毛细管GC法测定青蒿琥酯中有机溶剂的残留量

2010-05-22 11:39孙红英赵爱丽林振广
中国药房 2010年19期
关键词:琥酯二甲基甲酰胺青蒿

孙红英,赵爱丽,林振广

(山东省医药工业研究所,济南市 250100)

青蒿琥酯(artesunate),化学名为二氢青蒿素-10-a-丁二酸单酯,是青蒿素的衍生物。2006年,青蒿琥酯被世界卫生组织定为疟疾重症抢救的首选药物;1987年,获得中国一类新药1号证书。由于本品极微溶于水,因此在制备工艺中使用甲醇和乙酸乙酯等有机溶剂,但在国家药品标准中,没有对其残留溶剂进行控制[1]。为保证用药安全,笔者以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂,建立了毛细管气相色谱(GC)法测定青蒿琥酯中2种有机溶剂的残留量,方法快速、灵敏、简单、准确。

1 仪器与试药

6890型GC仪、7694E型自动顶空进样器(美国Agilent公司)。

青蒿琥酯标准品(山东省医药工业研究所合成室提供,批号:070822、070824、070826);甲醇、乙酸乙酯为色谱纯,N,N-二甲基甲酰胺为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:HP-5毛细管柱(以直径为0.25~0.18 mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为固定相);柱温:40℃,保持5 min,再以30℃·min-1的速度升至160℃;氢火焰离子化检测器,检测器温度为250℃;载气:高纯N2;流速:30 mL·min-1;进样口温度:200 ℃;分流比:20∶1。采用顶空进样法测定,顶空进样条件:加热温度100℃,加热时间45 min,进样量2 mL。在此色谱条件下,各溶剂分离良好,空白溶液无干扰。色谱见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 空白溶液的制备:精密量取N,N-二甲基甲酰胺2 mL,置顶空进样瓶中,作为空白溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备:称取甲醇300 mg、乙酸乙酯500 mg,置有适量N,N-二甲基甲酰胺的100 mL量瓶中,充分振摇溶解,加N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备液。精密量取贮备液5 mL,置50 mL量瓶中,加N,N-二甲基甲酰胺至刻度,摇匀,作为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备:精密称取青蒿琥酯0.2 g,置顶空进样瓶中,分别加N,N-二甲基甲酰胺2 mL,作为供试品溶液。

2.3 标准曲线的制备[2]

分别精密量取对照品贮备液0.10、0.25、0.50、1.00、1.50、2.0 mL,置10 mL量瓶中,加N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度,摇匀。取上述各溶液2 mL,置顶空进样瓶中,按“2.1”项下色谱条件分别进样。分别以甲醇、乙酸乙酯浓度(C)为横坐标,峰面积积分值(A)为纵坐标,制备标准曲线,得甲醇的回归方程为A=204.9C-0.1(r=0.9998),乙酸乙酯的回归方程为A=699.9C-0.7(r=0.9997)。结果表明,甲醇、乙醇乙酯进样浓度分别在0.03~0.605、0.05~1.002 mg·mL-1范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系。

2.4 精密度试验

取对照品溶液,按“2.1”项下色谱条件连续进样6次,记录色谱图。结果,甲醇为、乙酸乙酯的RSD分别为1.2%、1.7%,表明仪器精密度符合要求。

2.5 稳定性试验

取供试品溶液(批号:070822),按“2.1”项下色谱条件分别于0、2、4、6、8 h进样,测定峰面积。结果,RSD=1.15%,表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

2.6 重复性试验

取供试品(批号070822)6份,按“2.9”项下方法操作,测定供试品中乙酸乙酯的残留量平均为0.04%,均未检出甲醇,RSD=0.96%,表明本方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验

精密称取样品(批号:070822)0.2 g,共10份,其中一份加入2 mL N,N-二甲基甲酰胺,作为空白溶液。分别配制低(80%)、中(100%)、高(120%)3种浓度的对照品溶液,分别取2 mL,加入盛有样品的顶空进样瓶中;以“2.2.2”项下的对照品溶液作为对照,按“2.1”项下色谱条件分别进样。结果,甲醇的平均回收率为98.7%,RSD=0.73%;乙酸乙酯的平均回收率为99.1%,RSD=1.2%。两溶剂的平均回收率均在98.0%以上,符合要求[3]。甲醇、乙酸乙酯加样回收率试验结果分别见表1、表2。

2.8 最低检出限测定

将对照品溶液逐级稀释,分别取2 mL,置顶空进样瓶中,按“2.1”项下色谱条件进样,记录色谱图,直至信噪比为3∶1,此时的浓度即为最低检测限。结果,甲醇和乙酸乙酯的最低检出浓度分别为1.02、0.88 µg·mL-1。

表1 甲醇的回收率试验结果(n=9)Tab 1 Results of recovery test of methanol(n=9)

表2 乙酸乙酯的回收率试验结果(n=9)Tab 2 Results of recovery test of ethyl acetate(n=9)

2.9 样品测定

精密量取对照品溶液和供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件分别进样测定。结果,以外标法计算出3批样品的乙酸乙酯残留量分别为0.14%、0.09%和0.13%,3批样品中均未检出甲醇。

3 讨论

因青蒿琥酯极微溶于水,所以选N,N-二甲基甲酰胺为溶剂。国家药品标准中没有对青蒿琥酯残留溶剂的测定,为了保证用药的安全性,根据2005年版《中国药典》(二部)[4]的要求,将青蒿琥酯中甲醇和乙酸乙酯的限度定为0.3%和0.5%。经过验证,该方法线性、精密度、回收率、最小检测限等系统适用性试验结果均较好,能够准确、迅速地检测出青蒿琥酯中残留的甲醇和乙酸乙酯。

[1]国家药典委员会编.国家药品标准[S].WS-127(X-103)-2005(1).

[2]李福荣,史卫锋,夏作理.HPLC-MS法测定白花丹参中丹酚酸B的含量[J].中国药房,2007,18(21):1637.

[3]毛桂福,郭 涛.RP-HPLC法测定降压一号片中3组分的含量[J].中国药房,2007,18(22):1738.

[4]国家药典委员会编.中华人民共和国药典(二部)[S].2005年版.北京:化学工业出版社,2005:309.

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