川乌配法半夏对大鼠的长期毒性观察

刘 刚

四川省泸州市中医医院，四川 泸州 646000

真方白丸子为元代《瑞竹堂方》所裁，主要药物有川乌头、白附子、半夏、天南星、天麻及全蝎等。主治中风病之半身不遂，于明代中叶失传。目前该方被发掘出来后即受到学术界的看重，已成为目前治疗中风急性期中经络的一个主要方剂[1]。但该方中主药川乌头、白附子、半夏等不仅系有毒药物，且其中还存在传统的中药“十八反”配伍禁忌——川乌反半夏。本实验的目的是观察川乌配半夏对动物所产生的毒性反应，其首先可能出现的症状和严重程度，可能针对的靶器官及其恢复和发展情况，确定无毒反应剂量，为拟订临床使用安全剂量提供实验依据。现将川乌配半夏对大鼠的长期毒性实验结果报道如下。

1 器材

1.1 药物 由泸州市中医医院制剂室提供，按照川乌与法半夏在真方白丸子中的配伍比例，单独将2味药制成混合粉剂供实验应用，以下简称川乌配半夏方。

1.2 实验动物 清洁级SD大鼠，雌雄各半，购自泸州医学院实验动物中心。合格证号：川实动证第17号。动物实验在泸州医学院普通级实验室进行，温度：22-25℃。

1.3 仪器 血细胞计数仪sysmenxs－1000i(日本)，生化分析仪Rochemcdular800。

2 方法

选取清洁级SD大鼠80只，雌雄各半，分笼喂养，每笼10只，随机分成川乌配半夏方大剂量组（14.4g/kg），中剂量组（4.8g/kg），小剂量组（1.6g/kg），分别相当于成人剂量的45、15、5倍。每组20只（雌雄各10只）。空白对照组给予等体积蒸馏水，连续8周。每日观察记录大鼠一般状况如进食，行为活动，粪便等。每2周称体重1次，并及时调整用药剂量。末次给药24h后，每组选取10只大鼠(雌雄各半)，3%戊巴比妥钠麻醉（30mg/kg），从腹主动脉采血，检测血常规和血生化指标，并对主要脏器进行全面尸检，取心、肝、脾、肺、肾、脑等脏器称重，计算脏器系数。之后对上述主要脏器用4%多聚甲醛固定，进行常规病理学检查。各组余下大鼠停药观察1周后，同法处理，并检测上述指标。所得结果通过excel2003作统计学处理，用t检验比较组间差异显著性。

3 结果

3.1 对动物一般情况的影响 在给药期间，川乌配半夏方及空白对照组大鼠的外观体征、行为活动、进食量及粪便等状况正常，动物无一死亡。在灌胃后3周（20天）左右发现大鼠有掉毛现象。停药后观察1周，亦无明显变化。

3.2 对动物体重的影响 连续用药8周和停药1周，川乌配半夏方大、中、小剂量组大鼠体重正常增长，与空白对照组比较，体重变化无明显差异。结果见表1。

3.3 对动物脏器系数的影响 给大鼠连续用药8周和停药1周后，分别检测各组心、肝、脾、肺、肾、脑等主要脏器系数，各剂量组同空白对照组比较，各项指标无明显差异(P＞0.05)，表明给大鼠长期灌服川乌配半夏方，对大鼠的主要脏器重量无明显影响。结果见表2～3。

3.4 对大鼠血液学指标的影响 给大鼠连续用药8周和停药1周后，分别检测血常规中白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)、红细胞压积（Hct）等指标，各剂量组与空白对照组比较，除个别指标存在差异（P＜0.01和P＜0.05)外，绝大部分指标无明显差异(P＞0.05)，表明给大鼠长期灌服川乌配半夏方，对大鼠的主要血液学指标无明显影响。结果见表4～5。

3.5 对大鼠血液生化学指标的影响 给大鼠连续用药8周和停药1周后，分别检测各组大鼠总胆红素（TBIL）、血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)。各剂量组与空白对照组比较，除个别指标存在差异（P＜0.01和P＜0.05)外，绝大部分指标无明显差异(P＞0.05)，表明给大鼠长期灌服川乌配半夏方，对大鼠的主要生化学指标无明显影响。结果见表6～7。

表1 川乌配半夏方对大鼠体重增长的影响（±S,n=20,g）

表1 川乌配半夏方对大鼠体重增长的影响（±S,n=20,g）

用药时间 高剂量组 中剂量组 低剂量组 空白对照组给药前 209.75±17.00 212.00±22.27 206.50±22.42 223.00±21.00药后2周 216.75±18.05 217.00±23.90 211.00±20.47 232.00±20.40药后4周 227.00±18.74 222.75±23.21 216.00±23.11 242.00±21.35药后6周 250.00±25.30 238.50±27.07 240.00±28.46 253.00±21.93药后8周 266.25±22.74 255.00±32.79 261.50±32.60 262.00±26.76停药1周 27650±20.50 264.00±19.08 267.00±15.52 271.67±19.51

表2 川乌配半夏方用药8周后对大鼠主要脏器指数的影响（±S,n=10,g.100g体重-1）

表2 川乌配半夏方用药8周后对大鼠主要脏器指数的影响（±S,n=10,g.100g体重-1）

组别 心 肝 脾 肺 肾 脑大剂量组 0.31±0.02 2.90±0.27 0.32±0.10 0.57±0.07 0.56±0.09 0.62±0.05中剂量组 0.32±0.03 3.03±0.52 0.35±0.15 0.62±0.10 0.56±0.10 0.65±0.10小剂量组 0. 33±0.06 3.07±0.80 0.27±0.05 0.63±0.08 0.58±0.10 0.64±0.11空白对照组 0.29±0.05 3.00±0.52 0.32±0.10 0.70±0.40 0.50±0.12 0.68±0.09

表3 川乌配半夏方停药1周后对大鼠主要脏器指数的影响（±S.n=10,g.100g体重-1）

表3 川乌配半夏方停药1周后对大鼠主要脏器指数的影响（±S.n=10,g.100g体重-1）

组别 心 肝 脾 肺 肾 脑大剂量组 0.33±0.04 3.08±0.33 0.32±0.07 0.70±0.32 0.58±0.10 0.67±0.08中剂量组 0.35±0.08 3.26±0.66 0.35±0.12 0.65±0.11 0.58±0.13 0.67±0.06小剂量组 0.34±0.06 3.28±0.78 0.30±0.07 0.60±0.10 0.57±0.12 0.71±0.05空白对照组 0.29±0.05 3.00±0.52 0.32±0.10 0.70±0.40 0.50±0.12 0.68±0.09

表4 川乌配半夏方灌胃8周后对大鼠血液学指标的影响（±S.n=10）

注：与空白对照组比较,1）P＜0.01 2）P＜0.05

组别 WBC(109.L-1) RBC(1012.L-1) HGB(g.L-1) Hct（%） PLT (109.µl-1)大剂量组 9.60±2.77 7.82±0.61 144.71±12.80 43.20±3.21 1043.57±456.44中剂量组 7.68±1.251） 8.70±0.322） 154.25±3.352） 46.63±1.912） 1068.00±194.16小剂量组 2.64±0.64 8.26±0.15 146.33±5.31 44.70±1.72 1084.00±108.47空白对照组 4.42±0.57 6.83±0.93 140.75±5.72 39.60±4.16 1041.50±56.56

表5 川乌配半夏方灌胃8周后停药1周对大鼠血液学指标的影响（±S.n=10）

表5 川乌配半夏方灌胃8周后停药1周对大鼠血液学指标的影响（±S.n=10）

注：与空白对照组比较，1）P＜0.05

组别 WBC(109.L-1) RBC(1012.L-1) HGB(g.L-1) Hct（%） PLT (109.µl-1)大剂量组 5.37±1.09 7.85±1.07 148.78±14.74 44.11±4.44 1065.89±116.12中剂量组 5.02±2.20 8.17±0.751） 146.56±10.78 46.50±5.281） 1148.56±273.51小剂量组 4.45±1.76 7.94±0.441） 144.90±6.24 44.16±3.26 1098.70±258.58空白对照组 4.42±0.57 6.83±0.93 140.75±5.72 39.60±4.16 1041.50±56.56

表6 川乌配半夏方灌胃8周后对大鼠血液生化学指标的影响（±S.n=10）

表6 川乌配半夏方灌胃8周后对大鼠血液生化学指标的影响（±S.n=10）

注：与空白对照组比较,1）P＜0.01 2)P＜0.05

组别 TBIL(µmol.L-1) AST(U.L-1) ALT( U.L-1) BUN(mmol.L-1) Crea(µmol.L-1)大剂量组 4.23±3.52 250.50±93.77 115.90±110.001） 6.68±0.45 49.06±2.60中剂量组 2.31±0.31 225.40±26.93 51.90±33.272） 6.29±0.33 53.32±3.94小剂量组 1.63±0.45 201.70±83.01 41.40±12.111） 5.16±0.85 48.22±3.98空白对照组 1.60±0.26 31.80±5.64 158.00±24.72 6.04±0.79 37.32±2.06

表7 川乌配半夏方灌胃8周后停药1周对大鼠血液生化学指标的影响（±S.n=10）

表7 川乌配半夏方灌胃8周后停药1周对大鼠血液生化学指标的影响（±S.n=10）

注：与空白对照组比较,1）P＜0.01 2)P＜0.05

组别 TBIL(µmol.L-1) AST(U.L-1) ALT( U.L-1) BUN(mmol.L-1) Crea(µmol.L-1)大剂量组 1.84±0.49 193.88±35.062） 85.63±29.84 5.47±0.29 36.08±2.361）中剂量组 1.91±0.341） 158.44±34.741） 54.00±17.372） 6.38±0.88 39.29±3.121）小剂量组 1.52±0.35 133.30±49.61 45.70±7.13 6.65±0.66 33.91±4.601）空白对照组 1.60±0.26 31.80±5.64 158.00±24.72 6.04±0.79 37.32±2.06

3.6 病理学检查 给大鼠连续用药8周和停药1周后，分别处死动物，剖取各组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等脏器。首先进行肉眼尸检，主要脏器外形、体积、色泽均属正常，无充血、肿胀、坏死等异常现象（仅大剂量组1只雌性大鼠出现肺实变现象，剪开后见脓液。可能是灌胃时少量药物渗入肺后感染所致）。然后，各脏器用4%多聚甲醛溶液固定48h后，按常规方法做病理切片，HE染色后光镜下检查。结果表明，川乌配半夏方大、中、小剂量组大鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等脏器进行全面肉眼尸检，用药组和对照组均未见异常。病理组织学检查，大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑等脏器组织形态学均为正常，与空白对照组比较，未明显见到由于药物毒性引起的病理改变。因此，证明给大鼠长期灌胃川乌配半夏方不影响动物器官组织形态学。

4 讨论

真方白丸子为治疗中风病的专方，方中主要药物川乌头等不仅有毒性，而且川乌与半夏还属于传统“十八反”中的配伍禁忌。但川乌与半夏是否能相配使用，古今一直存在争议。孙氏对405首半夏与乌头相配的古方进行了分析，认为传统的“十八反”与临床情况并不一致[2]。目前最新版的药典也未再提“十八反”，而只是用“不宜”来提示配伍注意事项[3]。但真的将其配伍应用后，其毒性如何，只凭临床观察，没有动物毒理实验支撑，缺乏足够的说服力。本实验结果表明，将川乌与半夏按其在真方白丸子中的剂量比例制成粉剂，以大剂量组（14.4g/kg），中剂量组（4.8g/kg），小剂量组（1.6g/kg），分别相当于成人剂量的45、15、5倍，连续给大鼠灌胃给药8周及停药1周后，与空白对照组比较，动物的一般状况、体重、主要脏器系数无明显差异；血液学指标、血液生化学指标检查，各剂量组的各检测项目与空白对照组比较，虽有个别检测指标存在一定差异，但其测定值仍在正常值范围内，故无实际意义。主要脏器的病理检查表明，组织形态学正常，未见与药物毒性相关的明显病变。说明川乌配半夏方对大鼠未出现严重的毒副反应，未显示明显的中毒靶器官，停药一周后也未见药物延迟性毒性反应。表明川乌配半夏方毒性不大，推论在真方白丸子中川乌配半夏及临床拟用剂量应是安全的。

[1]周仲瑛.新世纪（第二版）中医内科学[M].北京：中国中医药出版社，2007：309.

[2]孙世发.十八反药物半夏与乌头同方应用的文献理论探讨[J].湖南中医药学报，1999，5（12）：40－41.

[3]国家药典编委会编.药典2010年版（第一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010，1：38－111.