正交试验法优化消风胶囊中牛蒡子的提取工艺

余 辉 张 卫 江苏省张家港市中医医院（215600）

正交试验法优化消风胶囊中牛蒡子的提取工艺

余 辉 张 卫 江苏省张家港市中医医院（215600）

目的 优化消风胶囊中牛蒡子的提取工艺。方法 采用正交试验法，以提取液中牛蒡苷的含量为考察指标，对影响水煎提取效果的加水量、煎煮时间、煎煮次数等3个因素进行研究，用HPLC测定消风胶囊中牛蒡子苷的含量。结果 消风胶囊的最佳提取工艺为A2B1C2，即加水量为10、8倍，提取时间为2、1.5小时。结论 该实验所优选的工艺得到的干浸膏率和牛蒡苷的含量最高。

消风胶囊；牛蒡子；牛蒡子苷；提取工艺；正交试验设计

消风胶囊是根据《医宗金鉴》之处方消风散衍化而成,由牛蒡子、苦参、防风、荆芥、蝉蜕、知母等11味中药材组成，具有疏风养血、清热除湿之功效，主要用于治疗荨麻疹、湿疹、糠疹、皮炎等瘙痒性皮肤病。牛蒡子味辛、苦、性寒、归肺、胃经，具有疏散风热、解毒透疹、利咽消肿等功效，主要用于治疗外感风热，咽喉肿痛，发热咳嗽；麻疹初期，疹出不畅；风热疹痒；热毒疮肿；痄腮；咽喉肿痛等[1]；民间用于治疗风热感冒、流行性腮腺炎、风疹、痈肿疮疡、梅毒、坏血症等[2,3]，现代药理学证明有抗菌、抗肿瘤、降血糖等作用[4,5]。牛蒡子的主要化学成分为牛蒡子苷、牛蒡子苷元[6]，牛蒡苷具有很强的药理作用，故本研究选择牛蒡苷的含量作为水提正交工艺研究的评价指标，对影响水煎提取效果的加水量、煎煮时间、煎煮次数等3个因素进行研究，用HPLC法测定消风胶囊中牛蒡子苷的含量对消风胶囊水提取工艺进行优化研究。

1 仪器与材料

SPD-10A、LC-10AT高效液相色谱仪；TG328A电子分析天平；循环水式多用真空泵SHB-ⅢA(上海豫康科教仪器设备有限公司)；数显恒温水浴锅HH-4(国华电器有限公司)；2102超声波清洗器（上海安谱科学仪器有限公司）；DHG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱(上海浦东荣丰科学仪器有限公司,上海圣欣科学仪器有限公司)；消风胶囊（张家港市中医医院自制）；牛蒡苷对照品（购自中国药品生物制品检定所 批号0818-200203 供含量测定用）；水为超纯水，乙腈为色谱纯(购自国药集团化学试剂有限公司 批号07020211)，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 正交试验设计 选用L，(34)正交表，以牛蒡苷的提取率为考核指标，考察水提取中的加水量（A）、煎煮时间（B）和煎煮次数（C）三个因素，每个因素设三水平。其因素水平见表1。

表1 正交试验因素水平表

2.2 样品提取液的制备 按处方配比称取药材适量，按正交试验表进行水提取，药液抽滤，滤液浓缩至1000ml，备用。

2.3 牛蒡子苷含量的测定

2.3.1 正交试验法提取牛蒡子苷 供试品溶液的制备[7]：取处方量的药材共计121g,煎煮后合并煎液,抽滤,滤液浓缩后定容至1000ml，量取20ml，经微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。精密量取50ml液体置干燥恒重的蒸发皿中于水浴锅上蒸干,转移至105℃烘箱干燥，测重，每份样品平行测两份，计算得干浸膏得率（%）。

对照品溶液的制备[7]：精密称取干燥的牛蒡苷对照品16.40mg，置25.0ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.656mg/ml的牛蒡苷对照品溶液。

2.3.2 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，用外标一点法计算，即得牛蒡苷含量。正交试验结果见表2。

表2 正交试验结果

表3 干浸膏得率的方差分析

表4 牛蒡苷含量的方差分析

从正交结果可知：各因素对干浸膏得率影响大小顺序为：A（加水量)＞C(煎煮次数)＞B(煎煮时间)；每个因素三个水平之间的趋势为A2＞A1＞A3,B1＞B2＞B3,C3＞C2＞C1。各因素对牛蒡苷含量的影响大小顺序为：A＞B＞C；每个因素三个水平之间的趋势为A2＞A1＞A3, B1＞B2＞B3,C2＞C3＞C1。直观分析得到本实验的最佳提取工艺是A2B1C2，即加水量为10、8倍，提取时间为2、1.5h。方差分析结果表明：A、B、C三个因素均无显著性差异。

2.3.3 色谱条件的选择[8]色谱条件BDS Hypersil C18色谱柱（5μm，4.6mm×250mm）；流动相为乙腈∶水（23:77）；测定波长280nm；流速1mL/min；进样量10μL，理论板数按牛蒡苷峰计算应不低于1500。

2.3.4 标准曲线的制备 精密吸取牛蒡苷对照品溶液（0.656mg/ml），分别进样2μL、4μL、6μL、8μL、10μL，注入高效液相色谱法仪，测定，以牛蒡苷进样量为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为：A=464359C—96301，R2=0.9981。结果表明：牛蒡苷进样量在1.312～6.56μg范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系。牛蒡苷线性考察结果见表5。

表5 牛蒡苷线性考察结果

2.3.5 精密度试验 精密吸取取牛蒡苷对照品溶液（0.656mg/ml），进样10μl，重复进样5次，测定色谱峰面积，其RSD为1.7240%（n=5），结果表明本法精密度良好.附图1、附图2

表6 精密度试验结果

2.3.6 重现性试验 称取处方量的药材共五份，按最佳提取工艺A2B1C2制备供试品溶液，进样10μL，分别测定其峰面积，求出RSD=1.80%，结果表明本方法重现性良好，附图3。

表7 重现性试验结果

3 讨论

3.1 正交实验结果分析 从方差分析表中的统计量的值可以知道，三个因素都是不显著的，即通过方差分析不能确定最好的水平组合。只能通过直观分析得到本实验的最佳提取工艺是A2B1C2，即加水量为10、8倍，提取时间为2、1.5h。

3.2 提取方法的选择 口服液体制剂消风合剂为张家港中医院自制制剂，临床疗效确切，成效显著，但合剂生产工艺原始，质量标准偏低，且服用量大，不便携带，胶囊剂可以提高药物的稳定性及生物利用度，服用量小，便于携带，故进行了胶囊剂的研究。牛蒡子为本处方之君药，其主要成分和活性成分为牛蒡苷，牛蒡苷极性较大，一般可溶于水，易溶于热水、稀醇。考虑到大生产的成本及原合剂的生产工艺，故本次实验选用水提取工艺，但本实验结果表明采用水提工艺进行牛蒡子的提取，其影响因素无显著性差异。有研究表明采用70%的乙醇提取牛蒡子所得有效成分较高，鉴于时间关系，本次实验未进行牛蒡子水提和醇提的差异比较，还有待于进一步实验研究。

3.3 流动相的选择 本研究曾采用《中国药典》一部牛蒡子项下的流动相甲醇：水（1:1）进行预试，结果样品分离不理想，后参考了药典中羚羊感冒片【含量测定】项下牛蒡子的测定方法，以乙腈-水为流动相，结果采用乙腈-水（23:77）进行分离，可获得较好的效果。

附图1 牛蒡子对照品1

附图2 牛蒡子对照品2

附图3 牛蒡苷样品4

[1] 颜正华.中药学[M].北京:人民卫生出版社,1995,89.

[2] 中国医学科学院药物研究所.中药志(Ⅲ)[M].北京:人民卫生出版社,1984,23.

[3] 孙文基.牛蒡子中牛蒡子苷及其苷元薄层扫描内标法测定[J].药物分析杂志,1993,13:178.

[4] 长谷川雅子.牛蒡子苷元和高米辛A对免疫性肾炎的抑制作用[J].国外医学.中医中药分册,1991,13:117.

[5] 长谷川雅子.五味子、牛蒡子、细辛成分的抗肾病变作用[J].国外医学.中医中药分册,1990,12:367.

[6] 江苏新医学院.中药大辞典(上册).上海:上海人民出版社.1977:431.

[7] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典2005年版(一部)[Z].北京:化学工业出版社,2005.

[8] 孙文基,沙振方,高海.牛蒡子中牛蒡苷及其苷元反相高效液相色谱法测定.药学学报,1992,27(7):549-551.

10.3969/j.issn.1672-2779.2010.18.173

1672-2779（2010）-18-0236-03

2010-05-10）