淫羊藿提取工艺优化研究

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(1.长春中医药大学，吉林 长春 130117；2.中国中医科学院中药研究所 北京 100700)

淫羊藿为小檗科植物淫羊藿EpimediumbreviconumMaxim.的干燥地上部分。具有补肾阳、强筋骨、助阳益精和祛风湿功能。用于阳痿、腰膝痿弱、四肢麻痹及股骨头坏死等症。为了优化淫羊藿药材的提取工艺，笔者采用正交设计试验法[1]，以该药材在提取时的出膏率及其中的总黄酮含量为指标，用分光光度法进行含量测定，用综合简单分析和方差分析结果，现报道如下。

1 实验材料

淫羊藿药材饮片购自长春北药药材采购供应站，经鉴定符合《中国药典》2010年版一部标准；淫羊藿苷标准品(中国药品生物制品检定所,批号：10737-200313)；752型紫外光栅分光光度计(上海分析仪器厂)；所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 标准曲线的绘制 精确称取淫羊藿苷标准品0.004 0 g置于25 mL容量瓶中,用甲醇溶解稀释至刻度，分别从中吸取0.3、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL置于25 mL容量瓶中,定容至刻度，用752型紫外光栅分光光度计在270 nm处,以甲醇为空白对照分别测其吸光值，见表1。以淫羊藿苷浓度(C)对吸光度(A)进行线性回归。

回归方程为:C=0.027 9A-0.001 1(r=0.999 7)

表1 淫羊藿苷标准曲线

2.2 稳定性考察 称取淫羊藿适量加入70%乙醇10倍回流1 h，采用棉花过滤，滤液回收乙醇。放置过夜，过滤。再用300 mL乙酸乙酯分4次萃取,乙酸乙酯层合并，并回收之。最后用甲醇溶解所得稠膏转溶于25 mL容量瓶中，稀释至刻度，从中吸取1 mL置于25 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度。再从中吸取1 mL置于25 mL容量瓶中，以甲醇定容至刻度。用752型紫外光栅分光光度计在270 nm处，以甲醇为空白对照，每隔20 min测1次其吸光值，见表2。

表2 稳定性实验结果

数据结果表明:在2 h内总黄酮含量稳定，不影响测定结果。

2.3 加样回收实验 先取已知总黄酮含量的样品5分，再分别按表3剂量加入淫羊藿苷标准品。依照标准曲线制备项下方法测定并计算样品中总黄酮含量，结果见表3。

表3 回收实验测定结果

2.4 工艺条件优化

2.4.1 水提工艺条件考查[2]

2.4.1.1 实验方法 取干燥药材9分,每分20 g。分别加水浸泡所需时间，之后再加热煎煮所需时间，得煎煮液，滤液浓缩至50 mL左右。放置过夜，过滤。用约300 mL乙酸乙酯分4次萃取，合并乙酸乙酯层，回收乙酸乙酯。再用甲醇溶解所得稠膏转溶于25 mL容量瓶中,稀释至刻度，从中吸取1 mL置于25 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度。再从中吸取1 mL置于25 mL容量瓶中，以甲醇定容至刻度。用752型紫外光栅分光光度计在270 nm处,以甲醇为空白对照，测其吸光值。根据回归方程计算有效成分的含量，见表4，表5。

表4 L9(34)正交试验安排

表5 方差分析

2.4.1.2 实验结果 4个因素的影响程度次序为B>C>A>D，即浸泡时间影响最大，煎煮时间其次，加水倍量次之，煎煮次数影响最小。最佳工艺A3B2C3D2,即加8倍水、浸泡药材1.0 h、煎煮2次、每次2.0 h。

2.4.2 醇提工艺条件考查

2.4.2.1 实验方法取干燥药材9分，分别加入各浓度乙醇回流提取，得提取液,滤液回收乙醇。静置过夜，抽滤。再用约300 mL乙酸乙酯分4次萃取，合并乙酸乙酯层，之后回收乙酸乙酯。再用甲醇溶解所得稠膏并转溶于25 mL容量瓶中，稀释至刻度，从中吸取1 mL置于25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。再从中吸取1 mL置于25 mL容量瓶中,以甲醇定容至刻度。用752型紫外光栅分光光度计在270 nm处,以甲醇为空白对照，测其吸光值。根据回归方程计算有效成分的含量，见表6，表7。

表6 正交试验安排

表7 方差分析

2.4.2.2 实验结果 醇提4个因素的影响程度次序为D>B>A>C，即回流次数影响最大,加醇量其次，乙醇浓度再次之，回流时间影响最小。最佳工艺A3B2C1D3,即加10倍量70%的乙醇回流提取3次，每次1 h。

3 讨论

组方中的淫羊藿含的淫羊藿苷可溶于水、甲醇、乙醇等，故可通常采用水提醇沉法、乙醇回流法、渗漉法等方法提取。根据文献报道[3-4]，乙醇回流法是较佳的提取方法。

由试验结果简单分析法和方差分析结果可知，醇提较水提有效成分的含量有大幅度的提高，水提最高含量为2.133%，而醇提最高含量为3.130%，且普遍在2.081～3.130之间。所以，考虑到更为有效的利用资源,可采用乙醇提取。其中最佳工艺条件为10倍量70%的乙醇回流提取3次，每次1 h。

[1]张春华,严云良.医药数理统计[M].北京:科学技术出版社,2001:270.

[2]朱春林,高素琴.淫羊藿的提取工艺优选[J].时珍国医国药,2001,12(8):687.

[3]申庆亮,丁涛.正交设计法研究淫羊藿提取工艺条件[J].中国实验方剂学杂志,2001,7(5):51.

[4]王成军,邓晓娟.淫羊藿总黄酮提取工艺研究[J].基层中药杂志,2002,16(5):331.