保肝益胃合剂治疗大鼠急性肝损伤的实验研究

王 哲 姜树民 辽宁中医药大学附属医院（110032）

保肝益胃合剂治疗大鼠急性肝损伤的实验研究

王 哲 姜树民 辽宁中医药大学附属医院（110032）

目的 探讨保肝益胃合剂对急性肝损伤大鼠的治疗作用。方法 将100只Wister大鼠随机分为7组，连续灌胃给药7天，以CCL4腹腔注射建立大鼠肝损伤模型，造模后检测各组大鼠血清中AST，ALT的含量，取肝脏组织进行病理检查。结果 模型组与空白对照组相比，具有显著性差异（P＜0.01）。各给药组中，与AST，ALT模型组相比较，保肝益胃合剂高剂量组和易善复对照组的血清AST，ALT显著降低，结果有统计学意义(P＜0.05)，其他组无统计学意义(P＞0.05)。模型组大鼠肝组织结构严重破坏，保肝益胃合剂高剂量组大鼠肝脏组织结构轻度破坏，其它各组的肝组织破坏程度均轻于模型对照组，但不如保肝益胃合剂高剂量组。结论 保肝益胃合剂对CCL4所致的大鼠急性肝损伤有一定的保护作用。

保肝益胃合剂；急性肝损伤；大鼠

肝损伤是临床常见的危害人类健康的疾病，肝损伤涉及的病理因素比较广泛，许多因素，如病毒、生物、药物、理化、酒精等，都可以导致肝损伤。医学科学国际组织委员会认为：如肝功能异常持续时间不超过3个月，为"急性肝损伤"。急性肝损伤若长期存在往往是导致肝纤维化，甚至肝硬化、肝癌发生的重要始动因素[1]，防治急性肝损伤是临床肝病治疗的主要环节之一。本研究观察具有宁络护膜、护肝和胃之功效的保肝益胃合剂治疗CCL4所致的大鼠急性肝损伤的药理作用，研究结果如下：

1 实验材料

1.1 动物 Wister大鼠100只，雌雄各半，体重200～250g，SPF级，购买于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号：scxx（京）2006-0009。

1.2 试剂 CCL4，500ml，沈阳市东兴试剂厂，批号：2009年09月25日。大豆油，500ml，嘉里粮油（营口）有限公司，食品生产许可证：QS210802010025。生理盐水，500ml，浙江康乐药业股份有限公司，生产批号：09013115。

1.3 药物 保肝益胃合剂汤剂：茵陈30g，黄芪10g，白及15g，苦参10g，苏梗10g，公英15g，砂仁10g，五味子15g。购买于辽宁中医院众意愿大药房。由辽宁中医药大学附属医院中医药实验中心煎制。煎制过程如下：取3倍处方量的药物，总量为345g，煎煮两次。第一次加10倍量水，即3450ml，煎煮90分钟，滤出药液。第二次加8倍量水，即2760ml，煎煮60分钟，滤出药液。两次滤液混合后浓缩，最后体积为115ml。该药物浓度为300%。

西药对照药：易善复，赛诺菲安万特（北京）制药有限公司，产品批号：D9071。

中药对照药：甘利欣，江苏正大天晴药业股份有限公司，产品批号：090505。

2 分组及给药方法

①空白对照组：生理盐水 20ml/kg 2次/d。②模型对照组：生理盐水 20ml/kg 2次/d。③西药对照组：易善复胶囊 100 mg/kg/d (0.25% 20ml/kg 2次/d )。④中药对照组：甘利欣胶囊 50mg/kg/d (0.125% 20ml/kg 2次/d )。⑤保肝益胃合剂低剂量组：10g/kg/d (50% 10ml/kg 2次/d )。⑥保肝益胃合剂高剂量组：30g/kg/d (100% 10ml/kg 2次/d )。⑦保肝益胃合剂低剂量+ 易善复组：保肝益胃合剂10g/kg/d + 易善复100 mg/kg/d。

3 实验方法

①大鼠适应性喂养3天。②按上述分组，第4天开始给药，连续灌胃给药7天。③给药后第7天早，建立肝损伤模型，以CCL42ml/kg腹腔注射。空白对照组用大豆油（1ml/100g）灌胃，禁食供水24h。④大鼠造模24h后，给予乌拉坦（25% 4ml/kg ip）麻醉，腹主动脉取血，静置30min，3000r/min，离心20min，制备血清。取右叶肝脏，置于10%甲醛保存。

4 检测指标

①血清中AST，ALT的含量。②肝脏组织进行甲醛固定，石蜡包埋切片，HE染色，进行病理检查。

5 统计方法

6 实验结果

6.1 血清AST，ALT检测 模型组与空白对照组相比，P＜0.01，具有显著性差异。各给药组中，与AST，ALT模型组相比较，保肝益胃合剂高剂量组（30g/kg/d）和易善复对照组的血清AST，ALT结果P＜0.05，有统计学意义，其他组P＞0.05，无统计学意义。（统计结果见表）

表1 保肝益胃合剂对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤AST和ALT的影响

表1 保肝益胃合剂对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤AST和ALT的影响

注：与空白组比较，△△P＜0.01，与模型组比较，＊P＜0.05

组别 给药剂量(g/kg/d) 动物数(n) AST(U/L) ALT(U/L)空白组 -- 12 101±28 50±15模型组 -- 10 4496±2616△△ 908±363△△低剂量组 10 10 3662±1504 830±281高剂量组 30 10 2350±1540＊ 529±301＊低剂量+易善复组10+0.1 11 2764±1295 743±417甘利欣组 0.05 10 3044±1280 538±426易善复组 0.1 10 2524±1380＊ 594±280＊

6.2 肝组织病理学检测 实验结果表明：模型组大鼠肝组织结构严重破坏，肝小叶不完整，细胞排列紊乱。部分肝细胞发生明显的脂肪变性、坏死。汇管区见大量炎细胞浸润，与模型组相比，保肝益胃合剂高剂量组大鼠肝脏组织结构轻度破坏，细胞排列较整齐，肝细胞脂肪变性及炎细胞浸润都明显减轻。其它各组的肝组织破坏程度及脂肪变性、坏死、炎细胞浸润等肝组织的保护作用均优于模型对照组，但不如保肝益胃合剂高剂量组。

7 讨论

肝脏疾病常常波及到肝外组织器官。CCL4 建立大鼠肝损伤模型主要是通过破坏肝细胞膜剂内膜结构损伤或坏死，引起肝细胞的破坏，从而使胞浆中的成分释放入血。AST、ALT水平是肝损伤疾病中诊断最为敏感的指标，肝细胞受损时酶从细胞中逸出，导致其血清水平显著升高。

本研究参照施新猷[2]方法复制急性肝损伤模型，通过灌胃CCL4研究急性肝损伤伴发胃粘膜的损伤情况。实验结果提示，模型组大鼠血清中AST，ALT均显著升高，预先给予肝胃合剂高剂量组（30 g/kg/d）的大鼠血清中AST，ALT均明显下降。肝脏病理学检测结果也提示肝胃合剂对CCL4所致的肝损伤有一定的保护作用。

中医学认为引起急性肝损伤的病因多为感受时邪，或饮酒过度，或情志失调，或久病体虚等，急性肝损伤发病主要是肝脏受伤，但其中包含胃气受伤、正气不足的因素，故笔者提出治疗肝损伤时，应该用调肝保肝与保胃气并举的方法，故拟保肝益胃合剂用于治疗急性肝损伤，每于临床获效。方中苦参、黄芪相配，一苦一温，一升一降，茵陈利湿退黄、解毒疗疮；白及收敛止血、清热利湿、消肿生肌；紫苏梗宽胸利膈除胀满；蒲公英苦寒清降、消肿散结；砂仁和胃气降湿浊；五味子酸甘养阴、护肝利胆。诸药配伍，共奏宁络护膜、护肝合胃之功效。

[1] 杨铂,崔爱庆.中医药防治肝损伤机制研究进展[J].山东中医药大学学报,2005,29(3):246-249.

[2] 施新猷.现代医学实验动物方法学[M].人民医学出版社,1999:457.

10.3969/j.issn.1672-2779.2010.18.135

1672-2779（2010）-18-0181-02

2010-07-30）