固相萃取-液质联用法快速测定猪肉中β-受体激动剂残留

师忠义 李鑫 潘明迪 李雅静 张磊

【摘要】目的：建立同时测定猪肉中β-受体激动剂的快速分析方法。方法：选用自制检测试剂盒进行提取和净化，采用高效液相色谱串联质谱法，以0.1%甲酸水+0.1%甲酸/乙腈作为流动相，梯度洗脱。结果：加标水平为0.5、1、5μg/kg时，回收率均在70.8%～92.0%之间，相对偏差在8.9%～15.2%之间，相关系数均大于0.999。结论：本方法简便、快捷，可适用于同时测定猪肉中β-受体激动剂的残留量。

【关键词】高效液相色谱串联质谱；β-受体激动剂；猪肉

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.01.001

【基金项目】辽宁省市场监督管理局科技计划项目（2022ZC022）。

Determination ofβ-Agonists Residues in Pork by Spe-Ultra High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

SHI Zhongyi*， LI Xin， PAN Mingdi， LI Yajing， ZHANG Lei

（Chaoyang Inspection and Testing Center， Chaoyang 122000， China）

Abstract： Objective： To establish a rapid analysis method for simultaneous determination ofβ-receptor agonists in pork. Methods： Using self-made detection kits for extraction and purification， high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry（HPLC-MS/MS） was employed with 0.1% formic acid water + 0.1% formic acid/acetonitrile as the mobile phase， followed by gradient elution. Results： At the spiked levels of 0.5， 1， and 5μg/kg， the recoveries ranged from 70.8% to 92.0%， and the relative deviations were between 8.9% and 15.2%. The correlation coefficients were all greater than 0.999. Conclusion： This method is simple and rapid， and can be applied for the simultaneous determination ofβ-receptor agonist residues in pork.

Keywords： UPLC-MS/MS；β-agonist； pork

β-受体激动剂属于肾上腺素类兴奋剂，具有苯乙醇胺结构。它不是兽药，也不属于添加剂，可以促进畜禽生长，减少脂肪生成，提高畜禽组织瘦肉率。由于β-受体激动剂在畜禽产品中有较高残留，会对人体健康造成极大的伤害，严重时可能导致人死亡。因此国家将其列为畜禽产品中禁用药物。

目前，畜禽产品中β-激动剂类药物残留常用的检测手段包括质谱法、气相色谱法、酶联免疫法、液相色谱法等技术。UPLC-MS/MS法具有分析时间短、仪器精密度和灵敏度高、抗干扰性强和检测出的假阳性率低等特点，目前已成为药物残留分析的主要检测手段。然而，国内报道的提取、净化方法多采用SPE（固相萃取）法，该方法操作步骤烦琐、耗时，且多以测定一种或者几种β-激动剂类药物残留为主，不能全面监测畜禽产品中β-受体激动剂的残留情况。而畜产品的质量安全涉及人民群众的饮食安全，因此本文建立了同时测定β-受体激动剂的快速分析方法。该方法自动化程度高，操作简便且快速，为大批量β-激动剂类药物残留量的检测提供了参考[1-8]。

1.1仪器

1290-6420型超高效液相色谱仪串联质谱联用仪（美国安捷伦公司）；BSA224S-CW型电子分析天平（美国赛多利斯公司）；H1850高速离心机（湘仪离心机有限公司）；可调式旋涡混合器（赛默飞世尔科技中国有限公司）；MTN-2800D型氮吹浓缩装置（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；SPE快速前处理装置（赛默飞世尔科技中国有限公司）；超纯水机（赛默飞世尔科技中国有限公司）；8011S型高速组织捣碎机（美国Waring公司）。

1.2试剂

正己烷、甲醇及乙腈（色谱纯，赛默飞世尔科技中国有限公司）；甲酸（色谱纯，天津科密欧试剂有限公司）；快速检测试剂盒（试剂盒组成见表1，北京六角科技）；实验用水为一级水。

1.3標准物质

溴代克仑特罗、苯氧丙酚胺、沙丁胺醇、特布他林、塞曼特罗、莱克多巴胺、塞布特罗、克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、马贲特罗、克伦特罗-D9、沙丁胺醇-D3（100μg/mL，天津阿尔塔）。

2.1内标溶液的配制

精密吸取克伦特罗-D9和沙丁胺醇-D3各100μL，置于10 mL棕色量瓶中，制成浓度为1μg/mL的内标使用液。

2.2标准工作溶液的配制

分别吸取11种标准物质各100μL，置于10 mL棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，配制成混合标准溶液储备液。吸取混合标准溶液储备液2 mL，置于10 mL棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀配制成浓度为200 ng/mL的混合标准溶液使用液。分别精密吸取0.025、0.125、0.25、0.5、1.25、2.5 mL混合标准溶液使用液置于5 mL棕色容量瓶中，分别加入0.25 mL内标使用液，用0.1%甲酸/乙腈稀释至刻度并混匀，配成浓度为1、5、10、20、50、100 ng/mL标准工作溶液，同时内标含量为50 ng/mL。

2.3样品前处理

2.3.1提取

称取经高速组织捣碎机均质后的组织样品2.00 g（精确到0.01 g）置于50 mL离心管中，加入内标使用液50μL，加入5 mL快速检测试剂盒中的提取剂1，振摇1 min后，加入8 mL快速检测试剂盒中的提取剂2，振摇3 min后，以4000 r/min离心3 min，取3 mL上清液于15 mL离心管中，再加入10 mL正己烷，混匀后以4000 r/min离心1 min。

2.3.2净化

将快速检测试剂盒内部附带的SPE小柱安装在固相萃取装置上，小柱上面接30 mL注射器。将离心好的15 mL离心管中的上清液全部转移至30 mL注射器中，打开固相萃取装置接头阀门，开启真空泵，注意控制流速，待液体全部缓慢流过固相萃取柱后，取下30 mL注射器，继续抽真空1 min后，关闭真空泵。将快速检测试剂盒内的1.5 mL离心管放入固相萃取装置中，向SPE小柱中加入快速检测试剂盒内附带的洗脱液1 mL，控制流速，待洗脱液全部缓慢流过SPE小柱，在45℃缓慢氮气气流下浓缩至近干，用流动相定容至1 mL，过0.22μm有机滤膜，上机测定。

2.4仪器条件

2.4.1色谱条件

色谱柱：Thermo C18（150 mm×2.1 mm，3μm）；流量：0.2 mL/min；柱温箱：30℃；进样量：10μL；流动相：A相0.1%甲酸/水，B相为0.1%甲酸/乙腈，后运行3 min。梯度洗脱程序见表2。

2.4.2质谱条件

离子源：ESI源；多反应监测正离子扫描模式（MRM+）；毛细管电压：4 kV；离子源温度：350℃；干燥气流流速：11 L/min；雾化器压力：15 psi。β-受体激动剂质谱参数见表3。

3.1结果

3.1.1色谱柱的选择

色谱柱的选择是待测组分分离效果好坏的重要因素。因此我们对Thermo C8和Thermo C18色谱柱进行了比较，β-受体激动剂在C8柱上保留效果较差，灵敏度低。实验选用C18色谱柱，8.0 min实现了β-受体激动剂良好分离，且峰型尖锐，灵敏度高。

3.1.2线性范围和检出限

上机测试6个不同浓度标准工作溶液，β-受体激动剂与内标物定量离子峰面积比值为纵坐标（Y），浓度为横坐标（X），绘制标准曲线进行线性回归分析。结果显示：在1～100 ng/mL范围内线性关系良好，相关系数r大于0.999，采取标准溶液不断稀释的方法，以信噪比（S/N>3）作为最终检出限，详见表4，可以满足猪肉中11种β-受体激动剂的测定。

3.1.3回收率和精密度

称取已检测过的阴性样品，每6个样品为1组共分为3组，分别加入适量混合标准使用液，制成0.5μg/kg、1μg/kg和5μg/kg低中高三水平浓度，并按照2.3所述方法进行处理，进样测定并计算回收率和RSD，计算结果见表5。结果显示：回收率在70.8%～92.0%，RSD在8.9%～15.2%，表明方法准确，回收率较好，精密度良好[9]。

3.1.4样品测定

分別在超市、农贸市场随机采购20批猪肉，在这20份样品中随机抽取5份样品添加标准物质使其成为阳性样品，分别采用本文阐述方法与GB 31658.22—2022《动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法》进行样品前处理，随后上机测试结果进行比较。实验结果显示采购的样品中均未检出β-受体激动剂，两种方法测得的阳性样品结果采用单因素方差分析，F值小于F临界值，P值大于0.05，表明两组数据差别不明显，说明建立的方法可行[10]。

3.2讨论

现行有效的食品安全国家标准中提及的提取方法，大多是β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶恒温水解样品，振荡时间长达16 h，耗时长，需要投入大量人力、物力和时间。本实验对猪肉中β-受体激动剂的提取进行了优化，使用实验所用提取方法，可以大大缩短提取时间，总体而言，可以满足猪肉中β-受体激动剂快速筛查的需要。

【参考文献】

[1]胡佳哲，梁贤凯，赖宇红.液相色谱-串联质谱法快速检测猪肉中25種β-受体激动剂[J].安徽农业科学，2018，46（23）：155-160

[2]李广兴，韩溪，吴岩，等.猪肉β-受体激动剂UPLC-MS/ MS检测方法建立与应用[J].东北农业大学学报，2015，46（12）：45-51.

[3]谢寒冰，蒋万枫，赵海峰，等.高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法测定猪肉中20种兽药残留量[J].理化检验-化学分册，2014，50（6）：702-707.

[4]陶威，张苏珍，田蕴，等.UPLC-MS/MS法测定水产品中7种喹诺酮类兽药残留[J].水产养殖，2023，5（3）：26-32，52.

[5]滕爽，吕青骎，沈娟，等.超高效液相色谱法检测猪肉及其制品中的磺胺类及氟喹诺酮类兽药残留[J].食品与发酵工业，2018（7）：263-268.

[6]李磊，李海畅，高婧，等.QuEChERS EMR-Lipid-LC/MS/ MS测定8种β-受体激动剂[J].食品研究与开发，2016，37（9）：178-182.

[7]高玉杰，张立佳，刘丽君，等.UPLC-MS/MS测定生乳与豆制饮品中咪唑烟酸残留[J].中国酿造，2023，39（2）：235-239.

[8]徐春奎，李艳，徐欣然，等.UPLC-MS/MS同时检测猪肉中10种磺胺类和10种喹诺酮类药物快速前处理方法研究[J].黑龙江畜牧兽医，2019（1）：135-139.

[9]实验室质量控制规范食品理化检测：GB/T 27404—2008.

[S].

[10]食品安全国家标准动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法：GB 31658.22—2022[S].

【作者简介】

通讯作者：师忠义，男，1968年出生，工程师，学士，研究方向为食品和药品分析。电子邮箱：2689502953@qq.com。

李鑫，男，1985年出生，副主任中药师，硕士，研究方向为中药学。

潘明迪，男，1987年出生，高级工程师，学士，研究方向为化学。

李雅静，女，1970年出生，正高级工程师，学士，研究方向为预防医学。

张磊，男，1981年出生，高级工程师，学士，研究方向为医学检验。

（编辑：李钰双）