高效液相色谱法测定风湿痹康胶囊中士的宁含量

(吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033)

风湿痹康胶囊是由土茯苓、青风藤、白屈菜、马钱子粉、麻黄等16味药组成，处方比较复杂、特殊，其中26.92%为土茯苓,13.4%为穿山龙，12.9%为马钱子粉，10.7%为青风藤及白屈菜，8.1%为川牛膝，3.2%为当归，1.1%为蜈蚣，其余药味各占1.6%，土茯苓虽为本方君药，但其基础研究较差，暂无法建立含量测定。马钱子粉为马钱子的炮制品，马钱子为马钱科植物马钱Strychnosnux-vomicaL.的干燥成熟种子，主要含生物碱:马钱子碱(Brucine)、士的宁(Strychnine)、马钱子新碱(Novacine)等。其有效与毒性成分均为士的宁，故应严格控制其含量，以控制该制剂内在质量，保证其安全、可靠。采用高效液相色谱法对方中士的宁含量进行测定，并以其为指标来控制本品的质量。

1 实验材料

Agilent 1100高效液相色谱仪；DAD二极管阵列检测器。士的宁对照品(批号：171242-200404)(中国药品生物制品检定所)，风湿痹康胶囊(吉林方大药业集团股份有限公司，批号20040901、20050103、20050701);乙腈为色谱纯，甲醇为优级纯，水为超纯水，其他试剂为化学纯。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Apollo C18(5 μm，4.6 mm×250 mm)；以乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸钠与0.02 mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸调节pH值2.8)(19∶81)为流动相；流速0.8 mL/min；检测波长为260 nm；柱温：40 ℃；进样量：5 μL；分离度大于1.5；理论板数按士的宁峰计算应不得低于6 000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取士的宁对照品15 mg于50 mL量瓶中，加三氯甲烷使溶解并稀释至刻度；精密量取5 mL于50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷25 mL与浓氨试液1 mL,密塞，轻轻振摇，称定重量，回流提取1 h，放冷,再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，蒸干，残渣加三氯甲烷3 mL使溶解，转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备 取本品处方不含马钱子粉的阴性对照样品，按2.3项下方法制备。

2.5 线性关系考察 精密称取士的宁对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.035 58 mg的溶液。分别精密吸取1、3、5、7、9 μL，注入液相色谱仪，测定，以对照品进样量(μg)为横坐标，以峰面积值为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程，Y=2 492.6X-1.69(r=0.999 9)，结果表明士的宁在0.036～0.32 μg范围内，标准曲线线性关系良好，符合外标法定量测定的要求。

2.6 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液5 μL，注入液相色谱仪，重复6次，测定，士的宁峰面积均值424.632 7，RSD%为0.89。结果表明，所用仪器具良好的精密性。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件测定，士的宁峰面积均值435.073 7，RSD%为1.79。结果表明，供试品溶液在15 h内基本稳定。

2.8 重复性试验 取同一批样品6分，按2.3项下方法制备，进行测定，结果士的宁均值1.678 mg/g，RSD%为2.08。结果表明，本法具良好重复性。

2.9 回收率试验 精密称取已知含量的同一批号样品(士的宁1.678 mg/g)6分，分别精密加入对照品溶液0.355 8 mg，依法测定，计算回收率，测得士的宁平均回收率为99.61%；RSD%为1.36。结果表明，本法回收率较好，准确度较高。

2.10 样品测定 依上述方法测定6批样品，结果6批样品中士的宁含量分别为0.502、0.507、0.368、0.457、0.453、0.450 mg/g。

3 结论

3.1 流动相的选择 参照2005年版药典的方法，采用乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸钠与0.02 mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸调节pH值2.8)系统为本法流动相，通过试验，将二者比例调至19∶81，在此条件下，供试品图谱基线平稳，供试品得到很好的分离，主峰前后无杂峰，保留时间比较适中。

3.2 提取方法的考察 取本品，混匀，作为供试品。1)取供试品0.5 g，精密称定，置具塞锥型瓶中，精密加入三氯甲烷25 mL与浓氨试液1 mL，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24 h，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，蒸干，残渣加三氯甲烷3 mL使溶解,转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2)用超声处理30 min代替放置24 h，其余照1)方法操作。3)加热回流1 h代替放置24 h,其余照1)方法操作。按上述色谱条件进行测定,结果以方法3)测定含量略高,故选择方法3)，即回流法。

[1]中华人民共和国药典委员会.中国药典一部[M].北京：化学工业出版社，2005:34.