高效液相色谱法测定便血颗粒方中盐酸小檗碱的含量

胡忠红

（东台市中医院，江苏 东台 224200）

便血颗粒方是东台市中医院肛肠科多年来应用的协定处方，方中以黄连、制大黄、槐角、枳壳、黄芩、荆芥、防风、生地黄等浓缩颗粒组成，其中黄连中的盐酸小檗碱是主要活性成分之一，《中国药典》2000年版一部采用薄层扫描法测定黄连中盐酸小檗碱的含量，操作比较烦琐，重现性差。根据文献［1-2］中黄连的测定方法，用高效液相色谱法测定便血颗粒方中盐酸小檗碱的含量，方法简便，重现性好。

1 仪器与试药

Waters 600E高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters 2487双通道紫外-可见检测器（美国Waters公司）；JS-3030色谱工作站（大连江申分离技术公司）；AE240电子分析天平（瑞士Mettle公司）；超声波清洗器（无锡超声电子设备厂）；乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水；其它试剂均为分析纯。盐酸小檗碱对照品（Berberine hydrochloride）购于中国药品生物制品检定所（编号：0913-0910）供含量测定用。便血颗粒方中诸药均为江苏省江阴天江药业有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil-C18（大连化学物理研究所）；流动相：0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节pH至3）∶乙腈（70∶30）；流速：1mL/min；检测波长：270nm；柱温：20℃。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于2 500；进样量10μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品约10mg精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（1mL中含盐酸小檗碱220μg）。

2.2.2 供试品溶液的制备 便血颗粒方溶液的制备：便血颗粒方颗粒按配方比例混合均匀后取约2.0g，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇40mL，超声处理60min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液。精密吸取续滤液1mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 线性关系考察 精密吸取对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，分别置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取不同浓度的对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以对照品进样量（X）对峰面积积分值（Y）进行线性回归，结果在0.45～2.20μg范围内呈良好的线形关系，其回归方程：Y=860 834X-18 533，r=0.9 999，n=5。

2.4 精密度考察 精密吸取对照品溶液10μL，重复进样5次，测定。结果RSD=0.23％。

2.5 稳定性试验 以同一供试品溶液依法每隔1h测定1次。结果表明，盐酸小檗碱含量在4h内稳定，RSD=1.3％。

2.6 重复性试验 精密称取同一批号样品5分，依法测定盐酸小檗碱的含量。结果RSD=0.13％。

2.7 回收率试验 用加样回收法测定。精密称取已知的样品，分别精密加入同一量的盐酸小檗碱对照品，按2.2.2项下方法测定。结果平均回收率为99.01％（n=6，RSD=1.44％）。

2.8 样品测定结果 便血颗粒方颗粒：精密吸取便血颗粒方颗粒溶液，依法测定，计算盐酸小檗碱的含量，结果见表1。

表1 便血颗粒方颗粒测定结果

3 小结

用高效液相色谱法对便血颗粒方中的盐酸小檗碱进行定量分析，较薄层色谱法操作简便、精确度高、重现性好。

中药配方颗粒剂是继中药材、中药饮片、中成药后的新剂型，目前对制剂质量控制上的研究报道较少，笔者认为，本项研究除了对有效成分或指标成分进行量化，还需要其它的定性、检查等一系列标准，以确保配方颗粒与其饮片的等效性。

［1］赵陆华.高效液相色谱法分析中药成分手册［M］.北京：中国医药科技出版社，1994：548-560.

［2］苗明三.现代实用中药质量控制技术［M］.北京：人民卫生出版社，2000：900-921.