G-6608复方喷雾中氢溴酸高乌甲素和醋酸氯己定含量测定及稳定性研究

魏 丽，高永良，郝存江*

(1.天津中医药大学，天津 300193；2.军事医学科学院毒物药物研究所，北京 100850)

G-6608复方喷雾中的主要成分为氢溴酸高乌甲素和醋酸氯己定,主要用于镇痛消炎，既可治疗口腔炎症，亦可外用于一般割伤、擦伤等。采用高效液相法分别测定两组分含量的文献报道较多[1-3]，但尚未有同时测定两药含量的报道。为此笔者建立同时测定氢溴酸高乌甲素和醋酸氯己定的高效液相方法，并考察其稳定性，为该制剂进一步研发和质量评价提供科学依据。

1 仪器与试药

安捷伦1100高效液相色谱仪；pH计(pHS-3B)；BT124S万分之一电子分析天平(Sartorius)；BP211D十万分之一电子分析天平(Sartorius)。 氢溴酸高乌甲素原料药，批号：20090201L(陕西大河药业有限责任公司)；醋酸氯己定原料药，批号:081202(锦州九泰药业有限责任公司)；G-6608复方喷雾剂(本室自行研制)；乙腈：色谱纯(SK Chemicals)；磷酸二氢钾：分析纯(北京化学试剂公司)；三乙胺：分析纯(北京化学试剂公司)；水：SCD-Ⅱ高纯水装置制得。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm)；流动相：乙腈-0.025 mol/L KH2PO4(33∶67)，加0.3%三乙胺并调pH至3.0；流速：1.0 mL/min；检测波长：252 nm；进样量：20 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取氢溴酸高乌甲素标准品20 mg,醋酸氯己定标准品10 mg同时置于100 mL容量瓶中，流动相溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液。精密量取对照品储备液1.0 mL置于10 mL容量瓶中，流动相稀释定容至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 精密量取G-6608复方喷雾1.0 mL，置于50 mL容量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀。再量取1 mL稀释液置10 mL容量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀,0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液 按处方比例制成不含氢溴酸高乌甲素和醋酸氯己定的阴性制剂,按“2.2.2”项下制备阴性对照溶液。

2.3 系统适用性 将“2.2”配置的对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，分别精密吸取20 μL进样。结果表明，阴性对照无干扰，色谱图见图1。

A.对照品；B.供试品；C.阴性对照

2.4 破坏试验 将氢溴酸高乌甲素和醋酸氯己定置于0.1 mol/mL盐酸、0.01 mol/mL氢氧化钠、3%双氧水、(450 0±500)Lx光照和100 ℃高温条件下加速破坏,于不同时间取样测定，记录色谱峰。考察分解产物对主药测定的干扰情况，见图2。

A.酸破坏;B.碱破坏;C.氧化破坏;D.高温破坏;E.光照破坏1.氢溴酸高乌甲素；2.醋酸氯己定

结果显示，本方法能有效检出各破坏试验产生的降解产物，且降解产物峰与两主药峰均能达到良好分离，故本色谱条件能够满足有关物质考察的要求。

2.5 线性关系考察 精密量取对照品贮备液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、5.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项色谱条件进样分析,记录峰面积。以浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归，氢溴酸高乌甲素和醋酸氯己定的回归方程分别为：Y=15.35X+3.416(r=0.999 96，n=3)、Y=47.19X+2.368(r=0.999 91，n=3)。结果显示，二者检测浓度的线性范围分别为5～100 μg/mL、2.5～50 μg/mL。

2.6 精密度试验 制备20 μg/mL氢溴酸高乌甲素和10 μg/mL醋酸氯己定的混合对照品溶液按“2.1”项色谱条件进样20 μL,重复6次，记录色谱峰面积，求得峰面积氢溴酸高乌甲素 RSD为0.31%、醋酸氯己定RSD为0.29%，表明精密度良好。

2.7 稳定性考察 配制高、中、低3个浓度的氢溴酸高乌甲素和醋酸氯己定混合溶液,按“2.1”项下色谱条件分别于0、2、4、6、8 h，进样分析，以峰面积计算RSD值。结果,RSD均小于2%，表明供试品溶液在8 h内相对稳定。

2.8 回收率试验 按处方比例的80%、100%、120%精密称取氢溴酸高乌甲素和醋酸氯己定对照品，按处方比例加入辅料，按“2.2.2”项进行测定,计算加样回收率,结果见表1。

2.9 最低检测限考察 根据信噪比为3∶1时相应的浓度为最低检测浓度，本方法氢溴酸高乌甲素、醋酸氯己定的最低检测限分别为0.006 ng、0.002 ng。

2.10 含量测定 取G-6608复方喷雾剂3批，按“2.2.2”项制备供试品溶液，测定其含量，结果见表2。

2.11 每喷主药含量的测定 本品为定量喷雾剂，依据药典要求检查每喷主药含量。取G-6608复方喷雾剂3批，按喷雾剂每喷主药含量测定法[4]测定，以水为吸收溶剂，将揿压10次的溶液按“2.2.2”项制备供试品溶液,进样20 μL，计算每喷主药含量，结果见表2。

表1 回收率测定结果

表2 样品含量和每喷主药含量测定结果

2.12 稳定性研究 取同一批次(批号：20100301)G-6608复方喷雾剂，置于光照(450 0±500)Lx，高温60 ℃条件下，于第5、10天取样，以外观性状、pH值、含量和有关物质为指标，考察其稳定性。结果见表3。从数据可知，除光照条件不稳定外,其他各项指标均无明显变化，提示在生产及运输过程中应避光保存，其他试验结果表明本品稳定性较好。

表3 G-6608复方喷雾稳定性试验结果

3 讨论

3.1 紫外光谱扫描结果表明，氢溴酸高乌甲素、醋酸氯己定的最大吸收波长分别为252 nm、260 nm，考虑同浓度下醋酸氯己定的吸收值约为氢溴酸高乌甲素3倍,氢溴酸高乌甲素和醋酸氯己定在制剂中的含量比为2∶1，因此选择252 nm作为该制剂含量测定的检测波长。

3.2 在碱破坏试验中，在0.01 mol/mL氢氧化钠中室温放置2 h醋酸氯己定几乎完全降解，说明醋酸氯己定在碱性环境中极不稳定。

[1]李军,徐本明,郎跃武,等.HPLC法测定注射用氢溴酸高乌甲素的含量及其他生物碱[J].齐鲁药事,2006,26(10):1497-1499.

[2]刘秀花,史彦斌,管玉珠.氢溴酸高乌甲素原料药的稳定性研究[J].药物研究,2009,18(8):21-22.

[3]贾立华,潘强,高永良,等.复方醋酸氯己定洗液的制备及临床疗效[J].中国新药杂志,2004,13(12):1347-1349.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:化学工业出版社,2010:附录13.