谷氨酰胺对兔梗阻性黄疸肠粘膜屏障的保护作用*

王常会 李 磊 魏 玮 王庆才

(泰山医学院附属泰山医院消化内一科，山东 泰安 271000)

梗阻性黄疸时，发生内毒素血症和肠道粘膜形态学改变，已被国内外学者公认[1],但对于其损害肠粘膜屏障的修复，临床上尚无有效治疗办法。谷氨酰胺是一种条件必需氨基酸，具有促进肠粘膜上皮细胞增殖的作用。本研究在建立梗阻性黄疸兔模型基础上，观察谷氨酰胺对梗阻性黄疸兔肠粘膜屏障功能损害的保护作用。

1 材料和方法

1.1 动物模型建立与分组

新西兰兔36只，体重2.5～3.5 Kg，购自山东省农科院。随机分为谷氨酰胺组(A组)、假手术组(B组)和黄疸模型组(C组)，每组12只。A组和C组建立梗阻性黄疸模型。兔术前12 h禁食，禁水4 h，清洗动物，备皮。动物称重后给予氯胺酮[5 mg·(Kg·h)-1]+地西泮[0.6 mg·(Kg·h)-1]经耳缘静脉麻醉，分离颈内静脉插管。A组和C组动物按无菌操作原则取上腹正中切口，游离胆总管下端，丝线提起，取小号封皮针同胆总管并排放置，扎紧丝线，撤出封皮针，回纳组织后，逐层关闭腹腔，B组动物只行静脉插管。术后10 min动物平稳后，A组给予注射丙氨酰谷氨氨酰胺1 mg·Kg-1，B组、C组动物给予等量生理盐水。

1.2 主要试剂及仪器

丙氨酰谷氨酰胺购自华瑞制药有限公司；血浆内毒素含量测定试剂盒购自厦门鲎试剂试验厂；二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒购自上海劲马生物科技有限公司；实体显微镜为Olympus s2x12型。

1.3 标本采集及预处理

各组动物于术后24 h取血后处死。血浆分离保存于-70℃冰箱内待检测。取距回盲部约5 cm处回肠组织，于冰浴下沿纵轴剪开肠管，清洗肠内容物，滤纸吸干水后福尔马林溶液固定，切片后行HE染色，由病理科医师观察病理学变化并采用Chiu氏6级评分法行病理评分[2],实体显微镜下观察肠粘膜形态变化。

1.4 统计学处理

2 结 果

2.1 血胆红素水平

24小时后A组和C组血中胆红素水平较B组明显升高(P<0.05), A组和C组之间比较无明显差别(P>0.05),说明部分结扎胆总管后可引起明显的高胆红素血症，梗阻性黄疸模型建立成功，见表1。

表1 胆红素水平比较

注：与B组比较，﹡P<0.05。

2．2 相关检测指标

24小时A组和C组相关检测指标(血内毒素水平、血DAO水平和病理评分)比较差异均有统计学意义(P<0.05)，两组同B组相比各指标差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 相关指标比较

注：内毒素水平：与B组比较，﹡P<0.01；与C组比较，△P<0.01。二胺氧化酶水平和病理评分：与B组比较，﹡P<0.05；与C组比较，△P<0.05。

2.3 HE染色图片

镜下病理所见小肠粘膜主要为以明显的非特异性炎症细胞浸润、间质充血水肿为主的炎症改变。

实体显微镜下观察各组肠粘膜变化可见，B组肠粘膜上皮绒毛连续，C组形成梗阻性黄疸后肠粘膜上皮绒毛出现明显不连续，广泛存在小凹陷，A组经谷氨酰胺干预后肠粘膜上皮绒毛可见较少的散在小凹陷，粘膜上皮比较连续。

3 讨 论

目前梗阻性黄疸模型的建立多通过胆总管的完全结扎形成，高胆红素血症表现较重，同临床表现有一定差距，本模型在通过以往研究的基础上改良实验方法，部分结扎胆总管，以更符合临床实际情况。在本实验的观察中，新西兰兔胆总管下端直径大约在2.0～2.5 mm左右，小号封皮针直径为1.0 mm左右，从而建模后胆总管狭窄程度为50%～70%。从而可以比较好的模拟临床中病人胆总管梗阻的情况。梗阻性黄疸多由于胆总管结石、炎症或邻近器官肿瘤造成胆总管狭窄引起，是临床上消化内科常见疾病。病人预后不佳除与营养不良、高胆红素血症相关外，有研究[3]表明内毒素血症和细菌移位以及逐渐出现的全身炎症反应综合症(SIRS)，甚至是多器官功能不全综合症(MODS)也同预后密切相关。梗阻性黄疸时内毒素血症的发生率高达24%～81%[4]，主要原因是由于梗阻性黄疸小肠中胆汁成分缺乏，造成肠粘膜的机械屏障(肠道粘膜上皮细胞、细胞紧密连接与菌膜)和生物屏障(正常菌群)损伤，引起革兰氏阴性杆菌大量繁殖，并产生内毒素通过肠粘膜屏障入血[5]。内毒素血症可进一步促发全身炎症反应综合症(SIRS)以及多器官功能不全综合症(MODS),甚至导致死亡[6]。因此在对于梗阻性黄疸的临床治疗中除了通过外科手术或逆行胆胰管造影(ERCP)等方式解除梗阻外，降低内毒素血症，预防SIRS的发生，对于病人的整个预后起到关键作用[7]。

谷氨酰胺( glutamine，Gln ) 是一种条件必需氨基酸, 作为肝内糖异生的重要底物，它是肠粘膜上皮细胞的主要能源燃料，同时可促进粘膜上皮细胞的再生和修复，对维持小肠粘膜屏障形态和功能完整性具有重要作用[8]。实验证明，在各种肠内或肠外营养中，添加Gln能逆转肠粘膜萎缩、修复肠粘膜、增强肠道免疫功能、防止肠道细菌移位。丙氨酰谷氨酰胺为含有Gln的双肽，体外稳定性良好，静脉注射后可以迅速于体内分解为Gln和丙氨酸，为机体提供稳定的Gln。

二胺氧化酶是一种参与组织胺代谢的细胞内酶，广泛存在于人类和哺乳动物的小肠粘膜上层绒毛中，同粘膜细胞内生物大分子合成密切相关。其血液中的含量可准确反映肠道粘膜机械屏障功能的完整性和损伤的程度[9]。本实验中应用谷氨酰胺组动物血中DAO水平明显优于梗阻性黄疸组，说明Gln可显著保护梗阻性黄疸动物肠粘膜屏障，同时两者之间血内毒素变化的明显差异也进一步证实了Gln在保护肠粘膜屏障，减少细菌移位、繁殖，降低内毒素血症的明显作用。

本实验在成功建立梗阻性黄疸模型的基础上，通过静脉注射Gln观察到了其在梗阻性黄疸中对肠粘膜屏障的保护作用，为临床梗阻性黄疸的治疗起到一定的指导作用。

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