬浮液3和10 d后,采用喷雾法将6种供试药剂的1500倍稀释液均匀喷施至金银花叶片正反面,每株约喷施20 mL,以叶片表面均匀附着一层水膜且不下淌为宜。以喷施清水为空白对照,每处理3次重复。分别于接种白粉菌后第7和14 d调查病害严重程度,并计算病情指数与防治效果。

防治效果(%)=(1-处理组病情指数/对照组病情指数)×100

1. 8 统计分析

采用Excel 2010进行数据统计,运用DPS 7.0进行单因素方差分析,采用Duncanʼs新复极差法进行差异显著性检验。

2 结果与分析

2. 1 病害田间调查结果

贵州省金银花白粉病多发于4—10月。其中,铜仁市金银花以种植户自发种植为主,主要种植品种为湘蕾系列,叶片发病率在50.0%以上,病情指数为10.0~15.3;花蕾发病率为53.3%~100.0%,病情指数为41.3~89.3,目前缺乏有效的控制方法。遵义市金银花以规模化种植为主,主要种植品种为山银花灰毡毛忍冬,叶片发病率为6.7%~41.7%,病情指数为1.7~12.7;花蕾发病率为6.7%~46.7%,病情指数为1.3~21.3。白粉病发病初期金银花叶片表面产生稀疏的白粉状病斑(图1-A),严重时白粉逐渐布满整张叶片正面乃至覆盖在花蕾和嫩枝上,导致叶片逐渐发黄、脱落,花蕾畸形、发霉等(图1-B)。

2. 2 病原菌形态特征

从铜仁市采集带菌样品10份,遵义市采集带菌样品23份。病原菌形态观察结果显示,自不同金银花种植园区采集获得的白粉病菌形态相似,无明显差异。其菌丝为丝状,有隔,分支,宽为2.0~7.5 μm;分生孢子梗直立或弯曲,无分支,大小为50.8~107.2 μm×6.4~17.3 μm,脚胞大小为27.8~89.6 μm×4.8~8.8 μm,上部着生1~3个细胞(图1-C);分生孢子椭圆形或圆柱形,大小为29.0~54.0 μm×12.0~20.0 μm(图1-D);附着胞为裂片状(图1-E),芽管类型为Pseudoidium type(图1-F)。

2. 3 病原菌致病性测定结果

致病性测定结果(表1)显示,对照组无发病症状,而健康金银花叶片接种病原菌孢子悬浮液5~7 d后植株开始发病,初始先出现稀疏白色小斑点,10 d后所有植株均出现不同程度的白粉病症状,与自然发病状态一致;所有菌株均致病,其中菌株BF1的致病力最强(采自遵义市绥阳县小关乡)。选取菌株BF1进行后续研究。

2. 4 病原菌分子生物学鉴定与序列进化分析结果

经PCR扩增和序列测定获得菌株BF1的ITS序列全长640 bp,GenBank登录号为ON248222。将测序结果输入NCBI与已发表的序列进行BLAST同源性比对,结果显示该序列与GenBank中的E. lonicerae(OK326858和MW045564等,分别分离自我国中部金银花和美国橙花忍冬)序列相似性为100%。进一步的聚类分析结果(图2)表明,其与E. lonicerae var. lonicerae ITS序列聚为一类。综合病原菌形态特征及分子鉴定结果,确定白粉病菌BF1的有性世代为忍冬叉丝壳菌(E. lonicerae var. lonicerae)。

2. 5 病原菌生物学特性测定结果

2. 5. 1 温度对病原菌分生孢子萌发的影响 试验结果(表2)显示,菌株BF1的分生孢子在16~30 ℃下均可萌发,随着温度的升高,菌株BF1分生孢子的萌发率呈先升高后降低的变化趋势,最适温度为24~26 ℃,处理24 h后萌发率为66.09%~66.62%,与22 ℃处理间差异不显著(P>0.05,下同),与除22 ℃外的其他温度处理差异显著(P<0.05,下同)。

2. 5. 2 温度对病原菌致病性的影响 如图3所示,菌株BF1在16~30 ℃时均可侵染金银花植株,导致典型的白粉病症状,在22~30 ℃时有较高的病情指数(25.3~31.9),最适温度为24 ℃,接种7 d后病情指数达31.9,与26和28 ℃处理间差异不显著,与除26和28 ℃外的其他温度处理差异显著。

2. 6 金银花白粉病防治药剂筛选结果

2. 6. 1 室内药效试验 如表3和表4所示,室内条件下6种供试杀菌剂对菌株BF1分生孢子萌发均有一定的抑制作用。其中,1%多抗霉素的抑制效果最好,其1000、1500和2000倍稀釋液对菌株BF1分生孢子萌发的抑制率分别达70.48%、63.30%和57.37%,EC50为0.3454 g/L;30%吡唑醚菌酯、5%己唑醇和0.3%四霉素对菌株BF1分生孢子萌发的抑制效果也较好,EC50分别为0.4347、0.5369和0.6315 g/L;0.3%苦参碱的效果最差,其1000、1500和2000倍稀释液对菌株BF1分生孢子萌发的抑制率分别仅为17.92%、5.65%和0.79%,EC50为1.5004 g/L,表明6种供试杀菌剂对白粉病菌菌株BF1的毒力存在明显差异。

2. 6. 2 温室盆栽防效试验 如表5所示,处理组2次施药(接菌后7和14 d)后白粉病病情指数分别为2.47~14.57和4.82~19.26,显著低于对应的空白对照(29.75和46.30),表明6种杀菌剂均对金银花白粉病有一定的防治效果。6种杀菌剂间对金银花白粉病的防治效果存在一定差异(图4和表5),其中以0.3%四霉素处理的防治效果最佳,2次施药后的防效分别为90.87%和89.60%;1%多抗霉素、30%吡唑醚菌酯和5%己唑醇的效果次之,第2次施药后(接菌后14 d)的防治效果分别为88.53%、86.40%和84.00%;再次为15%三唑酮;0.3%苦参碱的效果最差,第2次施药后防治效果为58.40%。

3 讨论

白粉病是金银花种植园区频繁发生、危害较严重的叶部病害。由于规模化、单一品种多年连作,同时种植园区所在地常年湿润多雨,贵州省金银花白粉病发生率逐年上升,严重影响了金银花的产量和品质,给当地金银花产业带来严重的经济损失。金银花的入药部位主要为花蕾,本课题组调查发现,贵州省沿河县和绥阳县两地金银花白粉病的严重程度有较大差异,其中沿河县金银花的花蕾发病率高达52%~100%,远高于绥阳县的8%~47%。除了两地的气候差异外,可能与两地所栽培的金银花品种对白粉病病原菌的抗性不同有关。

金银花白粉病可由多种真菌性病原菌引起,本研究结合形态学特征观察和ITS序列分析等方法,最终确定贵州金银花白粉病由E. lonicerae var. lonicerae侵染引起,与孔涛等(2009)及欧善生等(2011)的研究结果相似,而与刘中求等(2010)的研究结果不同,表明国内不同金银花种植区域的白粉病病原菌类型存在差异。为了便于白粉病流行预测和综合防治,本研究进一步评估了温度对白粉病菌孢子萌发和致病性的影响,结果表明,白粉病菌菌株BF1在16~30 ℃条件下均可萌发或侵染植株,其分生孢子最适萌发温度为24~26 ℃,最适侵染温度为24 ℃,与烟草、苦瓜和变叶木等植物白粉病病原菌的生物学特性相似(邢荷荷等,2015;周芳雪等,2016;邹凯茜等,2020);高于26 ℃时,其孢子萌发和致病性均受到明显抑制,与贵州省金银花白粉病流行规律相吻合。为有效减轻该病害的发生与流行,建议在环境温度高于16 ℃时即采取预防措施,以减少经济损失。

杀菌剂对植物病原菌的室内毒力是当前衡量其对病原菌毒力大小的重要指标之一(赵洪涛等,2019)。本研究测定6种杀菌剂对白粉病病原菌的室内毒力后发现,1%多抗霉素的抑菌效果最好,EC50最小;其次是30%吡唑醚菌酯、5%己唑醇和0.3%四霉素;目前在其他作物上施用较多的15%三唑酮虽有一定的抑菌效果,但相比以上4种杀菌剂其抑菌效果并不理想。进一步研究发现,在温室条件下,0.3%四霉素处理对金银花白粉病的防治效果最佳,连续2次施药后防效高达89.60%,其次为1%多抗霉素、30%吡唑醚菌酯和5%己唑醇,连续2次施药后防效均高于84.00%,再次为15%三唑酮,0.3%苦参碱的防效最差,与室内药效试验结果相似,表明0.3%四霉素、1%多抗霉素、30%吡唑醚菌酯和5%己唑醇均能有效防控金银花白粉病。0.3%四霉素、1%多抗霉素、30%吡唑醚菌酯和5%己唑醇均属于低毒杀菌剂,其中四霉素由大环内酯类、肽嘧啶核苷酸类和含氮杂环芳香族抗生素等组成,既能高效防控白粉病在内的多种植物病害,又能提高作物免疫力(罗林丽等,2022);多抗霉素是一类由结构相似的多种肽嘧啶核苷酸类物质组成的多组分抗生素,主要通过干扰细胞壁的合成来抑制真菌孢子的萌发或菌丝的生长(安康等,2022);而吡唑醚菌酯及己唑醇分别属于甲氧基丙烯酸酯类和三唑类杀菌剂,分别能干扰真菌性病原菌呼吸作用和影响其细胞膜的形成,导致病原菌不能生长或直接死亡(Ju et al.,2017;张昕淳等,2023)。虽然上述4种杀菌剂的杀菌机制各不相同,但为了避免耐药性的产生,生产上可酌情考虑采用两两组合同时施用或前后间隔施用等方式实现高效防控金银花白粉病的目的。

本研究仅在室内和温室条件下评估了6种杀菌剂的抑菌和防病效果,有一定的局限性。在后续的工作中,还需在大田环境中验证其对金银花白粉病的防控效果和最适浓度。此外,考虑到金银花主要用于医药和食品等领域,本课题组下一步还将在白粉病的生物防治、生防菌的生防机制及生物制剂的开发等方面作进一步研究,为金银花产业的可持续发展打下理论基础。

4 结论

引起贵州省铜仁市和遵义市金银花白粉病的病原菌为忍冬叉丝壳菌(E. lonicerae var. lonicerae),该病菌对温度适应性强,其孢子萌发最适温度为24~26 ℃,致病最适温度为24 ℃。0.3%四霉素水剂、1%多抗霉素水剂、30%吡唑醚菌酯悬浮剂和5%己唑醇乳剂能有效防控金银花白粉病,可在金银花生产中推广应用。

参考文献:

安康,韩兴,刘海涛,王娇,李亚宁,刘大群. 2022. 几种农用抗生素诱导植物对灰霉病的抗性及其信号转导途径研究[J]. 河北农业大学学报,45(1):97-104. [An K,Han X,Liu H T,Wang J,Li Y N,Liu D Q. 2022. Analysis of agricultural antibiotics effects on plant resistance to gray mold and their signal transduction pathways[J]. Journal of Hebei Agricultural University,45(1):97-104.] doi:10. 13320/j.cnki.jauh.2022.0014.

冯争光,王学众,刘晓东,刘金,杨金库,刘娜. 2022. 解淀粉芽孢杆菌7T6的分离鉴定及对金银花白粉病的防治效果[J]. 北方园艺,(11):104-111. [Feng Z G,Wang X Z,Liu X D,Liu J,Yang J K,Liu N. 2022. Isolation and Identification of Bacillus amylolique faciens 7T6 and biological control of powdery mildew of honeysuckle[J]. Northern Horticulture,(11):104-111.] doi:10.11937/bfyy. 20214606.

胡芬,郭爱华,黄鹿,余望仙,刘广菲,高新生,尹俊,刘泰民,杨勇,杨毅. 2021. 不同剂量金银花口服液联合西医常规疗法治疗新型冠状病毒肺炎普通型187例多中心临床观[J]. 中医杂志,62(6):510-515. [Hu F,Guo A H,Huang L,Yu W X,Liu G F,Gao X S,Yin J,Liu T M,Yang Y,Yang Y. 2021. Jinyinhua liquid at different dosage combined with western medicine conventional treatment for common type COVID-19:A multicenter trial of 187 cases[J]. Journal of Traditional Chinese Medicine,62(6):510-515.] doi:10.13288/j.11-2166/r.2021.06.011.

孔涛,梁晨,逄蕾,李宝笃. 2009. 金银忍冬白粉菌及其重寄生菌的报道[J]. 菌物研究,7(2):86-88. [Kong T,Liang C,Pang L,Li B D. 2009. A report of amur honeysuckle powdery mildew fungi and its hyperparasite[J]. Journal of Fungal Research,7(2):86-88.] doi:10.13341/j.jfr. 2009.02.006.

刘中求,尹华庆,王东来,钱小波. 2010. 隆回县金银花白粉病发生规律及防治对策[J]. 中国植保导刊,30(3):27-28. [Liu Z Q,Yin H Q,Wang D L,Qian X B. 2010. Occurring characteristics and controlling strategy of Erysiphe polygoni in Longhui County[J]. China Plant Protection,30(3):27-28.] doi:10.3969/j.issn.1672-6820.2010.03.011.

罗林丽,赵兴丽,周罗娜,贺圣凌,刘思睿,张欣,罗可,周玉锋. 2022. 1株白魔芋软腐病病原菌鉴定及其室内药剂筛选[J]. 南方农业学报,53(11):3137-3146. [Luo L L,Zhao X L,Zhou L N,He S L,Liu S R,Zhang X,Luo K,Zhou Y F. 2022. Identification of a pathogen causing soft rot on Amorphophallus albus and laboratory screening for bactericide[J]. Journal of Southern Agriculture,53(11):3137-3146.] doi:10.3969/j.issn.2095-1191.2022. 11.014.

歐善生,苏桂花,谢恩倍,覃连红,简峰,黄雪兰,石化玉,黄奉茂,陈彩贤,王小欣,黄艳花. 2011. 广西金银花主要病虫及天敌昆虫消长规律研究[J]. 安徽农业科学,39(15):8995-8997. [Ou S S,Su G H,Xie E B,Qin L H,Jian F,Huang X L,Shi H Y,Huang F M,Chen C X,Wang X X,Huang Y H. 2011. Main diseases and pests in Lonicerae japonica in Guangxi Province and fluctuation pattern of their natural enemies[J]. Anhui Agricultural Sciences,39(15):8995-8997.] doi:10.13989/j.cnki. 0517-6611.2011. 15.170.

王亚琼,陈卫,钟水生,张华峰,薛满,顾炳仁. 2016. 金银花清热解毒作用的血清代谢组学研究[J]. 中药材,39(5):1129-1133. [WangY Q,Chen W,Zhong S S,Zhang H F,Xue M,Gu B R. 2016. Effect of heat-clearing and detoxifying health function of Lonicera japonica in rats based on metabonomics[J]. Journal of Chinese Medicinal Materials,39(5):1129-1133.] doi:10.13863/j.issn1001-4454. 2016.05.045.

邢荷荷,梁晨,于静,张成省,孔凡玉,王凤龙. 2015. 烟草白粉病菌的生物学特性研究[J]. 中国烟草学报,21(2):85-89. [Xing H H,Liang C,Yu J,Zhang C S,King F Y,Wang F L. 2015. Biological characteristics of tobacco powdery mildew pathogen[J]. Acta Tabacaria Sinica,21(2):85-89.] doi:10.16472/j.chinatobacco.2014.050.

张昕淳,李荣玉,湛兴瑜,孙明明,姚小龙,李明,廖逊. 2023. 25%吡唑醚菌酯悬浮剂在7种蔬菜中的消解动态[J]. 山地农业生物学报,42(1):87-92. [Zhang X C,Li R Y,Zhan X Y,Sun M M,Yao X L,Li M,Liao X. 2023. Degradation dynamics of 25% pyraclostrobin suspension concentrate in seven vegetables[J]. Journal of Mountain Agriculture and Biology,42(1):87-92.] doi:10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2023.01.013.

张忠斌,沈洪宽,孙玉风,丁文雅. 2019. 金银花中酚酸类有效成分的提取及其抗菌活性研究[J]. 中国民族民间医药,28(16):27-29. [Zhang Z B,Shen H K,Sun Y F,Ding W Y. 2019. Studied on phenolic acids extracting of Lonicera japonica Thunb. and its antimicrobial effect[J]. Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy,28(16):27-29.] doi:10.3969/j.issn.1007-8517.2019.16. zgmzmjyyzz201916009.

赵洪涛,陈东奎,陈香玲,欧智涛,黄其椿,张兰,李果果,刘要鑫,叶云峰,付岗. 2019. 沃柑溃疡病病原菌分离鉴定及防治药剂筛选[J]. 南方农业学报,50(12):2703-2712. [Zhao H T,Chen D K,Chen X L,Ou Z T,Huang Q C,Zhang L,Li G G,Liu Y X,Ye Y F,Fu G. 2019. Pathogen identification and bactericide screening of Orah citrus canker[J]. Journal of Southern Agriculture,50(12):2703-2712.] doi:10.3969/j.issn.2095-1191.2019.12.11.

周芳雪,楊永利,韦运谢,张恺莉,刘娅楠,刘晓妹. 2016. 变叶木新病害白粉病病原菌生物学特性测定[J]. 湖北农业科学,55(21):5548-5550. [Zhou F X,Yang Y L,Wei Y X,Zhang K L,Liu Y N,Liu X M. 2016. Biological Chara-cteristics of the Pathogen of Codiaeum variegatum powdery mildew[J]. Hubei Agricultural Sciences,55(21):5548-5550.] doi:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016. 21.027.

邹凯茜,田丽波,商桑,陈虹容,郭雪松,李婉豫,曾丽萍. 2020. 不同培养条件对苦瓜白粉病菌分生孢子萌发的影响[J]. 南方农业学报,51(3):571-578. [Zou K X,Tian L B,Shang S,Chen H R,Guo X S,Li W Y,Zeng L P. 2020. Effects of different culture conditions on germination of conidia in pathogen of bitter gourd powdery mildew[J]. Journal of Southern Agriculture,51(3):571-578.] doi:10.3969/j.issn.2095-1191.2020.03.012.

Bradshaw M,Braun U,Götz M,Takamatsu S. 2021. Taxonomy and phylogeny of the Erysiphe lonicerae complex (Helotiales,Erysiphaceae) on Lonicera spp.[J]. Fungal Systematics and Evolution,7(1):49-65. doi:10.3114/fuse. 2021.07.03.

Bradshaw M,Tobin P C. 2020. Sequencing herbarium specimens of a common detrimental plant disease (powdery mildew)[J]. Phytopathology,110(7):1248-1254. doi:10.1094/PHYTO-04-20-0139-PER.

Braun U. 1982. Descriptions of new species and combinations in Microsphaera and Erysiphe (II)[J]. Mycotaxon,15:121-137.

Braun U,Takamatsu S. 2020. Phylogeny of Erysiphe,Microsphaera,Uncinula(Erysipheae) and Cystotheca,Podosphaera,Sphaerotheca (Cystotheceae) inferred from rDNA ITS sequences:Some taxonomic consequences[J]. Schlechtendalia,4:1-33. doi:10.25673/90008.

He P J,Cui W Y,Peng L. 2022. Biocontrol efficacy of Bacillus velezensis HC-8 against powdery mildew of honeysuckle caused by Erysiphe lonicerae var. lonicerae[J]. Biological Control,166:104834. doi:10.1016/j.biocontrol.2021.104834.

He Q N,Bai L C. 2023. Morphological and phylogenetic analyses revealed a new species of Erysiphe sect. Microsphaera on Lonicera in China[J]. Journal of Plant Patho logy,105(2):539-544 . doi:10.1007/s42161-023-01340-1.

Ju C,Xu J,Wu X H,Dong F S,Liu X G,Tian C Y,Zheng Y Q. 2017. Effects of hexaconazole application on soil microbes community and nitrogen transformations in paddy soils[J]. Science of the Total Environment,609:655-663. doi:10.1016/j.scitotenv.2017.07.146.

Lee S H,Lee C K,Cho S E,Park J H,Shin H D. 2016. First report of powdery mildew caused by Erysiphe lonicerae var. lonicerae on Lonicera japonica in Korea[J]. Plant Disease,100(4):856-856. doi:10.1094/PDIS-09-15-1031-PDN.

Mieslerová B,Cook R T A,Wheater C P,Lebeda A. 2022. Ecology of powdery mildews-influence of abiotic factors on their development and epidemiology[J]. Critical Reviews in Plant Sciences,41(6):365-390. doi:10.1080/07352689.2022.2138044

Takamatsu S,Ito H,Shiroya Y,Kiss L,Heluta V. 2015. First comprehensive phylogenetic analysis of the genus Erysiphe (Erysiphales,Erysiphaceae) I. The Microsphaera lineage[J]. Mycologia,107(3):475-489. doi:10.3852/15-007.

(責任编辑 麻小燕)

收稿日期:2023-03-08

基金项目:贵州省基础研究计划项目(黔科合基础-ZK〔2021〕一般146);贵州省科技支撑计划项目 (黔科合支撑〔2020〕4Y099号);贵州省教育厅高等学校科学研究项目(青年项目)(黔教技〔2022〕208号)

通讯作者:何朋杰(1988-),https://orcid.org/0000-0003-4379-9126,博士,主要从事植物病害生物防治研究工作,E-mail:gzhepj2006@163.com

第一作者:崔文艳(1988-),https://orcid.org/0000-0002-7169-800X,主要从事中药材病害生物防治研究工作,E-mail:2276612334@qq.com

猜你喜欢
生物学特性鉴定金银花
金银花“香溢”致富路
金银花
山楂在城市园林绿化中的应用
浅议检察机关司法会计鉴定的主要职责
青铜器鉴定与修复初探
八种氟喹诺酮类药物人工抗原的合成及鉴定
高职院校教学档案的鉴定与利用
金银花又开
夏日良药金银花