IGF-2、Ki-67在乳腺癌中的表达及其意义*

高 伟，李连宏

(1．大连市中心医院 普外三科,辽宁 大连116033；2.大连医科大学 病理与法医学 教研室,辽宁 大连 116044)

胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2，IGF-2)基因是第一个被证实的内源性印迹基因，它的印记丢失已经在乳腺癌等20多种肿瘤细胞中被发现。IGF-2作为一类多功能细胞生长调控因子,对细胞的增殖、分化、凋亡和转化起着调节作用，也可以与其他因素一起在乳腺癌发生机制中协同发挥作用。

本研究通过采用免疫组织化学SP法检测IGF-2在乳腺癌中的表达情况，以及与Ki-67表达的相关性，分析其与乳腺癌发生、转移及与肿瘤细胞增殖的关系。

1 材料和方法

1.1 材 料

收集2005年～2007年大连市中心医院病理科乳腺组织送检标本，乳腺癌、乳腺纤维腺瘤和乳腺增生组织石蜡包埋标本各40例，乳腺癌中浸润性导管癌29例，浸润性小叶癌11例，患者年龄30～73岁，平均年龄51.3岁。所有病例术前均未接受放疗或化疗。

IGF-2、Ki-67(鼠抗，单克隆，MID-1)、DAB显色剂及检测试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。

1.2 方 法

采用免疫组化SP法检测IGF-2、Ki-67的表达。所有标本均经10%中性福尔马林液固定，石蜡包埋，4 μm层厚连续切片，常规二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，阻断内源性过氧化物酶活性，抗原修复后血清湿盒内孵育，再陆续加入一抗(IGF-2，1∶75稀释；Ki-67，工作液)，二抗(即用型生物素标记的IgG)，三抗(链霉素抗生物素蛋白—过氧化酶液)，DAB显色，苏木素复染。每批染色均设置已知阳性对照，阴性对照以PBS替代一抗。

结果判断：在高倍镜下随机观察5个视野，IGF-2阳性表达部位在胞质，取阳性细胞占全部肿瘤细胞的百分比计数：按Kawamato的标准[1]，阳性细胞< 30%计为(-)，31%～50%为(+)，51%～80%为(++)，≥81%为(+++)，(++～+++)为强阳性。Ki-67阳性表达部位在胞核，阳性细胞占全部肿瘤细胞的百分比<5%计为(-)，5%～25%为(+)，26%～50%为(++)，≥50%为(+++)。

1.3 统计学方法

实验结果应用SPSS 10.0统计软件包分析处理，样品率的比较用四格表及行×列χ2检验，相关性用Spearman等级相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 IGF-2和Ki-67在不同乳腺病变中的表达

与对照组比较，虽然乳腺癌的IGF-2阳性表达率差异无显著性意义(P>0.05)；但是，强阳性表达率明显升高，差异有显著性意义(P<0.05)。见表1。IGF-2在不同乳腺病变中的强阳性表达见图1；Ki-67在不同乳腺病变中的表达见图2。

图1 IGF-2在不同乳腺病变中的表达

图2 Ki-67在不同乳腺病变中的表达

++～+++为强阳性，3组间强阳性表达比较，P<0.05

2.2 IGF-2和Ki-67在乳腺癌中表达的相关性

在乳腺癌组中，IGF-2和Ki-67二者表达呈正相关性。见表2。

表2 IGF-2和Ki-67在乳腺癌中表达的相关性

P<0.01,rs=0.433

2.3 IGF-2、Ki-67在乳腺癌中的表达与临床病理学特征的关系

IGF-2和Ki-67二者在不同年龄、不同组织学类型及不同受体情况中的表达差异无显著性意义(P>0.05)。二者在原发灶大小不同和淋巴结有无转移组间表达差异有显著性意义(P<0.05)。其中，淋巴结有转移组的阳性表达率明显高于无转移组；原发灶直径>2 cm组的阳性表达率明显高于原发灶直径≤2 cm组。见表3。

3 讨 论

IGF-2是一类小分子单链多肽类，其基因定位于染色体11P15，有研究已证实该基因的缺失会导致乳腺癌的发生[1]，而且IGF-2转基因小鼠的乳腺癌发生率明显增高[2]，说明IGF-2在基因水平对乳腺癌发生有十分重要的意义。研究显示，早期乳腺癌患者血清中游离IGF-2水平较正常人明显升高[3]，说明IGF-2与乳腺癌的发生关系密切。本研究显示，IGF-2在乳腺增生、乳腺纤维腺瘤和乳腺癌组织中的表达逐渐升高，在乳腺癌组中的强阳性表达明显高于另外两组，提示IGF-2与乳腺癌的发生发展密切相关。这可能是由于IGF-2可以刺激细胞增殖，刺激组织器官的生长、分化，因此肿瘤细胞的生长随着IGF-2表达的升高而有所促进[4]。

表3 IGF-2和Ki-67在乳腺癌中的表达与临床病理学特征的关系

分组nIGF-2阳性阳性率(%)Ki-67阳性阳性率(%)年龄(岁) ≤358675.0675.0 >35322784.42475.0原发灶直径(cm) ≤210550.0330.0 >2302893.32790.0淋巴结转移 有262492.32284.6 无14964.3857.1受体情况 ER+PR+11981.8872.7 ER+PR-131184.6969.2 ER-PR+8787.5787.5 ER-PR-8675.0675.0类型 浸润型导管癌292689.72379.3 浸润型小叶癌11763.6763.6

ER：雌激素，PR：孕激素

Ki-67是一种与细胞增殖有关的核抗原，也是目前较常用的核增殖标记物。本实验选用该指标与IGF-2在乳腺癌中联合检测，发现IGF-2、Ki-67在原发灶≤2 cm的乳腺癌组中表达明显低于原发灶>2 cm组 (P<0.05)，二者表达情况与原发灶的大小密切相关。二者在有淋巴结转移的乳腺癌中的表达明显高于无淋巴结转移组(P<0.05)。提示IGF-2不仅与乳腺癌的发展密切相关，而且参与乳腺癌的淋巴结转移。IGF-2必需与其受体结合才能发挥生物学作用[5]，有研究显示，IGF-2与IGF-1受体结合的多少与肿瘤在原发部位及远处转移部位的生长能力有关[6]。很多因素可以影响这种结合能力。本研究中IGF-2和Ki-67分别在不同乳腺癌患者年龄组和雌孕激素受体情况组中的表达差异无显著性意义(P>0.05)，提示年龄和雌孕激素受体对这种结合能力的影响不大，即对肿瘤的原发生长和远处转移的影响不大。

[1] Wu HK,Squire JA,Catzavelos CG,et al. Relaxation of imprinting of human insulin-like growth factor II gene,IGF2,in sporadic breast carcinomas[J]. Biochem Biophys Res Commun,1997,235(1):123-129.

[2] Sun FL,Dean WL,Kelsey G,et al.Transactivation of Igf2 in a mouse model of Beckwith- Wiedemann syndrome [J].Nature,1997,389:809-815.

[3] Espelund U,Cold S,Frystyk J,et al. Elevated free IGF2 levels in localized,early-stage breast cancer in women[J]. Eur J Endocrinol,2008,159(5):595-601.

[4] Ito Y,Koessler T,Ibrahim AE,et al. Somatically acquired hypomethylation of IGF2 in breast and colorectal cancer[J]. Hum Mol Genet,2008,17(17):2633-2643.

[5] Pacher M,Seewald MJ,Mikula M,et al. Impact of constitutive IGF1/IGF2 stimulation on the transcriptional program of human breast cancer cells[J].Carcinogenesis,2007,28(1):49-59.

[6] Slipicevic A,Y GF,Askidt IC,et al.Diagnostic and prognostic role of the insulin growth factor pathway members insulin-like growth factor-2 and insulin-like growth factor binding protein-3 in serous effusions[J].Hun Pathol,2009,40(4):527-537.