急性心肌梗死患者血浆miR-195、sST2、Myo、CatS 的检测价值

陈春文 林晓泼 周苗苗

据统计，我国每年因心血管疾病死亡患者大约300 万，新发急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）患者50 万[1]。肌红蛋白（myoglobin，Myo）是心肌细胞损伤后最早进入血液的生物标志物，组织蛋白酶S（cathepsin s，CatS）是参与细胞外蛋白降解的重要内切酶，被认为在动脉粥样硬化过程中发挥重要作用[2]，可溶性生长刺激表达因子2（soluble growth stimulation express gene 2，sST2）系由受机械张力作用的心肌细胞和成纤维细胞分泌[3]，可反映心肌细胞损伤与心肌纤维化具有反映价值。近年来，有关人类基因的研究发现，循环微小核糖核酸（microRNA，miRNA）可能是AMI 的潜在生物标志物，小鼠试验发现微小RNA-195（microRNA-195，miR-195）对于心肌细胞有促凋亡作用[4]。本研究旨在分析AMI 患者血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS的检测价值，现将结果报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 选择2019 年4 月至2020 年10 月平阳县人民医院收治的AMI 患者105 例作为观察组，另择同期本院健康体检者94 名作为对照组。观察组男64 例，女41 例；年龄25～73（58.34±9.41）岁；吸烟史43 例；发病时间2～21（10.24±1.32）h；冠状动脉（下称冠脉）狭窄程度评分＜40 分25 例，40～60分27 例，61～80 分33 例，＞80 分20 例；心电图QRS 积分＜3 分36 例，3～4 分49 例，＞4 分20 例。对照组男57 名，女37 名；年龄26～72（59.16±10.22）岁；吸烟史38 名。两组对象一般资料比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。纳入标准：符合AMI 诊断标准[5]；冠脉造影检查显示冠脉狭窄＞50%；入院时均伴有胸闷、心悸等症状；在平阳县人民医院接受经皮冠脉介入治疗，且成功植入支架；临床资料完整。排除标准：严重肝肾功能不全；合并呼吸系统疾病或呼吸道感染；心力衰竭；心脏瓣膜疾病。本研究经本院医学伦理委员会审查通过（批准文号：LW-2023-63），两组对象或家属均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 血清指标检测 观察组在入院后12 h 内采集静脉血2 mL，对照组于体检当天采集空腹静脉血2 mL。室温下静置1 h，以3 000 r/min 离心10 min，保存于-20 ℃冰箱中。采用RT-PCR 法定量检测miR-195 水平；采用酶联免疫吸附法检测血清sST2、Myo 和CatS 水平。试剂盒均由武汉明德生物科技有限公司提供。

1.2.2 治疗方法 观察组入院后立即给予阿司匹林片（规格：0.3 g/粒，国药准字：H22024700，长白山制药股份有限公司）、硫酸氢氯吡格雷片（规格：75 mg/片，国药准字：H20213330，浙江京新药业股份有限公司）口服治疗，术中给予肝素钠注射液（规格：2 mL/1 000 U，国药准字：H51021210，成都市海通药业有限公司）10 000 U，建立静脉通道。经冠脉造影术检查后，对梗死血管直接行经皮冠脉腔内血管成形术治疗，并植入冠脉支架。

1.2.3 随访方法 观察组患者出院后通过电话、门诊等形式随访6 个月，根据其预后情况（再发胸痛症状、缺血再入院、死亡），将观察组患者分为预后不良组24 例和预后良好组81 例，对两组患者血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 水平进行比较，并分析以上指标对AMI 患者预后的预测价值。

1.3 统计学处理 采用SPSS20.0 统计软件。计量资料以表示，组间比较采用两独立样本t 检验，方差不齐时采用t'检验。采用Pearson 秩相关对血浆sST2、Myo、CatS 和miR-195 的相关性进行分析。采用ROC 曲线评估以上指标对于AMI 预后的预测效能。采用单因素以及多因素Cox 回归分析影响AMI 患者预后的相关因素。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组对象血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 水平比较 观察组患者血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 水平高于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表1。

表1 两组对象血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 水平比较

2.2 血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 的相关性分析 血浆miR-195 与sST2、Myo、CatS 均呈正相关（r=0.606、0.522、0.347，均P＜0.05），Myo 与sST2、CatS 均呈正相关（r=0.460、0.401，均P＜0.05），CatS与sST2 呈正相关（r=0.321，P＜0.05），见图1-6。

图1 血浆miR-195 与sST2 相关性

图2 血浆miR-195 与Myo 相关性

图3 血浆miR-195 与CatS 相关性

图4 血浆Myo 与sST2 相关性

图5 血浆Myo 与CatS 相关性

图6 血浆CatS 与sST2 相关性

2.3 预后不良组、预后良好组一般资料及血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 水平比较 预后不良亚组患者血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 水平高于预后良好亚组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表2。

表2 不同预后患者一般资料及血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 水平比较

2.4 AMI 患者不良预后发生的Cox 回归分析 单因素及多因素Cox 回归分析显示，血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 水平异常升高均是导致AMI 患者预后不良的危险因素（均P＜0.05），见表3。

表3 AMI 患者不良预后发生的Cox 回归分析

2.5 血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 对AMI 患者预后的预测价值分析 血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 4 者联合检测对于AMI 患者预后的AUC 值、灵敏度均高于单一检测（均P＜0.05），见表4 和图7。

图7 血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 预测AMI 患者预后的ROC 曲线

表4 血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 对AMI 患者预后的预测价值分析

3 讨论

AMI 主要是因冠脉闭塞、血流中断，引起局部心肌缺血性坏死，是患者致残和死亡的主要原因之一[6]。AMI 是临床常见的危害人类健康的疾病之一，虽然临床对心血管疾病的预防和治疗方法均进行了完善，但死亡率仍居高不下。AMI 的发生会导致患者出现胸痛、心肌损伤或缺血等，其主要病因与暴饮暴食、吸烟、过度饮酒等有关。研究证实随着近年来人们生活饮食的变化，AMI 的发病率日趋上升，且发病年龄逐渐趋于年轻化[7]。早期诊断和预后预测对其治疗至关重要。心电图对AMI 治疗有较好的指导作用，但临床发现约50%的AMI 患者无心电图的特异性变化[8]。高敏肌钙蛋白Ⅰ（hypersensitive-troponin I，hs-TnI）等新型心肌损伤标志物水平升高通常存在一定滞后性，故也存在一定局限。肌酸激酶（creatine kinase，CK）、乳酸脱氢酶、肌酸激酶同工酶MB（creatine kinase isoenzymes，CK-MB）等常规心肌酶参数一般在AMI 发生后的4～8 h 后上述参数才会升高，且CK、CK-MB 的活性一般在2～4 d 内就会恢复正常，无法判断心肌受损情况[9]。因此常规心肌酶生化参数在AMI 的诊断和预后预测方面仍具有一定的局限性。

miRNA 在细胞受损时，可快速释放入血液中，并可在循环体液中保持一段时间[10]。张淑华等[11]研究表明miR-195 在AMI 患者胸痛发生4 h 血浆中即可检测到升高，且随着胸痛时间的增加而升高。本研究中也表明AMI 患者血浆miR-195 水平显著升高，与其研究一致。跨膜形式ST2（membrane-bound ST2,ST2L）是一个力学激活系统，可发挥抗心肌纤维化、抗心肌细胞肥大、减少细胞坏死等心脏保护作用[12]。在缺氧情况下，心肌细胞部分凋亡，血清中游离的sST2 可作为诱骗受体与IL-33 结合，削弱ST2L 的心脏保护作用。既往研究表明AMI 发生后早期sST2 显著升高[13]，本研究中也发现AMI 患者血清sST2 水平显著高于对照组，与上述结果一致。分析其可能，可能是AMI 发生后部分心功能丧失，导致心室壁机械张力增加，心肌细胞和成纤维细胞产生大量sST2。Myo 是一种氧结合血红素蛋白，存在于横纹肌胞质中，可结合和释放氧气，有利于氧气在肌肉中的分布。因Myo 在心肌中含量较为丰富，相对分子量较小，故在心肌损伤的早期即可大量漏至血中，是AMI 发生后可早期检出的心肌损伤标志之一[14-15]。本研究结果也显示观察组患者血清Myo 水平显著高于对照组，与既往研究结果相一致[16]。CatS是具有保守活性的三维囊，包括动脉粥样硬化、脑卒中等多种疾病都认为与CatS 代谢紊乱有关。有学者通过动物试验发现小鼠主动脉壁重构以及动脉粥样硬化过程可以受到血清CatS 水平高低的影响[17]。本研究中，也发现观察组患者血清CatS 水平高于对照组，提示血清CatS 与AMI 的发生密切相关。

本研究结果显示血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 之间均呈正相关，且单因素以及多因素Cox 回归分析均证实血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 的异常升高是导致AMI 患者预后不良的危险因素，提示血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 的高表达可预测AMI 患者不良预后的发生。李玉坤等[18]研究同样发现血清Myo 的高表达可增加AMI 患者心血管事件风险。分析其原因，AI 的发生会导致心肌细胞缺血缺氧，激活机体炎症反应，而Myo 可作为反映急性期损伤的有效指标迅速上升，而当心功能不全，梗死周围心肌进行性坏死，梗死扩散时，持续小量的Myo、miR-195 会释放入血，故血清Myo 的高表达可能提示AI 患者预后差。绝大多数AMI 的发生是由动脉粥样硬化引起的，CatS 的分泌和释放增加，会触发体内大量泡沫细胞的形成，加快斑块的不稳定性，同时可促进单核细胞向内膜下部位迁移，促进纤维斑块的形成，进而加重病情，影响预后[19]。进一步通过ROC 曲线分析得出，血浆miR-195、sST2、Myo和CatS 水平联合对于AMI 患者预后的AUC 值、灵敏度均高于单一检测，提示血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 联合可提高对于AMI 预后的预测效能。分析其原因，Myo 在心肌、骨骼肌中均存在，miR-195、sST2 受高敏感性的影响，可能在部分炎症性疾病中也可检测到，因此单一检测仍存在一定的局限性，通过4 者联合可较好的弥补上述局限。

综上所述，AMI 患者均存在血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 高表达，且血浆miR-195、sST2、Myo 和CatS 相互呈正相关，其高表达与患者预后不良密切相关，将其联合可较好的预测AMI 患者预后情况。但本研究仍存在一定的局限，为单中心小样本回顾性研究，部分结果可能存在一定的偏差，仍有待于后续进一步完善。