盐酸-香草醛比色法测定油松针叶和树皮中原花青素的含量

田建华,张素华

(山西省林业科学研究院,山西 太原 030012)

原花青素(procyanidins)为低聚黄烷化合物的总称,由不同数目的黄烷-3-醇或黄烷-3,4-二醇聚合而成,该类物质通常能在热酸作用下产生花青素(anthocyanidin),具有清除自由基、抗氧化、保护心血管、抗肿瘤、抗辐射、抗突变等作用。原花青素广泛存在于各种植物 (如葡萄、山楂、苹果、蓝莓)的核、皮或种子中,在营养保健品、化妆品、食品、医药等领域中应用广泛,目前国内多以葡萄籽、松树皮为原料提取原花青素。本文用盐酸-香草醛比色法对油松针叶和树皮中原花青素含量进行了测定,以期为松针资源开发利用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

试验所用油松针叶和树皮均采自黑茶山,经自然干燥后,备用。

仪器与试剂:721分光光度计(上海第三分析仪器厂制造),康氏电动振荡机(243次 /min,北京通县医疗器械厂制造),植物粉碎机(飞利浦家电公司生产),儿茶素标准样品(中国药品生物制品检定所,纯度 98%以上),盐酸、香草醛、乙醇、甲醇均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 儿茶素标准溶液的制备

准确称取干燥至质量恒定的儿茶素标准样品10 mg,加甲醇溶解并定容至 100 mL的容量瓶中,摇匀得到 0.100 g/L的标准溶液。

1.2.2 样品溶液的制备

油松针叶样品溶液:松树针叶样品干燥至质量恒定,粉碎后过 80目筛,准确称取针叶粉 1.000 g,加甲醇溶解,置振荡机上振荡 20 min,将萃取液放入离心机离心 20 min,倒出上清液。共萃取 3次,固液比分别为 1∶9,1∶8,1∶7,将 3次萃取液合并定容至25 m L容量瓶中,摇匀,备用。

油松树皮样品溶液:同上。

1.2.3 儿茶素标准曲线绘制方法

分别取上述质量浓度为 0.100 g/L的儿茶素标准溶液 0.4 mL,0.8 m L,1.2 mL,1.6 mL,2.0 mL及3.0 m L于 6只比色管中,各加入 6 mL质量浓度为40 g/L的香草醛-甲醇溶液和 3 m L浓盐酸,摇匀。置于(20±1)°C温度下避光反应 15 h,于 500 nm处测吸光度,甲醇为空白参比,以儿茶素质量浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

1.2.4 精密度试验方法

1)批内精密度:取油松针叶粉 1.000 g,按样品溶液制备方法定容至 25 m L容量瓶中,取 2 mL萃取液稀释至 25 mL制成测定液,在 1 d内每隔 1 h测定 1次,共测定 6次。

2)批间精密度:将批内测定液,每隔 1 d测定1次,连续测定 5 d。

1.2.5 加标回收试验方法

精确称取油松针叶粉 3份,每份0.05 g,分别加入儿茶素标准品1.0 mg,1.2 mg,1.4 mg,按样品溶液制备方法制成测定液,设 2次重复。

1.2.6 样品中原花青素含量测定方法

分别精确吸取油松针叶和油松树皮的样品溶液各 2 mL,稀释至 25 m L容量瓶中,制成测定液,测其吸光度并计算原花青素的含量。

2 结果与分析

2.1 儿茶素标准曲线

儿茶素标准曲线见图1。

图1 儿茶素标准曲线

用最小二乘法进行线性回归,得儿茶素质量浓度与吸光度之间的回归方程(R2=0.999 9):

2.2 精密度试验

测得油松针叶样品溶液批内、批间吸光度分别见表1和表2。

表1 批内精密度试验结果

表2 批间精密度试验结果

批内和批间精密度试验结果表明,所测得吸光度结果相近,原花青素含量差异不大,相对标准差分别为3.2%和1.8%。批内精密度试验结果显示原花青素含量为(5.992 1±0.194 39)g/100 g;批间精密度试验结果显示原花青素含量为(5.985 1±0.110 049)g/100 g,说明测定方法稳定性好,可以采用。

2.3 加标回收率试验

加标回收试验结果见表3。

表3 加标回收率试验结果

由表3可看出加标回收试验重复进行 6次,结果差异不大,相对标准差为 2.8%,证明试验结果有效,加标回收试验结果取 6次重复的均值,为(100.61±2.828 9)%,说明加标回收率高。

2.4 样品测定

测定油松针叶和树皮中原花青素吸光度,计算原花青素含量 ,结果见表4。

表4 油松针叶和树皮中原花青素的含量

由表4可看出,每100 g油松针叶和树皮中原花青素的含量分别为 6.0 g和 3.91 g,针叶中原花青素的含量是树皮中的1.53倍。

3 结论

实验表明,盐酸-香草醛比色法测定油松针叶和树皮中原花青素的含量,其方法准确可靠,操作简单。同时,由于原花青素易氧化,见光易分解。因此,在样品处理及测定过程中应注意保持避光,避免原花青素分解,以保证测定结果准确可靠。

目前,我国对于松树针叶及树皮的开发主要为直接利用,对其深加工利用还处于起步阶段,本研究结果为松树针叶和树皮中原花青素的开发利用提供了理论依据。

[1]张培成 .黄酮化学 [M].北京:化学工业出版社,2008:111.

[2]凌智群,张晓辉,谢笔钧.原花青素的药理学研究进展[J].中国药理学通报,2002,18(1):9-12.

[3]万本屹,董海州,刘传富 .原花青素及其应用 [J].中国食物与营养,2001(6):15.