STK猪瘟活疫苗与ST细胞苗及脾淋组织苗免疫效果试验

张一鸣

（成都巨星猪业有限公司，四川省成都市 611230）

STK猪瘟活疫苗与ST细胞苗及脾淋组织苗免疫效果试验

张一鸣

（成都巨星猪业有限公司，四川省成都市 611230）

将STK猪瘟活疫苗、ST猪瘟活疫苗、猪瘟脾淋组织苗和生理盐水（对照组）分别接种CSFV血清学阴性（CSFV抗体阻断率≤30%）的断奶仔猪，用美国IDEXX公司的猪瘟抗体检测试剂盒检测其抗体水平的动态变化差异，并分析抗体合格率（或阳性率）、阻断率等指标。结果表明：仔猪二次免疫STK猪瘟活疫苗后25天（即90日龄），猪瘟抗体的合格率达到100%，其中85%仔猪的抗体水平达到了比较高的滴度（阻断率≥60%），且二次免疫后在整个生长期都能维持较高的抗体水平。免疫ST猪瘟活疫苗及猪瘟脾淋组织苗后，在90日龄猪瘟抗体的合格率虽能达到或接近100%，但抗体水平处于高滴度的比例不大：ST细胞苗40%仔猪抗体阻断率≥60%，脾淋苗只有35%仔猪抗体阻断率≥60%，均低于免疫STK猪瘟活疫苗的抗体水平，且较高抗体水平维持的时间短于STK猪瘟活疫苗。各项结果表明，STK猪瘟活疫苗对仔猪有很好的免疫效果，能产生较高水平及较长时间的免疫保护力，且免疫效果优于ST猪瘟活疫苗和猪瘟脾淋组织苗。

试验；猪瘟；疫苗

1 材料

1.1 疫苗

高效价猪瘟活疫苗（STK传代细胞源），购自普莱柯生物工程有限公司，批号： （2009）160021004； 本品系用猪瘟兔化弱毒株接种易感细胞培养，获取细胞培养物，加入适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。每头份含细胞毒液不少于0.015mL（每头份病毒含量≥7500个家兔感染量）。

STTM猪瘟活疫苗（传代细胞源），购自广东永顺生物制药有限公司，农医药便函 [2008]285号。本品系用猪瘟兔化弱毒株接种易感细胞培养，获取细胞培养物，加入适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。每头份含细胞毒液不少于0.015mL（每头份病毒含量≥7500个家兔感染量）。

猪瘟活疫苗（兔源）脾淋苗，购自山东绿都生物科技有限公司，批号：兽药生字（2008）151821001， 本品系用猪瘟兔化弱毒株接种兔，收获感染兔的脾脏及淋巴结 （简称脾淋），制成乳剂，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。每头份脾淋苗应不少于组织毒0.01g。

1.2 试验动物

从四川成都巨星猪业有限公司兴裕祖代猪场，选择同胎次种母猪2010年10月2日出生健康断奶仔猪8窝共80头。

1.3 主要试剂

猪瘟病毒抗体检测试剂盒，购自北京爱德士元亨生物股份有限公司，由美国IDEXX公司生产，批号为43220-S091。在使用前，试剂盒室温下恢复到18～25℃，试剂混合均匀。

1.4 主要仪器

一次性注射器、SIGMA高速台式离心机、Tip吸头、Promaga公司微量移液器、96孔酶标仪、湿盒、离心管、量筒（500mL） 等。

2 方法

2.1 试验动物分组和免疫

将试验仔猪随机分为A、B、C、D四组，每组 20头，分别按 A1～A20、B1～B20、 C1～C20、 D1～D20顺序打耳号编号。A组：免疫STK猪瘟活疫苗；B组：免疫ST猪瘟活疫苗；C组：免疫猪瘟脾淋组织苗；D组：注射相同体积的灭菌生理盐水。四组试验猪饲养管理条件相同，并同时于30日龄和60日龄每头肌肉注射相应疫苗进行猪瘟免疫见表1。

2.2 免疫血清采集与处理

试验组与对照组仔猪分别于10、20、 28、 35、 42、 55、 75、 90、 120、150、180天耳静脉采血，将所采血液转入Ep管，4000转/分钟离心5分钟，取上清，4℃或-20℃保存待检。

2.3 抗体检测方法

采用IDEXX—ELISA试剂盒按照说明书步骤进行检测，并分析抗体合格率（或阳性率）、阻断率等指标。

CSFV的ELISA的结果判定：猪瘟抗体检测试验（阻断ELISA）成立条件是阴性对照的平均OD450值大于0.50，阳性对照的阻断率大于50%，试验方成立有效。样品阻断率=（阴性对照平均OD450值－样品OD450）／阴性对照平均OD450×100%；被检样品的阻断率大于或等于40%，该样品为猪瘟抗体阳性；样品阻断率小于或等于30%，该样品为阴性（无猪瘟抗体存在）；样品阻断率在30～40%，该样品为可疑。

表1 试验仔猪免疫剂量及日龄

3 结果分析

3.1 仔猪不同日龄抗体阻断率检测结果

试验组仔猪28天起分阶段开始采血，30天首免，60天二免；对照组仔猪出生10天起开始采血，分离血清，采用IDEXX-ELISA试剂盒进行检测，结果见表2。

对照组：仔猪10日龄时，母源抗体水平较高，猪瘟抗体合格率为90%，其中65%仔猪抗体阻断率在40%～60%，25%仔猪抗体阻断率≥60%；随着日龄的增加，仔猪母源抗体水平逐渐下降，20日龄，抗体合格率为60%；28日龄仅为30%，35日龄，抗体合格率为0。

STK猪瘟活疫苗组：首免后25天（即55日龄），15%仔猪猪瘟抗体阻断率在40%～60%，5%仔猪抗体阻断率≥60%，抗体合格率为20%；二免后15天，35%仔猪猪瘟抗体阻断率在40%～60%，30%抗体阻断率≥60%，猪瘟抗体合格率为65%；仔猪在90日龄、120日龄，抗体阻断率均大于40%，合格率为100%；120日龄后，抗体水平开始逐步降低，到180日龄，猪瘟抗体合格率降为55%。

ST猪瘟活疫苗组：首免后25天（即55日龄），15%仔猪猪瘟抗体阻断率在40%～60%，5%抗体阻断率≥60%，抗体合格率为20%；二免后15天，25%仔猪抗体阻断率在40%～60%，25%抗体阻断率≥60%，抗体合格率为50%；90日龄，仔猪的抗体阻断率均≥40%，抗体合格率为100%；90～180日龄，抗体水平开始逐步降低，抗体合格率从100%降至50%。

猪瘟脾淋组织苗组：首免后25天（即55日龄），猪瘟抗体合格率为15%（阻断率均在 40%～60%）；二免后 15天，40%仔猪抗体阻断率在40%～60%，20%抗体阻断率≥60%，抗体合格率为60%；90日龄，60%仔猪抗体阻断率在40%～60%，35%抗体阻断率≥60%，抗体合格率为95%；90～180日龄，抗体水平逐步降低，抗体合格率从95%降为45%。

3.2 试验猪群猪瘟免疫合格率

猪瘟免疫合格率共同变化趋势：一免后，猪瘟免疫合格率有小幅度的升高，二免后至90日龄，猪瘟免疫合格率显著提高并接近或达到100%，90日龄之后，猪瘟免疫合格率逐渐降低。

差异之处：二免后，STK猪瘟活疫苗组免疫合格率上升速度均高于其他两种疫苗；且在90～120日龄间，均能保持100%合格率；120日龄后，猪瘟免疫合格率虽有下降，但下降幅度小于ST猪瘟活疫苗和猪瘟脾淋组织苗免疫组。

4 讨论

4.1 STK猪瘟活疫苗对仔猪的免疫效果优于ST猪瘟活疫苗和猪瘟脾淋组织苗

从表2、图1可看出，仔猪二次免疫STK猪瘟活疫苗后，90日龄猪瘟抗体的合格率达到100%，其中85%仔猪的抗体水平达到了比较高的滴度（阻断率≥60%，而根据美国IDEXX公司的数据显示，猪瘟抗体的阻断率在60%～80%是最理想的），且二次免疫后在整个生长期都能维持较高的抗体水平。说明STK猪瘟活疫苗对仔猪有很好的免疫效果。

免疫ST猪瘟活疫苗及猪瘟脾淋组织苗后，在90日龄猪瘟抗体的合格率虽能达到或接近100%，但抗体水平处于高滴度的比例不大，ST细胞苗40%仔猪抗体阻断率≥60%，脾淋苗只有35%仔猪抗体阻断率≥60%，均低于免疫STK猪瘟活疫苗的抗体水平，且维持较高抗体水平的时间短于STK猪瘟活疫苗。由此可见，STK猪瘟活疫苗的对仔猪的免疫效果优于ST猪瘟活疫苗和猪瘟脾淋组织苗。

4.2 猪瘟细胞苗与猪瘟脾淋苗优缺点比较

猪瘟活疫苗（兔源）脾淋苗，系用猪瘟兔化弱毒株接种兔，收获感染兔的脾脏及淋巴结（简称脾淋），制成乳剂，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。每头份脾淋苗应不少于组织毒0.01g。ST猪瘟活疫苗（传代细胞源），系用猪瘟兔化弱毒株接种易感细胞培养，收获细胞培养物，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。每头份含细胞毒液不少于0.015mL（每头份病毒含量≥7500个家兔感染量）。高效价猪瘟活疫苗（STK传代细胞源），系用猪瘟兔化弱毒株接种易感细胞培养，收获细胞培养物，加适宜稳定剂，经冷冻真空干燥制成。每头份含细胞毒液不少于0.015mL（每头份病毒含量≥7500个家兔感染量）。究竟哪种苗比较好呢，下面我们来做一详细分析。

从生产工艺方面看，细胞苗的质量应比脾淋苗稳定。因为细胞苗的苗毒是在实验室条件下通过细胞培养获得，其培养液、培养温度、培养时间及其他环境条件都是可控的，只要实验室人员具备基本的责任心，就完全可以做到苗毒剂量的相对稳定。而脾淋苗的苗毒则是通过把苗毒毒株接种到活体兔，使苗毒在兔体内复制，再定期收割兔体的脾脏和淋巴结获得。由于兔体个体对苗毒的敏感程度不一，从不同兔体收获的苗毒，其剂量可能存在很大差异。理论上，虽然脾淋苗的苗毒剂量可以通过把苗毒原液稀释到一定比例（如1︰50000）接种兔，观察接种兔是否出现发热反应来检测，但接种兔是否出现发热反应不仅与兔体对苗毒的敏感性有关，其他各种外界因素也起着很大作用。如果接种兔在观察期间刚好感染了其他病原，其发热反应就有可能是其他病原引起[1]。

表2 免疫不同猪瘟疫苗后不同日龄抗体阻断率分布情况

从生产成本上，脾淋苗的苗毒生产成本较高，疫苗生产厂家能否严格做到使用未曾接种过兔瘟疫苗的兔子来做脾淋苗，也是有待考证的。

细胞悬浮培养技术是当代最先进的抗原生产工艺技术，与传统的培养方式相比具有明显优势：一是单位细胞培养容积生产效率提高140倍以上；二是单位抗原效价提高10～100倍；这就大大降低了细胞苗的生产成本。实际上，我国猪瘟细胞苗的免疫效果早已经过严格的攻毒试验验证，只要疫苗质量过关，则完全可以放心使用。既然廉价的猪瘟细胞苗已经能够有效预防猪瘟，就完全没有必要选择成本高、免疫效果又不及细 胞 苗 的 脾 淋 苗[2，3]。

STK猪瘟活疫苗与ST细胞苗，均属于ST传代细胞苗，STK猪瘟活疫苗是在ST细胞苗的基础上添加了免疫增强剂的成分，使其免疫效果优于ST细胞苗。

4.3 初生仔猪猪瘟母源抗体的消长规律分析

表2和图1表明，对照组猪瘟母源抗体随着仔猪日龄增长而下降，约35日龄猪瘟母源抗体降为0，结果和资料报道母源抗体衰退的规律一致[4，5]。由以上试验结果可知，猪群在首次免疫猪瘟活疫苗（传代细胞源）后15～30天，抗体阻断率提升并不显著，但二次免疫后抗体阻断率大幅度提高，取得了理想的免疫效果。

5 小结

目前国内猪场控制猪瘟都主要采取预防接种的措施，但由于疫苗种类较多效果不一，免疫程序不同，地区间差异较大，综合防治措施各异，导致猪瘟不能得到有效控制，要做到有效免疫，控制猪瘟的发生，选好疫苗是关键[6]。仔猪采用30日龄首免，60日龄二免的免疫程序免疫STK猪瘟活疫苗后，能产生较高的抗体阻断率，二次免疫后免疫合格抗体水平能维持约4个月，且免疫效果优于其他疫苗（ST猪瘟活疫苗和猪瘟脾淋组织苗）；由于特殊的生产工艺，STK猪瘟活疫苗不仅生产成本低廉，而且抗原效价高、稳定性好，适合推广使用。

[1]蒋冬福，施万球，韦家槐，等.兔脾淋组织液对猪瘟疫苗的免疫增强试验.中国兽医杂志， 2001， 37（7）:10-11.

[2]韩雪清，刘湘涛，赵启祖.猪瘟病毒及其猪瘟疫苗研究进展.动物医学进展，2000， 21（2）： 1-7.

[3]卞春玲，罗满林.猪瘟疫苗研究进展.畜牧兽医科技信息，2003（1）:14-17.

[4]周相华，韩喜连.猪瘟免疫接种抗体效价检测试验.中国动物检疫，2006，23（7）:35-36.

[5]李明义，白志娟，赵雪丽，等.猪瘟抗体消长规律动态研究.中国动物检疫，2004， 21（8）:24-26.

[6]范秀波，赵玉军.猪瘟疫苗研究进展，吉林畜牧兽医，2007，38（1）:32-34.