顶空毛细管气相色谱法测定长春西汀原料药中乙酸乙酯残留量

孙红亚，朱琦峰，傅应华#（1.浙江宁波市鄞州人民医院，宁波市315040；.嘉兴学院医学院，嘉兴市314001）

长春西汀是一种脑血管扩张药，其原料药质量标准——进口药品注册标准[1]中收载了乙酸乙酯残留溶剂检测项目，方法为以吡啶为溶剂、二氧六环为内标直接进样测定，并规定了乙酸乙酯残留溶剂限度为0.1%。笔者按该方法对长春西汀原料药进行乙酸乙酯检测时发现，因对照品溶液中乙酸乙酯浓度低，直接进样存在检测灵敏度低、峰面积小、重现性差、溶剂吡啶中杂质有干扰等问题，文献也未见有关长春西汀残留溶剂检测方法报道。有关残留溶剂测定有直接进样法[2]和顶空进样法[3，4]2种，为了提高检测灵敏度和准确度，笔者根据《中国药典》2010年版（二部）残留溶剂测定法[5]的要求，对长春西汀中乙酸乙酯残留溶剂检测方法进行了改进研究：采用顶空进样法，以二氧六环代替吡啶为溶剂，建立了以丙酮为内标的毛细管气相色谱法测定长春西汀中乙酸乙酯残留量，并对系统适用性进行了优化。结果表明方法简单、灵敏、准确，可用于长春西汀原料药中乙酸乙酯残留量检测。

1 仪器与试药

6890N毛细管气相色谱仪，包括氢火焰离子化检测器（FID）、HP7694E顶空进样器（美国Aglient公司）；BP211D电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

长春西汀原料药（6批均为进口。瑞士Linnea SA公司，批号：41809007、41809015、41809021，含量：99.5%、99.9%、99.2%；西班牙 Covex公司，批号：VP/VP070701、VP/VP/VP070901、CH080615GCH，含量：100.3%、99.5%、99.1%）；乙酸乙酯、丙酮均为分析纯，二氧六环为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与色谱

色谱柱：AgilentDB-624弹性石英毛细管柱（固定液为6%腈丙基苯基-94%聚二甲基硅氧烷，50m×0.535mm×3.00μm）；柱温：程序升温，初始温度55℃，保持6m in，并以40℃·m in－1速率升温至180℃，保持2m in；载气：高纯氮气，流速：1.0m L·m in－1；进样口温度：200 ℃；FID检测口温度：250 ℃；进样方式：分流进样，分流比：5∶1；顶空温度：85℃；平衡时间：30 m in；进样时间：1m in。

取“2.2”项下混合对照品溶液、二氧六环、供试品溶液进样分析，结果乙酸乙酯与内标丙酮峰分离良好，分离度大于1.5。色谱见图1。

图1 气相色谱图A.混合对照品溶液；B.二氧六环；C.供试品溶液；1.内标；2.乙酸乙酯Fig 1 GC chromatogramsA.control solution mixture；B.dioxane；C.sample solution；1.internal standard；2.ethylacetate

2.2 溶液制备及测定方法

精密称取丙酮适量，用二氧六环稀释制成0.2mg·m L－1的溶液，作为内标贮备液；精密量取贮备液5m L，置于50m L容量瓶中，加二氧六环至刻度，作为内标溶液。

精密称取乙酸乙酯50.06mg，置于100m L容量瓶中，加二氧六环至刻度，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液与内标贮备液各5m L，置于50m L容量瓶中，加二氧六环至刻度，摇匀；再精密量取10m L，置于20m L顶空瓶中，加盖密封，作为混合对照品溶液。

取供试品约0.5 g，置于20m L顶空瓶中，精密称定；再精密加入内标溶液10m L，加盖密封，振摇使溶解，作为供试品溶液。

取混合对照品溶液与供试品溶液，于85℃加热30m in，照《中国药典》2010年版（二部）附录残留溶剂测定法[5]，以“2.1”项下色谱条件测定，按内标法以峰面积计算。

2.3 线性范围

精密量取“2.2”项下对照品贮备液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 m L，分别置于20m L顶空瓶中，各精密加入内标贮备液1m L，分别加二氧六环至10m L，摇匀，加盖密封，依法测定。以乙酸乙酯峰面积与内标峰面积之比（Y）为纵坐标，浓度（X，mg·m L－1）为横坐标进行线性回归，得乙酸乙酯的回归方程为：Y＝10.345X+0.040 2（r＝0.999 8）。表明乙酸乙酯检测浓度线性范围为0.025～0.25mg·m L－1。

2.4 精密度试验

取“2.2”项下混合对照品溶液，重复测定6次，计算乙酸乙酯峰面积与内标峰面积的平均比值为1.086，RSD＝1.08%（n＝6），表明精密度良好。

2.5 溶液稳定性试验

取“2.2”项下混合对照品溶液，分别于0、2、4、6、8 h时各取样测定，得乙酸乙酯峰面积与内标峰面积比值无明显差别，表明溶液在8 h内稳定。

2.6 最低定量限试验

取“2.2”项下混合对照品溶液，用二氧六环逐级稀释成不同浓度，依法测定，按S/N＝10计算最低定量浓度为0.10µg·m L－1。

2.7 回收率试验

取经105℃干燥至恒重的某批样品约0.5 g，共6份，置于20m L顶空瓶中，精密称定，分别精密加入“2.2”项下混合对照品溶液10m L，加盖密封，振摇使溶解，按“2.2”项下方法依法测定，按内标法以峰面积计算回收率，得平均回收率为102.2%，RSD＝1.82%（n＝6），详见表1。

表1 回收率试验结果（n＝6）Tab 1 Resultsof recovery tests（n＝6）

2.8 样品中乙酸乙酯残留量测定

精密称取6批长春西汀原料药各0.5 g，按照“2.2”项下方法制备混合对照品溶液和供试品溶液，依法测定，结果批号为41809021的样品中检出乙酸乙酯残留量为0.023%，其余5批均未检出；同时取样按照进口药品注册标准方法[1]检验，结果6批样品均未检出乙酸乙酯。

3 讨论

3.1 溶剂的选择

长春西汀易溶于氯仿，在二甲基甲酰胺中略溶。考虑到氯仿毒性大，不宜作为溶剂使用。在前期研究中经试验二甲基甲酰胺、二甲基亚砜和二氧六环3种溶剂，发现二甲基甲酰胺、二甲基亚砜对长春西汀的溶解度均不能满足样品浓度的要求，而二氧六环对照品的溶解度能达到5%的要求，故选择二氧六环作溶剂。

3.2 内标物与色谱柱的选择

笔者曾采用丙酮、乙醇、正丙醇作为内标，经试验三者均能与乙酸乙酯分离，但正丙醇在二氧六环溶剂中存在峰形变宽问题，柱效降低，不适合作内标；长春西汀化学结构中含有乙醇酯基团，经考察在90℃下加热30min顶空进样，样品在乙醇峰位处出现1个色谱峰，经比较确认为长春西汀受热分解产生的乙醇峰，故乙醇不适合作内标；丙酮的保留时间较为适宜，在给定的色谱条件下，与乙酸乙酯分离良好，其峰形不受溶剂影响，柱效高，故选择丙酮作为内标。

笔者曾考察了HP-5、HP-INNOWax和DB-624 3种色谱柱的适用性，结果表明以DB-624色谱柱效果最好，乙酸乙酯、乙醇、内标、溶剂峰分离良好，乙酸乙酯、内标峰形对称、柱效高、检测灵敏度高、重现性好，故选择DB-624为色谱柱。

3.3 顶空平衡温度和时间选择等

取混合对照品溶液3份，分别在70、80、85℃下加热平衡30m in后进样测定。结果表明，乙酸乙酯和内标的峰面积随平衡温度升高而增大。

另取混合对照品溶液2份，分别在85℃加热30、45min后进样测定，结果在平衡30、45min时测得乙酸乙酯和内标的峰面积基本不变。故选择加热温度（即顶空温度）为85℃、平衡时间为30min。

采用顶空进样法，可大大提高乙酸乙酯的检测灵敏度，同时还可减少样品对色谱柱的污染，延长柱子的使用寿命。采用程序升温，先在低温下完成乙酸乙酯和内标的分离，再提高柱温，使高沸点溶剂二氧六环快速出峰，达到快速分析的目的。

进口药品注册标准[1]中规定长春西汀中乙酸乙酯限量为0.1%，较《中国药典》2010年版（二部）规定的乙酸乙酯残留量限度0.5%低了5倍，因此需要更高的检测灵敏度。而本法具有检测灵敏度更高、重复性和准确度更好的优点，可用于长春西汀原料药中乙酸乙酯残留量的检测，也可为长春西汀质量标准的修订提供方法依据。

[1]国家食品药品监督管理局.进口药品注册标准——长春西汀，JX20070232[S].2009.

[2]张雅军，孙会敏，李 科，等.气相色谱法测定阿德福韦酯中的10种残留溶剂[J].药物分析杂志，2005，25（6）：660.

[3]赵佳丽，章展煌，徐宏祥.顶空毛细管气相色谱内标法测定倍他米松磷酸钠中的3种残留溶剂[J].中国药房，2010，21（21）：1 999.

[4]席志芳，衷红梅，党全训，等.顶空气相色谱法测定泮托拉唑钠中残留的有机溶剂[J].药物分析杂志，2007，27（7）：1 119.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：80、附录ⅧP.