噬菌体生物扩增法在结核性胸膜炎早期诊断中的研究

张 威，温 华，康 健

(1中国医科大学附属第一医院，沈阳110001;2沈阳市胸科医院)

结核性胸膜炎是结核病一种常见的表现形式，由于其早期诊断难度大，导致了患者发生胸膜肥厚、粘连甚至化脓的机会多，预后差，花费多。实验室快速诊断一直是国内外研究的焦点之一。我们应用噬菌体生物扩增法(PhaB)检测胸水标本，并与腺苷脱氨酶(ADA)、BACTEC MGIT960培养法进行比较，评价PhaB在结核性胸膜炎早期诊断中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2010年7～9月沈阳市胸科医院结核性胸膜炎住院患者70例，其中男55例、女15例，年龄18～85岁。病例选择符合《临床诊疗指南·结核病分册》［1］结核性胸膜炎诊断标准。

1.2 检测方法

1.2.1 PhaB法 采用由上海金浩科技发展有限公司提供，英国BIOTEC(生物技术实验有限公司)生产的FASTPlaqueTM试剂盒。操作步骤:①N-乙酰半胱氨酸—氢氧化钠胸液标本，用液体培养基离心洗涤2次，在沉淀中加入1 ml液体培养基，无菌条件下转移至反应管中为备用待检菌液。②噬菌体浸染:在上述处理过的样本中加入100μl分枝杆菌噬菌体，混匀后放37℃温育1 h。③终止浸染:在每个反应管中加入100μl杀毒剂充分混匀，室温作用5 min。④终止杀毒剂作用:于各反应管中加入5 m l液体培养基充分混匀，然后每管中加入1 ml指示细胞混匀。⑤浇注平皿:将上述液倒入无菌平皿中，随即加入5 m l溶化的琼脂(55℃左右)旋转混合，静置成形后，放37℃培养18～24 h。结果判定:对照结果正确的条件下观察测试样品结果。阳性结果可见有大小和数量不等的噬菌斑，或许多噬菌斑相互融合成透亮状;阴性结果可见指示细胞在琼脂平板中均匀生长，使整个平板呈毛玻璃状，无噬菌斑出现。阳性及阴性对照应该在如下范围:阳性≥20个噬菌斑;阴性≤19个噬菌斑。

1.2.2 其他检测方法 BACTEC MGIT960培养法按照仪器使用说明书进行操作。PPD试验以硬结平均直径≥20 mm或者有水泡、淋巴管炎，统计时定义为阳性检出。ADA测定采用比色速率法，试剂由德国AUTEC DIAGNOSTICA公司提供，仪器为东芝-40FR自动化分析仪。

1.3 统计学方法 计数资料应用χ2检验进行比较。以P≤0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1 阳性率比较 PhaB法、ADA、BACTEC MGIT960培养法阳性率分别为48.57%(34/70)、30%(21/70)、7.14%(5/70)。PhaB 法检出阳性率高于 ADA 法(χ2=4.36，P ＜ 0.05)及 BACTEC MGIT960 法(χ2=25.29，P ＜0.01)。

2.2 与PPD试验对照 本组经PPD检测结果强阳性者18例(25.71%)，其中经PhaB法检测胸水阳性11例，二者总体阳性符合率61.11%，PhaB法阳性率高于PPD试验(P＜0.05)。

3 讨论

PhaB法是一种细菌学快速诊断新技术，近年来我国应用该法检测不同标本结核分枝杆菌已有报道［2，3］。本 文 采 用 PhaB 法、ADA 法、BACTEC MGIT960法检测70例胸水标本，检出阳性标本分别为34、21、5份。PhaB法检出阳性率高于其他2种检测方法。本实验中ADA阳性率低于文献报道，可能与机体的状态、检测方法有关［4，5］。

胸膜活检方法通常是在患者出现胸膜肥厚时一种有效的诊断方法，往往发生在没有及时诊断、治疗的患者身上;而BACTEC MGIT960法亦在15～20 d出结果，时间长，因此两种检测方法不能早期诊断结核性胸膜炎。而PhaB法可以检测出胸水中活的结核分枝杆菌，18～24 h出结果，且具有较高的阳性率，可以作为早期诊断结核性胸膜炎的方法。

我们亦将PhaB法与PPD试验相比较，二者总体阳性符合率61.11%，PhaB法阳性率高于PPD检测方法。PPD试验结果受一定因素影响［6］:结核分枝杆菌感染后需4～8周建立充分变态反应，在此之前结核菌素试验可成阴性;营养不良、HIV感染、严重细菌感染、重症肺结核等因素均可使结果呈现阴性或弱阳性改变。目前PPD作为检测体内有无活动结核菌的方法已在基层医院广泛应用，虽然阳性率低于PhaB法，影响因素多，但仍可作为筛查结核菌感染的指标。

总之，PhaB法具有简便、快速、较高的阳性率、价廉等优点，是结核性胸膜炎早期诊断的一项重要检查方法，具有较高的临床应用价值，特别适用于基层医院开展。

［1］端木宏谨.临床诊疗指南·结核病分册［M］.北京:人民卫生出版社，2005:10-11.

［2］赵爱斌.噬菌体生物扩增法对结核性胸膜炎的诊断价值［J］.山西医科大学学报，2007，38(4):333-334.

［3］林桃源，何聚莲，方琼.菌体生物扩增法早期诊断结核性胸膜炎的临床价值［J］.临床肺科杂志，2007，12(2):157-158.

［4］李湘民.腺苷脱氨酶检测在胸腔积液中的诊断价值［J］.医学临床研究，2007，24(7):1111-1112.

［5］Albert H，Heydenrych A，Brookes R，et al.Performance of a rapid phage-based test，FASTPlaqueTB，to diagnose pulmonary tuberculosis from sputum specimens in South Africa［J］.Int J Tuberc Lung Dis，2002，6(6):529-537.

［6］陆再英，钟南山.内科学［M］.7版.北京:人民卫生出社，2008:48-49.