鼻炎通窍喷雾剂的提取工艺研究

蒲志强，周立，盛蓉，张勤修

(1.成都中医药大学，四川成都610075;2.成都中医药大学附属医院，四川成都610072)

鼻炎通窍喷雾剂为我院开发的新医院制剂，该方由薄荷、辛夷、麻黄、黄芩等中药组成，具有通利鼻窍的功效，临床用于鼻塞不通、流黄稠涕、急慢性鼻炎、副鼻窦炎。处方中薄荷、辛夷等主要含挥发性成分，采用水蒸气蒸馏法［1］提取，以挥发油提取率为评价指标，筛选芳香水提取工艺。方中麻黄、黄芩共为君药，麻黄碱和黄芩苷分别为其主要有效成分，为保证制剂质量及临床疗效，本实验以麻黄碱、黄芩苷含量及干膏率作为评价指标，采用正交试验优选水提工艺条件。

1 仪器与试药

1.1 仪器HP-1100型高效液相色谱仪(美国惠普)，四元泵，DAD检测器，HP化学工作站，AS10200超声波清洗器(220 V，280 W)，电子分析天平BP211D(德国Sartorius)。

1.2 试药盐酸麻黄碱(0714-9903，中国药品生物制品检定所);黄芩苷(110715-200514，中国药品生物制品检定所);重蒸馏水，乙腈、甲醇均为色谱纯，其余所有试剂均为分析纯。

2 实验部分

2.1 芳香水提取工艺筛选按处方比例称取薄荷、辛夷粗粉等，加10倍量水(补加药材吸水量，吸水率为185%)，水蒸气蒸馏提取8 h，每小时收集药材1倍量芳香水，所得芳香水按照《中国药典》2010版一部附录XD挥发油测定法“甲法”测定其挥发油量，结果见表1。

表1 芳香水提取工艺筛选

结果表明，药材提取6 h后其挥发油含量无明显变化，挥发油提取率为89.3%，确定蒸馏提取时间为6 h;但芳香水量是药材6倍，芳香水的收集量明显过多，需重蒸馏以减少芳香水体积，将上述收集芳香水重蒸馏，每小时收集药材1/10倍量芳香水，测定挥发油量，结果见表2。

表2 芳香水重蒸馏提取工艺筛选

结果表明，重蒸馏至5 h后，其芳香水中挥发油含量无明显变化，考虑制剂总体积要求，确定芳香水收集量为提取药材的1/2倍量。

根据上述实验，确定芳香水提取工艺为:薄荷、辛夷粗粉等水蒸气蒸馏提取6 h，每小时收集药材1倍量芳香水，将收集的芳香水重蒸馏，提取5 h，每小时收集药材1/10倍量芳香水，共收集药材1/2倍量的芳香水。

2.2 水提工艺的筛选

2.2.1 麻黄碱的测定［2］色谱条件色谱柱:迪马柱Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸(含0.1%的三乙胺)(3∶97);体积流量:1 mL/min，检测波长210 nm，柱温30℃;在选定色谱条件下，理论塔板数按盐酸麻黄碱峰计算不低于3 000，分离度＞1.5，阴性无干扰。麻黄碱对照品、阴性、样品色谱图见图1。

线性范围的考察对照品溶液的制备:精密称取盐酸麻黄碱对照品3.28 mg，加0.1%的盐酸甲醇制成每1 mL含盐酸麻黄碱65.6 μg的溶液，摇匀，即得;精密吸取盐酸麻黄碱对照品(0.065 6 mg/mL)溶液1、2、5、10、15 μL分别进样，按前述色谱条件测定峰面积，以峰面积(A)对进样量(C)进行线性回归，得回归方程A=1 604.9C+10.15，r=0.999 9，结果表明，进样量在0.065 6～0.984 μg范围内，盐酸麻黄碱峰面积值与进样量呈良好的线性关系。

图1 麻黄碱高效液相色谱图

样品测定供试品溶液的制备:精密量取2.2.5项下正交试验样品液2 mL，置25 mL量瓶中，用0.1%的盐酸甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得;测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.2.2 黄芩苷的测定［3］色谱条件色谱柱:依利特Hypersil ODS2(150 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇-0.2%磷酸(42∶58);体积流量1 mL/min，检测波长280 nm，柱温25℃;在选定色谱条件下，理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于2 500，分离度＞1.5，阴性无干扰。黄芩苷对照品、阴性、样品色谱图见图2。

图2 黄芩苷高效液相色谱图

线性范围的考察对照品溶液的制备:精密称取黄芩苷对照品3.41 mg，加甲醇制成每1 mL含136.4 μg的溶液，摇匀，即得;精密吸取黄芩苷对照品(0.136 4 mg/mL)溶液1、2、5、10、15 μL分别进样，按前述色谱条件测定峰面积，以峰面积(A)对进样量(C)进行线性回归，得回归方程A=2 417C+10.285，r=0.999 9，结果表明，进样量在0.136 4～2.046 μg范围内，黄芩苷峰面积值与进样量呈良好的线性关系。

样品测定供试品溶液的制备:精密量取2.2.5项下正交试验样品液1 mL，置25 mL量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1 m L置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得;测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.2.3 提取方法的筛选处方中麻黄和黄芩主要含有麻黄碱、黄芩苷，参考相关文献［4］，并根据主要成分的理化性质，采用水提法进行提取，并采用正交试验对水提工艺进行优选。

2.2.4 因素水平的确定影响水提的主要因素有加水量(A)、煎煮次数(B)及煎煮时间(C)，根据预试确定因素水平范围，因素水平设计见表3。

表3 因素水平表

2.2.5 正交试验正交试验样品的制备:按处方比例称取麻黄、黄芩药材及薄荷、辛夷等药渣，以黄芩苷、麻黄碱含量及干膏率作为评价指标，按正交设计表L9(34)进行正交试验，滤液浓缩并定容至100 mL。

2.2.6 正交试验结果正交试验结果见表4，方差分析见表5。

表4 正交试验设计表及结果

表5 方差分析表

结果分析:由直观分析可知，影响提取效果的因素顺序为:煎煮次数＞加水量＞煎煮时间，以煎煮次数影响最大。经方差分析，煎煮次数对提取效果有极显著影响，加水量有显著性影响，煎煮时间对提取无显著影响，故确定提取工艺为A3B3C1，即加15倍水，煎煮3次，每次0.5 h。据此条件，验证3次。

2.2.7 验证试验结果见表6。

表6 验证试验结果(n=2)

结果表明，用优选的工艺条件提取，测得的麻黄碱、黄芩苷含量及干膏率均较高，与正交试验结果相符，说明该工艺条件稳定可靠。

3 讨论

3.1 芳香水提取工艺中，按照《中国药典》2010年版一部附录XD挥发油测定法甲法，分别测定薄荷、辛夷等单味药材及混合提取后挥发油量。结果单味药材挥发油含量均符合药典标准;混合提取挥发油量为0.93%(mL/g)，并以此对芳香水提取工艺中挥发油提取率进行评价。试验中，辛夷未粉碎挥发油测得量为1.0%(mL/g)，粉碎后挥发油测得量为2.0%(mL/g);与相关文献报道［5］一致，辛夷粉碎与否对挥发油提取量影响很大，故辛夷应粉碎成粗粉。

3.2 麻黄碱测定中，参考药典及相关文献［6-7］，分别对色谱柱［依利特Hypersil ODS2(150 mm×4.6 mm，5 μm);迪马Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)］、流动相［乙腈-0.1%磷酸(9∶87)，乙腈-0.02 mol/l磷酸二氢钾(含0.2%三乙胺)(3∶97)，乙腈-0.1%磷酸(0.1%三乙胺)(3∶97)］、柱温(25℃，30℃)、检测波长(207 nm、210 nm)等进行了考察，结果在本文选定条件下，测定效果较好，对照品和样品可达到基线分离，阴性无干扰。

3.3 黄芩苷测定中，主要对流动相［甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)、甲醇-水-磷酸(42∶58∶0.2)］进行考察。

［1］周小建.正交实验优选苦黄口服液中挥发油的提取工艺［J］.吉林中医药，2008，28(10):760-760.

［2］郭温迎，庄建芬，徐仙娥.小儿咳喘灵口服液中盐酸麻黄碱的含量测定［J］.中国中医药科技，2010，17(2):137-138.

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［6］成红娟，曲婷丽，刘锐铃，等.HPLC同时测定止嗽立效口服液中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱含量［J］.中成药，2009，31(2):240-242.

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