不同产地白术中主要化学成分的含量比较

王 宁 左 坚 安徽中医药高等专科学校（241000）

不同产地白术中主要化学成分的含量比较

王 宁 左 坚 安徽中医药高等专科学校（241000）

白术；指纹图谱；毛细管电泳；产地

白术（Rhizoma atractylodis macrocepephaleae）为菊科植物白术（Atractylodes macrocephala koedz.）的干燥根茎。始载于《神农本草经》，在我国有着悠久的使用历史，具有补脾、益胃、燥湿、和中的功效。传统主产于浙江盘安、新昌、嵊县，安徽歙县、黄山、宁国一带。全国20多个省(自治区)有栽培、少有野生[1]。目前，对于白术的成分研究证实，其主要含有亲脂性的萜类成分，其中苍术酮含量最高，而白术内酯活性较高，作为白术品质比较的主要客观条件。现针对主要白术产区的样品中的苍术酮和白术内酯I的含量进行测定比较，以期对于不同产地的白术品质差异作出初步判断[2]。

1 仪器和材料

彩陆高效毛细管电泳色谱仪（北京彩陆科学仪器公司），开口50μm内径石英毛细管（河北永年），760CRT紫外可见紫外分光光度计（上海分析仪器公司），HW2000双通道色谱工作站（上海千谱公司），超声淸洗仪（昆山），电子分析天平。

硼砂（国产分析纯），重蒸馏水（自制），苍术酮及白术内酯标准品（自制，经HPLC按面积归一化法分析，纯度达99%），白术样品（产地自采，经安徽中医药高等专科学校王宁副教授鉴定为菊科植物白术（Rhizoma atractylodis macrocepephaleae）的干燥根茎，具体来源见表1）。

表1 白术样品来源

2 实验方法和结果

2.1 色谱条件 采用区带电泳的方式进行分离，选用开口无涂层石英管，分离长度40cm，以50mmol/l的硼酸水溶液为缓冲溶液，分离电压22KV，分离时间10min，每两次进样间隔以缓冲溶液冲洗2min。进样高度15cm，进样时间5S。

2.2 样品液制备方法的确定 毛细管电泳的基本基质为水溶液，故提取溶液以水为主。为防止挥发性成分的过分散失，提取过程选择在常温条件下进行。通过对比，发现超声提取效率高于冷浸法。提取20min后，提取液的干燥残留物和紫外吸光度不再变化。最终确定制备方法为：白术样品打成粗粉，取1g，以重蒸馏水10ml浸泡30min，后超声20min，过滤得滤液，再通过微孔滤膜，得样品液。

2.3 标准品及对照溶液的制备 将白术粉碎后，过20目筛，取4kg，用70%乙醇渗漉，合并乙醇渗漉液，减压回收乙醇，乙醇浸膏以醋酸乙酯。水处理，弃去水层，经硅胶柱层所，以石油醚(30～60℃)、醋酸乙酯梯度洗脱，反复薄层精制，共得到七个单体化合物。根据熔点和红外光谱特征，确定苍术酮及白术内酯I的标准品，分别以HPLC分析，面积积分百分比大于99%。将以上两种对照品，分别以重蒸馏水，超声辅助溶解，配制成浓度为0.0514mg/mL和0.0412mg/mL的对照溶液储备液待用。

2.3 测定波长的确定 将上述样品滤液及对照品，在190～800nm波长范围内做全波长扫描，发现样品最大吸收波长在200nm附近。而苍术酮及白术内酯I的紫外最大吸收峰均于220nm处，但在附近波长范围内均有明显吸收。考虑到分离度对于测定结果的影响，最终确定以分离良好，信号强度适中的200nm为检测波长。

2.4 色谱条件的确定 首先尝试磷酸氢钠，硼酸水溶液作为缓冲溶液，发现前者出峰数目少，且不能很好分开，以氢氧化钠调节无明显改善。然后分别采用25mmol/l，50mmol/l，75mmol/l，100mmol/l的硼酸水溶液作为缓冲溶液，以50mmol/l浓度分离效果较好。分离电压较高时，分离效果较好，但峰过于集中，且电流较大，引起明显干扰，最后确定22KV为分离电压。以上述条件分离一个样品，记录色谱信息30min，发现10min内出峰基本完全。采用常规的高度进样方式。为减小进样引起峰形展宽，在保证进样量的情况下，尽量减少进样时间，选择5S。

2.5 方法学考察

2.5.1 稳定性试验 选择上述苍术酮及白术内酯I的对照溶液。分别于0，2，4，8，12，24h后测定。以峰的保留时间和积分面积为评价对象，发现保留时间和积分面积的RSD均不超过3%，平均值分别为1.11%和1.02%。

2.5.2 精密性试验 选择苍术酮及白术内酯I的对照溶液，连续测定5次，对主要峰面积和保留时间进行计算，发现RSD值分别介于0.87%～2.03%和1.32%～2.33%之间。

2.5.3 重现性试验 取5批样品一，分别制备样品液并测定，对主要的四个吸收峰的峰面积和保留时间进行计算比较，所得RSD0.55%～2.54%和1.02%～2.31%之间。

2.5.4 线性关系考察 以上述苍术酮及白术内酯I的对照溶液储备液，分别稀释2～5倍，测定5次，以结果获得线性曲线：苍术酮Y=32153X+1432.9 r=0.9991,说明苍术酮测定浓度在0.0123mg/mL～0.0514mg/mL范围内线性关系良好；白术内酯I Y=41455X-1246.7 r=0.9993,说明白术内酯I测定浓度在0.0082 mg/mL～0.0412 mg/mL范围内线性关系良好。

2.5.5 加样回收率试验 取5批样品一，分别加入稀释5倍的苍术酮和白术内酯I的对照品储备液，测定，并计算回收率，结果均介于97%～102%之间。

2.6 色谱图的获得和含量测定 将上述各批次样品及苍术酮和白术内酯I等量混合的对照品储备液，利用上述色谱条件分离，并记录色谱曲线。

件分离，并记录色谱曲线。

利用标准曲线法（曲线方程见2.5.4），结合色谱数据，计算得出各产地中苍术酮和白术内酯的含量，见表2。

表2 各产地白术中主要化学成分含量

3 讨论

3.1 过比较发现，皖南地区品种成分含量均较高，符合传统道地产区的地位，与邻近的浙江地区品质相近，而略有优势。但仍可看出该地区具体产地间差异仍较大，且不稳定，这主要与当地野生环境等不确定性因素有关。相比而言，皖北地区的亳州产白术虽然品质相对较差，但比较均一，质量稳定。这主要是因为当地的白术均为人工种植。从外观看，亳州产白术粗大，产量较高。故认为，人工种植可以提高白术的产量，并获得较为稳定的产品质量。应加强在优质种质产地的研究，推广优良品种的人工栽培种植。

3.2 白术中的生理活性物质目前认为主要是亲脂性成分，但单纯以个别萜类物质的含量评价品质优劣尚不全面，因为传统应用中大多为水煎，亲脂性成分溶出有限，故下最后论断还需要进一步深入研究。

3.3 高效毛细管电泳色谱法操作简便，快速，不需要大量色谱纯溶剂。且由于样品液没有经过预处理，最大限度地节省了人力和财力成本，值得推广应用。

[1] 肖培根.新编中药志(第一卷)[M].北京:化学工业出版社,2002:323.

[2] 周克瑜,许长照.白术地道药材和栽培品的化学成分对比研究[J].南京中医药大学学报(自然科学版),2000,16(2):109-110.

10.3969/j.issn.1672-2779.2010.18.175

1672-2779（2010）-18-0239-02

安徽省教育厅自然科学研究项目。

2010-06-15）