基质固相分散-液质联用法测定鸡肉中磺胺和氯霉素的残留

王凌云

(佛山市农产品质量安全监督检测中心，佛山 528000)

磺胺类药物(SAs)和氯霉素(CAP)的残留对人类具有严重的毒副作用，可引起癌症、畸形、抗药性及某些中毒现象。美国、欧盟等已明文规定禁止在食品工业中使用该类药物[1]。中华人民共和国农业部2002年235号公告规定动物性食品中SAs总量不得超过0.1 mg/kg ；氯霉素及其盐、酯在所有可食组织中不得检出。目前国内检测磺胺类药物和氯霉素的方法主要有酶联免疫法、高效液相色谱法、气相色谱法、液相色谱-质谱法[2-5]。上述方法存在溶剂用量大、操作繁琐及分析对象单一等缺点。笔者采用基质固相分散技术实现了磺胺和氯霉素的同时提取净化，有效地缩短了实验时间，具有操作简单快捷、溶剂用量少等特点，可进行大批量分析。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

超高效液相色谱-串联质谱仪：Quattro Premier XE型，美国Waters公司；

磺胺嘧啶(SD)、磺胺二甲基嘧啶(SM2)、磺胺甲恶唑(SMZ)、磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺甲氧嗪(SMP)、磺胺喹恶啉(SQ)、磺胺地索辛(SMZ) 、氯霉素(CAP)：纯度均大于97.5%，德国Dr．Ehrenstorfer公司；

乙腈、甲酸、乙酸乙酯、乙酸铵：色谱纯；

实验用水为超纯水。

1.2 标准溶液配制

取适量的标准品分别用乙腈配制成质量浓度为100 μg/mL的单标储备溶液，再将其配制成10 μg/mL (SAs)和0.5 μg/mL(CAP)的混合标准工作液，于4℃下避光保存。

1.3 样品提取

取100 g鸡肉样品于组织捣碎机中打碎，准确称取0.5 g(精确到0.01 g)置于玻璃研钵中，加入2.0 g C18颗粒研磨均匀至5 mL注射器中(底部装有脱脂棉)，压实，加盖一层脱脂棉。用10 mL乙腈少量多次洗涤研钵和研锤，洗液转移上柱，控制流速约为1 mL/min，收集流出液。将洗脱液在50℃下减压蒸发至干，残渣用2 mL流动相溶解，过0.2 μm微孔滤膜，滤液供UPLC-MS-MS分析。

1.4 基质添加标准曲线制作

称取5份0.5 g阴性试样(精确到0.01 g)，分别加入标准工作液2、10、20、40、100 μL，余下步骤同1.3样品提取。

1.5 色谱条件

色谱柱： BEH C18柱(2.1 mm×50 mm，1.7 μm)；柱温:40℃；进样量:10 μL。

正离子模式下的流动相：A相为0.1%甲酸乙腈溶液，B相为0.5 mmol/L乙酸铵-0.1%甲酸水溶液。梯度洗脱程序见表1。

表1 正离子模式下梯度洗脱程序

负离子模式下的流动相：A相为0.1%甲酸乙腈溶液，B相为水溶液；梯度洗脱程序见表2。

表2 负离子模式下梯度洗脱程序

1.6 质谱条件

电喷雾电离源(ESI)：磺胺采用正离子模式，氯霉素采用负离子模式。正离子模式下，毛细管电压：3.2 kV；离子源温度：105℃；脱溶剂温度：400℃；脱溶剂气流量：980 L/h；锥孔反吹气流量：100 L/h。

负离子模式下，毛细管电压：1.5 kV；离子源温度：100℃；脱溶剂温度：350℃；脱溶剂气流量：500 L/h；锥孔反吹气流量：50 L/h。

正负离子分开采集，多反应监测模式下，选择离子、锥孔电压及碰撞诱导解离能量参数见表3。

2 结果与讨论

2.1 吸附剂的用量

表3 多反应监测分析的质谱参数

注：1)为定量离子。

在0.5 g样品中分别加入1.0、1.5、2.0、2.5 g C18颗粒，考察C18颗粒吸附剂用量对提取效果的影响。结果表明，样品质量与吸附剂用量为1∶2、1∶3时，回收率较低且背景值高，说明吸附剂用量不足以将样品完全分散，不利于分析物从基质中分离；两者比例为1∶5时，回收率下降，显示C18颗粒对SAs和CAP的吸附增强，需要更多的洗脱剂；当样品质量与吸附剂用量为1∶4时，获得良好的提取效果，回收率为82.1%～90.4%，这与张素霞等[6]以C18颗粒MSPD提取猪肌肉中磺胺类药物时样品质量与分散剂用量比为1∶4，奉夏平等[7]以C18颗粒MSPD提取动物源食品中氯霉素时样品质量与分散剂用量比为1∶4相一致。因此确定C18颗粒的用量为2.0 g。

2.2 洗脱剂的选择

洗脱剂的种类和用量直接影响分析物的回收率，试验考察不同体积下乙腈和乙酸乙酯对SAs和CAP的洗脱效果。结果显示，当乙酸乙酯的体积为10.0 mL时，回收率最高，但SAs的回收率小于65%；乙腈作为洗脱剂在体积达到10.0 mL时获得满意的回收率；继续增加乙腈的用量，回收率趋于平稳，没有明显的提高。实验中还发现，乙酸乙酯的洗脱液较易乳化，需要破乳和脱脂处理。综合考虑，选择乙腈作为洗脱剂。

2.3 基质添加标准曲线及其检出限

在SAs为10～500 ng/mL和CAP为0.5～25 ng/mL浓度范围内，8种兽药的峰面积和浓度之间呈良好的线性关系，相关系数均大于0.99。按添加水平SAs为40 μg/kg、CAP为2 μg/kg，定量离子的信噪比(S/N)为3时，方法的检出限、线性方程和相关系数见表4。

2.4 添加回收试验

在0.5 g空白鸡肉样品中按SAs为40、100、200 μg/kg，CAP为2、5、10 μg/kg的水平添加标准工作液，每个添加水平对4个样品平行测定，计算平均回收率和精密度，结果见表5。 由表5可知，8种兽药的平均回收率为81.6%～106.0%，相对标准偏差为0.6%～7.1%，表明该方法有良好的精密度和准确度，能够达到痕量分析要求。

表4 磺胺和氯霉素标准曲线线性方程及其检出限

表5 磺胺和氯霉素在鸡肉样品中的添加回收率(n=4)

3 结语

建立了基质固相分散-超高效液相色谱-串联质谱同时测定鸡肉样品中磺胺和氯霉素残留量分析的方法。该方法简单快捷、准确可靠，溶剂用量少，适用于大批量样品的定性定量分析，满足痕量分析要求。

[1] 中国有机质谱学第十二届全国学术大会论文集.氯霉素和磺胺类药物的LC-MS/MS分析[C].北京：原子能出版社，2003.

[2] GB/T 21316-2007 动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法[S].

[3] SN 0208-1993 出口肉中十种磺胺残留量检验方法[S].

[4] GB/T 20756-2006 可食性动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定 液相色谱-串联质谱法[S].

[5] SN 0341-1995 出口肉及肉制品中氯霉素残留量检验方法[S].

[6] 张素霞,李俊锁,钱传范.猪肌肉组织中磺胺类药物的MSPD净化和HPLC测定[J].畜牧兽医学报,1999,30(6):531-535.

[7] 奉夏平,张亮,张卓恒,等. MSPD/PVT-GC/MS测定动物源食品中氯霉素[J].中山大学学报(自然科学版),2005,44(2):65-68.