韭菜子不同炮制品对正常和肾阳虚小鼠交配能力的影响

吴文辉， 胡昌江， 刘俊达， 李 倩， 龙兰艳

(成都中医药大学药学院，四川成都611137)

韭菜子为百合科植物韭菜Allium tuberosum Rottl.ex Spreng.的干燥成熟种子，具有温补肝肾，壮阳固精，暖腰膝的功效，始载于《名医别录》，列为中品，苏颂谓:“案许宋说文，韭字象叶出地上形，一种而久生，故谓之韭，一岁三、四割，其根不伤，至冬壅培之，先春复生”［1］。韭菜子作为壮阳补肾用入药在我国已有数千年历史之久，韭菜子炮制入药的历史同样悠久，至汉代《华氏中藏经》“酒浸三宿，滤出焙干，杵为末”［2］开始有炮制方法的记载，随着朝代更替其炮制方法也有着丰富发展。从汉代到清代韭菜子记载的炮制方法有:酒浸焙、酒炙、醋炙、炒制、蒸曝炒等，但历代文献均未见有盐炙炮制方法的记载［3］，而韭菜子现代的炮制方法比较统一，自《中国药典》1977年版以后均仅收载盐炙法，酒炙法只在各地方标准收载［4］。为了研究传统酒炙韭菜子对治疗肾阳虚的作用，本实验通过生品，盐炙品以及酒炙品对正常和肾阳虚小鼠交配能力影响的对比研究，为临床合理用药提供科学依据［5］。

1 实验材料与仪器

1.1 材料 氢化可的松注射液 (100 mg/20 mL，天津金耀氨基酸有限公司，批号1004072)，乙烯雌酚片 (0.5 mg/片，上海利生制药厂，批号:20090505)，氯化钠注射液 (500 mL/瓶，四川科伦药业有限公司，批号:1008251)，韭菜子购于成都荷花池药材市场，经成都中医药大学胡昌江教授鉴定为百合科韭菜的种子，盐炙和酒炙按照《中国药典》2010年版炮制方法炮制。

1.2 实验动物 昆明种小白鼠，成都达硕生物科技有限公司提供，实验动物生产许可证号:SCXK(川)2008-24。

1.3 实验仪器 JJ200电子天平 (感量0.01 g，常熟市双杰测试仪器厂)，计时秒表 (中国卡西欧有限责任公司)，红外线摄像头 (台湾多安科技有限公司)。

2 实验方法

2.1 药物制备 韭菜子按照《中国药典》2010年版盐炙与酒炙方法炮制［6］。由于对韭菜子有效化学物质基础不明确［7-8］，故本实验采用醇水双提的方法。取韭菜子140 g，分别用10倍量和8倍量75%乙醇提取两次，残渣再用10倍量与8倍量水提取两次，第1次1.5 h，第2次1 h。合并滤液减压回收，浓缩至1.08 g生药/mL，放冰箱冷藏备用。阳性药物制备:金匮肾气丸52 g，用130 mL水溶解，放冰箱冷藏备用［9］。乙烯雌酚混悬液制备:乙烯雌酚片0.5 mg碾碎成粉末，用25 mL水配制成混悬液［10-12］。

2.2 韭菜子不同炮制品对肾阳虚小鼠交配能力的影响 昆明小鼠雄性60只，雌性3只，体质量22～25 g。雄性小鼠按体质量随机分为6组:正常对照组，模型组，金匮肾气丸组，生品韭菜子组，盐炙韭菜子组，酒炙韭菜子组，每组10只。正常对照组和模型组灌胃纯水0.4 mL/20 g，其余各组分别灌胃相应药物0.4 mL/20 g，每日一次，连续30 d。从给药第4天开始，除正常对照组皮下注射生理盐水0.1 mL/20 g外，其余各组均注射氢化可的松0.1 mL/20 g，每日一次，连续7 d，造模同时连续给药［13-14］。于给药后第30天给药1 h后观察30 min内交配能力实验，雌性小鼠于交配前3天按照0.4 mL/20 g灌胃乙烯雌酚混悬液，使之发情时间同步于交配时间，结果见表1。

2.3 韭菜子不同炮制品对正常小鼠交配能力的影响 昆明小鼠雄性48只，雌性小鼠3只，体质量22～25 g，雄性小鼠按体质量随机分成4组:正常组，生品组，盐炙品组，酒炙品组，每组12只。正常组灌胃纯水0.4 mL/20 g，其余各组灌胃相应药物0.4 mL/20 g，每日一次，连续30 d。于给药后第30天给药1 h后观察30 min内交配能力实验，雌性小鼠于交配前3天按照0.4 mL/20 g灌胃乙烯雌酚混悬液，每日一次，使之发情时间同步于交配时间，结果见表2。

表1 对肾阳虚小鼠交配能力的影响Tab.1 Impact of mating ability to yang deficiency mice

表2 对正常小鼠交配能力的影响Tab.2 Impact of mating ability to normal mice

2.4 统计学处理 数据采用SPSS17.0统计软件处理，两组间比较用Student T检验，多组间比较用Dunett T检验。

3 结论与讨论

3.1 表1中数据表明:韭菜子生品和盐炙品仅对肾阳虚小鼠的跨骑次数增加有统计学差异 (P＜0.05)，韭菜子酒炙品对肾阳虚小鼠的潜伏时间减少和跨骑次数增加均有显著性统计学差异 (P＜0.01)，酒炙品组与盐炙品组和生品组之间进行比较，结果显示酒炙品组在跨骑次数的增加上与生品组和盐炙品组有统计学差异且更优 (酒炙品组与生品组比较P＜0.05，酒炙品组与盐炙品组比较P＜0.05)。表2中数据表明:韭菜子生品和盐炙品对正常小鼠的跨骑潜伏时间减少和跨骑次数的增加没有统计学差异，酒炙品对正常小鼠的潜伏时间减少 (P＜0.05)和跨骑次数增加 (P＜0.01)均有统计学差异，跨骑动物百分比也明显提高，酒炙品组与盐炙品组和生品组之间进行比较，结果显示酒炙组在跨骑次数的增加上与生品组和盐炙品组有统计学差异且更优 (酒炙品组与生品组比较P＜0.05，酒炙品组与盐炙品组比较P＜0.05)。综上所述，韭菜子在用于治疗肾阳虚时应用酒炙品。

3.2 韭菜子生品组能显著提高氢化可的松造模后小鼠的交配能力，说明韭菜子本身具有壮阳补肾的功效。模型组小鼠采用氢化可的松造模后，与正常组比较，小鼠的跨骑潜伏时间显著延长，跨骑次数显著减少，说明小鼠经氢化可的松造肾阳虚模型后能显著降低小鼠交配能力，从肾主生殖的方面再次验证氢化可的松造肾阳虚模型的适用性。韭菜子生品组与盐炙组比较，跨骑潜伏时间和跨骑次数没有统计学差异，从传统中药炮制理论方面盐制入肾以及缓和药物燥性和古书记载韭菜子在临床应用中存在燥性，说明韭菜子盐炙可能主要作用是降低其燥性而非增强其补肾壮阳之功效，本课题组也将对韭菜子盐炙降低其燥性做进一步研究。韭菜子酒炙品在跨骑次数增加上优于生品与盐制品，与传统酒炙理论相符，也进一步验证了传统炮制理论中认为酒炙壮阳，同时也说明酒炙才是增强韭菜子补肾壮阳的主要原因，本课题也将对酒炙韭菜子的化学物质基础以及酒炙增强其补肾壮阳作用的机理做进一步研究。

［1］中国植物志编辑委员会.中国植物志:第14卷［M］.北京:北京科学出版社，1980:170.

［2］华 佗(汉).华氏中藏进［M］.北京:中华书局，1985:50.

［3］中国中医研究院中药研究所.历代中药炮制资料辑要［M］.北京:内部出版，1973.

［4］福建省卫生厅.福建省中药炮制规范［S］.福州:福建科学技术出版社，1988:348.

［5］龚千锋.中药炮制学［M］.北京:中国中医药出版社，2003:228.

［6］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:244.

［7］胡国华.韭菜籽化学成分及其生物活性研究［D］.上海:华东理工大学，2006.

［8］胡国华，卢艳花，魏东芝.韭菜籽核苷类化学成分研究［J］.中草药，2006(6):33-34.

［9］彭蕴茹，沈明勤，罗宇慧，等.金匮肾气丸防治小鼠肾阳虚的实验研究［J］.中成药，2004，26(5):395-397.

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［11］张永祥.中药药理学新论［M］.北京:人民卫生出版社，2004:427.

［12］李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海:上海科技出版社，2006:597.

［13］邵命海，肖 静，王毅兴，等.从“肾主生殖”角度评价腺嘌呤与氢化可的松诱导的肾阳虚模型［J］.上海中医药杂志，2008，42(2):57-59.

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