HPLC 法测定利血平注射液中利血平的含量

肖音，郭伟英（辽宁医学院，锦州市121001）

利血平注射液是由枸橼酸、L-盐酸半胱氨酸、硫脲、浓氨水、丙二醇、注射用水制成的肌肉注射用制剂，其通过抗去甲肾上腺素能神经产生降低血压的作用，临床用于高血压危象。利血平注射液载于《中国药典》2005版[1]，其含量测定方法采用紫外吸收分光光度（UV）法。由于该制剂中辅料多达6种，所以用UV法进行含量测定时，需进行复杂的预处理，如采取不同溶剂进行多次提取，不仅操作烦琐且提取时所用的氯仿等有机溶剂对操作人员身体有严重损害。而目前尚未见关于以高效液相色谱（HPLC）法测定利血平注射液中利血平含量的文献报道[2～4]。笔者在本文中建立了以HPLC法代替UV法测定该制剂含量的方法。结果表明，该法简便、精确，可用于利血平注射液的含量测定。

1 仪器与试药

FL2200 HPLC仪、FL2200紫外检测器、FL9500S色谱工作站均由浙江温岭福立分析仪器有限公司提供；BS223S型电子天平（北京赛多利斯系统有限公司）。

利血平注射液（广东邦民制药厂有限公司，批号：20080306、20080712、20080904，规格：1 mg·1 mL－1）；利血平标准品（中国药品生物制品检定所，批号：100041-200311，纯度：99.99%）；甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为自制重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Venusil XBP-C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（52∶48，用冰醋酸调酸度为pH＝（3±0.2））；检测波长：268 nm；流速：1 mL·min－1；柱温：28 ℃；进样量：10 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 标准品溶液的制备。精密称取利血平标准品10 mg，置于100 mL容量瓶中，甲醇溶解并加至刻度，摇匀，即得浓度为0.1 mg·mL－1的标准品溶液，备用。

2.2.2 供试品溶液的制备。取利血平注射液以1支，精密量取1 mL置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性样品溶液的制备。按处方比例取不含利血平的其它成分，照生产工艺和“2.2.2”项下方法制成缺利血平的阴性样品溶液。

2.3 专属性考察

分别吸取标准品贮备液、供试品溶液和阴性样品溶液各10 μL，按上述色谱条件进样测定。结果，利血平的保留时间约7.4 min，主峰与辅料峰分离良好，且阴性样品无干扰，色谱见图1

图1 高效液相色谱图A.标准品；B：阴性样品；C.供试品；1.利血平Fig 1 HPLC chromatographyA.standard sample；B.negative control；C.test sample；1.reserpine

2.4 标准曲线的制备

精密吸取上述标准品溶液适量，加入甲醇稀释至不同浓度4、6、8、10、12、14、16 μg·mL－1，分别取10 μL注入色谱仪，按上述“2.1”项下色谱条件测定。以进样量（x，μg·mL－1）为横坐标，峰面积（y）为纵坐标制备标准曲线，得回归方程为y＝4.870 2x+0.208 5（r＝0.999 1）。结果表明，利血平检测浓度在4～16 μg·mL－1范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.5 精密度试验

取浓度为10 μg·mL－1的标准品溶液10 μL，重复进样6次，测定。结果，RSD＝0.37%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一批样品（批号：080306）6份，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，各取样10 μL测定，结果，计算得含量的RSD＝1.1%，表明方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

取同一批供试品溶液10 μL分别于0、2 、4 、6、8、10、12 h进样，测定。结果，峰面积的RSD＝0.84%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.8 加样回收率试验

取已知含量的利血平注射液，分别精密加入利血平标准品适量，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，计算加样回收率，结果见表1。

2.9 样品含量测定

取3批样品（批号分别为20080306、20080712、20080904），照“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定利血平的峰面积，计算含量，并与UV法测定结果进行比较，见表2。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

表2 样品含量测定结果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3）

3 讨论

利血平在218、268、292 nm波长处均有最大吸收，其中以在268 nm波长下吸收最强，故确定最大吸收波长为268 nm。

《中国药典》采用UV法测定利血平注射液含量时，由于制剂中辅料过多且结构对测定造成干扰，所以必须进行多次提取，步骤烦琐，且提取时用到了氯仿等高致癌有机溶剂，这些问题都可以通过本文的HPLC法得到解决，采用HPLC法可以直接进样测定。

因国内尚未有关HPLC法测定利血平注射液含量的文献报道，所以笔者建立的HPLC法对利血平注射液的含量测定方法是一种有益的补充，且本文方法与UV法测得利血平注射液含量的结果基本一致，但与后者相比较，本法测定结果更准确，精密度高，操作更简便。

[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：264.

[2]梁选革，石慧秋.HPLC法测定复方利血平片中利血平的含量[J].中国药房，2007，18（25）：1 978.

[3]王 昕，孙 悦，米亚娴.HPLC法测定复方降压平片中利血平的含量[J].天津药学，2003，15（6）：15.

[4]欧阳晓梅，何英梅，常 琦.RP-HPLC法测定利血平片剂的含量[J].中国药事，2003，17（12）：758.