实验室自制平板保存周期验证研究

刘静?屈倩如?张曼

摘 要：培养基是微生物试验的基础，培养基的质量控制直接关系到微生物试验的结果。本文配制了常见的致病菌分离平板，并分别于第1天、第8天、第15天用相应标准菌株接种划线培养观察。研究发现，实验室自制平板在妥善保存的条件下使用期限至少为15 d。

关键词：微生物；培养基；致病菌；验证

Research on Verification of Storage Cycle of Laboratory Homemade Plates

Abstract： The culture medium is the basis of microbial testing， and the quality control of the culture medium is directly related to the results of microbial testing. This article prepared common pathogenic bacteria isolation plates， and used corresponding standard strains to inoculate and streak cultures on the 1st， 8th， and 15th days respectively. It was found that if the laboratory-made plates are properly stored， they have a service life of at least for 15 days.

Keywords： microorganism; culture medium; pathogenic bacteria; validation

影響微生物试验结果与质量的因素有原材料、水质、灭菌效果、pH值等，其中有效的培养基是关键。培养基的质量控制直接影响微生物检验工作的准确性、可靠性，因此培养基的配制、保存的质量控制尤为重要[1]。应按照《实验室质量控制规范 食品微生物检测》（GB/T 27405—2008）[2]和《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》（GB 4789.28—2013）[3]对培养基进行严格的质量控制。实验室对自制平板的有效期进行验证，是对培养基进行质量控制的重要环节，可确保试验方法的有效性，保证检验结果的准确性。本文制备了实验室常用的致病菌分离平板，并通过培养实验对保存期进行了验证。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 标准菌株

鼠伤寒沙门氏菌：ATCC 14028；金黄色葡萄球菌：ATCC 6538；单核细胞增生李斯特氏菌：ATCC 19114；福氏志贺氏菌：ATCC 12022。

1.1.2 培养基

Baird Parker琼脂平板（B-P）、亚硫酸铋琼脂（BS）、木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂（XLD）、沙门显色培养基、PALCAM琼脂、李斯特氏菌显色琼脂和麦康凯琼脂培养基（MAC），以上培养基均购自北京陆桥技术有限责任公司。

1.2 仪器与设备

电子天平，深圳博途电子科技有限公司；高压蒸汽灭菌器，松下健康医疗器械（上海）有限公司；生物安全柜，美国/赛默飞世尔科技公司；生化培养箱，上海博讯实业有公司医疗设备厂。

1.3 试验方法

1.3.1 试验方案

将B-P平板、XLD平板、BS平板、沙门氏菌显色平板、PALCAM平板、李斯特氏菌显色平板及MAC平板配制好后于冰箱冷藏密封保存，分别于第1天、第8天、第15天用金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌及福氏志贺氏菌标准菌株接种划线相应的分离平板，观察各平板的状态及各标准菌株的生长情况。

1.3.2 试验方法

B-P平板参照《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》（GB 4789.10—2016）[4]进行试验；BS平板及沙门氏菌显色平板参照《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》（GB 4789.4—2016）[5]进行试验；PALCAM平板及李斯特氏菌显色平板参照《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验》（GB 4789.30—2016）[6]进行试验；MAC平板参照《食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验》（GB 4789.5—2012）[7]进行试验；XLD平板同时参照《食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》（GB 4789.4—2016）[5]和《食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验》（GB 4789.5—2012）[7]进行试验。

2 结果与分析

2.1 平板保存1 d时的变化及各标准菌株的生长情况

所有平板配制好后，于4 ℃冰箱中密封保存1 d，取出恢复至室温后进行试验：取金黄色葡萄球菌接种划线B-P平板；取沙门氏菌接种划线XLD平板、BS平板和沙门氏菌显色平板；取单核细胞增生李斯特氏菌接种划线李斯特氏菌显色平板和PALCAM平板；取福氏志贺氏菌接种划线XLD平板和MAC平板。由图1可以看出，所有平板均光滑、湿润、表面无水珠，未出现染菌现象，可用于分离划线；由图2可以看出，各标准菌株在相应的平板上生长良好，形态典型，有效分离出单菌落，各平板上的菌落形态见表1。

2.2 平板保存8 d时的变化及各标准菌株的生长情况

平板配制好后，于4 ℃冰箱中密封保存8 d，取出恢复至室温后进行试验：取金黄色葡萄球菌接种划线B-P平板；取沙门氏菌接种划线XLD平板、BS平板和沙门氏菌显色平板；取单核细胞增生李斯特氏菌接种划线李斯特氏菌显色平板和PALCAM平板；取志贺氏菌接种划线XLD平板和MAC平板。由图3可以看出，所有平板均光滑、湿润、表面无水珠、较第1天的状态干燥，无染菌现象，可用于分离划线；由图4可以看出，各标准菌株在相应的平板上依旧生长良好，形态典型，具体形态依旧如表1所示，能够有效分离出单菌落。

2.3 平板保存15 d时的变化及各标准菌株的生长情况

平板配制好后，于4 ℃冰箱中密封保存15 d，取出恢复至室温后进行试验：取金黄色葡萄球菌接种划线B-P平板；取沙门氏菌接种划线XLD平板、BS平板和沙门氏菌显色平板；取单核细胞增生李斯特氏菌接种划线李斯特氏菌显色平板和PALCAM平板；取志贺氏菌接种划线XLD平板和MAC平板。由图5可以看出，所有平板干燥，但无开裂现象及染菌现象，依旧可以用于分离划线使用；由图6可以看出，各标准菌株在相应的平板上仍然生长良好，形态典型如表1所示，能够有效分离出单菌落。

3 结论

随着时间的推移，未接种的平板的湿润度逐渐降低，但放置15 d的平板依旧保持完好状态，未出现干裂、脱水等现象，处于可使用水平，接种后各种菌落生长情况未出现明显差异，菌落生长情况良好。本次试验证明，实验室自制平板在妥善保存的条件下，使用期限至少为15 d，考虑到实验室实际使用平板情况，本次测试终止于15 d。研究结果为实验室自制平板的保存提供了一定的数据支撑，为实验室节约试剂耗材成本，更好地完成检验检测工作提供了参考。

参考文献

[1]王开校.培养基保存方法的改善[J].中国医药指南，2014，12（19）：110-111.

[2]国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.实验室质量控制规范 食品微生物检测：GB/T 27405—2008[S].北京：中国标准出版社，2008.

[3]国家卫生和计划生育委员会，国家食品药品监督管理总局.食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求：GB 4789.28—2013[S].北京：中国标准出版社，2013.

[4]国家卫生和计划生育委员会，国家食品药品监督管理总局.食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验：GB 4789.10—2016[S].北京：中国标准出版社，2016.

[5]国家卫生和计划生育委员会，国家食品药品监督管理总局.食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌：GB 4789.4—2016[S].北京：中国标准出版社，2016.

[6]国家卫生和计划生育委员会，国家食品药品监督管理总局.食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验：GB 4789.30—2016[S].北京：中国标准出版社，2016.

[7]國家卫生和计划生育委员会，国家食品药品监督管理总局.食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验：GB 4789.5—2012[S].北京：中国标准出版社，2012.