血小板相关抗体检测与骨髓形态学在特发性血小板减少性紫癜诊断中的应用价值

邢江涛，张玉娜，孙 洁，陶朝欣，刘 璐，朱 芸

（1.河北省石家庄市平安医院检验科，河北石家庄 050021；2.河北医科大学第二医院外宾病房，河北石家庄 050000；3.河北医科大学第二医院检验科，河北石家庄 050000）

血小板相关抗体检测与骨髓形态学在特发性血小板减少性紫癜诊断中的应用价值

邢江涛1，张玉娜1，孙 洁2，陶朝欣1，刘 璐1，朱 芸3*

（1.河北省石家庄市平安医院检验科，河北石家庄 050021；2.河北医科大学第二医院外宾病房，河北石家庄 050000；3.河北医科大学第二医院检验科，河北石家庄 050000）

目的探讨血小板相关抗体（platelet-associated antibody，PAIg）与骨髓形态学在特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）诊断中的临床价值，以及PAIg与血小板计数的关系。方法应用流式细胞仪检测30例ITP患者PAIg，同时对血象、骨髓形态学进行观察。结果血小板抗体阳性率80.0%（24/30），其中IgG79.0%，IgA33.0%，IgM62.0%。3项同时阳性者3例（12.5%），2项同时阳性者12例（50.0%），1项阳性率9例（37.5%）。骨髓象显示巨核细胞增多，以成熟受阻为主要表现，有少数患者巨核细胞正常或减少。结论3种血小板抗体IgG、IgA、IgM含量差异无统计学意义（P＞0.05），但存在以下趋势，即血小板计数越低，血小板抗体水平越高。PAIg检测是诊断ITP的有效指标，也可了解ITP的发展程度，还可以用于治疗ITP预后的疗效观察。

紫癜，血小板减少性，特发性；抗体；流式细胞术

特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）是因免疫机制造成血小板破坏增多的一种出血性疾病，又称免疫性血小板减少性紫癜。ITP诊断缺乏特异性诊断指标，骨髓形态学检查多以排除其他血小板减少性疾病而确诊。血小板相关抗体（platelet associated antibodies，PAIg），大多结合在血小板表面，产生抗血小板抗体，导致血小板破坏增加，数量减少。近年来，利用流式细胞仪检测PAIg已成为诊断ITP的重要指标。本研究应用流式细胞仪检测30例ITP患者PAIg，同时对血象、骨髓象形态学进行观察，旨在探讨PAIg与骨髓形态学在ITP诊断中的临床价值，以及PAIg与血小板数量的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2010年1月—2011年4月门诊及住院ITP患者30例，男性14例，女性16例，年龄3～71岁，平均32.5岁。诊断均符合张之南《血液病诊断及疗效标准》［1］。

1.2 方法

1.2.1 试剂与仪器：PAIgG、PAIgA、PAIgM为美国Caltag公司产品，流式细胞仪Epics XLⅣ型为美国贝克曼-库尔特公司生产。

1.2.2 血小板分离：抽取空腹血 2mL，放入EDTA-K2抗凝管中，轻轻混合，800r/min离心10min。吸取富含血小板血浆，2 500r/min离心5min。弃上清液，加入PBS洗涤，2 500r/min离心5min，反复3次，弃上清液，加入PBS重悬血小板，调至20×106/L左右。

1.2.3 抗体标记：取5只试管，分别标注同型、IgG、IgA、IgM，加入相应单抗各10μL，每管加调整后的血小板各50μL，室温避光30min，在标记好的各管中加入PBS洗涤，2 500r/min离心5min。弃上清液。加500μL PBS避光10min

1.2.4 检测分析：选样FSLog和SSLog及FL1 3个参数，根据FS和SS圈定血小板，分析血小板FL1（荧光1）荧光强度。每份标本获取设门内细胞10 000个以上，检测各个指标的阳性率和荧光强度，数据分析使用EXPO 32 ADC分析软件。

1.2.5 血细胞形态学观察：30例骨髓涂片、外周血涂片经瑞-姬染色后，在光学显微镜下，血涂片计数100个白细胞，骨髓涂片计数200个有核细胞，计数全片巨核细胞总数，并进行分类，求其百分比。观察各型巨核细胞形态学特征。

1.3 统计学方法：应用Minitab统计软件分析数据，计量资料以±s表示，采用单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 PAIg阳性情况：PAIg阳性率80.0%（24/ 30），其中IgG79.0%，IgA33.0%，IgM62.0%。3项同时阳性3例（12.5%，3/24）。2项同时阳性12例（50.0%，12/24），其中IgG、IgM阳性9例，IgG、IgA阳性 2例，IgA、IgM阳性 1例。1项阳性 9例（37.5%，9/24），其中IgG5例，IgA 2例，IgM 2例。

2.2 PAIg与血小板数量分析：根据血小板计数结果将样本划分为高（ ＞50×109/L）、中（30～50× 109/L）、低（＜30×109/L）3组，3组IgG、IgA、IgM含量差异无统计学意义（P＞0.05），但存在以下趋势，即血小板计数越低，血小板抗体水平越高，见表1。

表1 血小板计数与PAIg的关系Table 1 Comparison of platelet count and platelet antibody detection（±s，%）

表1 血小板计数与PAIg的关系Table 1 Comparison of platelet count and platelet antibody detection（±s，%）

Platelet count（×109/L） n IgG IgA IgM＞50（52～94）5 3.51±4.42 1.48±1.56 2.84±2.19 30～50（32～40） 6 10.10±12.63 3.08±3.24 8.35±9.10＜30（5～21） 13 12.30±11.32 3.99±6.41 12.17±13.50 F 1.215 0.434 1.287 P 0.317 0.654 0.298

2.3 外周血及骨髓象形态学：①血红蛋白正常27例（90.0%），伴有缺铁表现3例（10.0%）。②白细胞正常25例（83.3%），白细胞增高5例（16.7%）。③血小板减低30例（100.0%）。④增生活跃16例（53.3%），增生明显14例（46.7%）。⑤粒/红比值正常16例（53.3%），减低13例（43.3%），增高1例（3.3%）。⑥巨核细胞增高25例（83.3%），减低4例（13.3%），正常1例（3.3%）；巨核细胞分类，幼稚型巨核细胞4.0%，颗粒型巨核细胞80.0% ～100.0%，产板型巨核细胞4.0% ～12.0%，裸核型巨核细胞4.0%～12.0%。

3 讨 论

ITP属于自身免疫性疾病，患者临床以皮肤、黏膜、脏器出血及血小板减少为主要表现。关于ITP诊断现状，近期国际工作小组及美国血液学年会提出，3个月以内称“新诊断的ITP”，3～12个月称为“持续性ITP”，12个月以上称为“慢性ITP”，有需要治疗的出血症状或出现新的出血症状为“重症ITP”［2］。对于血小板＞30×109/L的患者，如果没有出血，可以不给予治疗［3］。ITP发病机制多认为与免疫异常有关［4-5］。PAIg是造成免疫性血小板减少的主要原因，PAIg大多结合在血小板表面，利用流式细胞仪检测PAIg已成为诊断ITP的重要指标［6-8］。关于PAIgA、PAIgG、PAIgM与血小板计数关系的报道，结果也不完全一致。薛磊等［9］检测了59例ITP患者，PAIgA94.9%，PAIgM 88.1%，PAIgG 94.9%，3种同时阳性率78.0%，其中以PAIgA表达最高。方拥军等［10］检测了53例ITP患者，PAIgG（77.00±20.99）%，PAIgM（62.00±24.91）%，PAIgA（48.98±25.36）%，以PAIgG表达最高。本研究 PAIg检 测 总 阳 性 率 80.0%，其 中PAIgG79.0%，PAIgM62.0%，PAIgA33.0%，2种以上混合性抗体阳性率62.5%，结果略低于文献报道［9-10］。本研究3种血小板抗体含量间差异无统计学意义（P＞0.05），但存在以下趋势，PAIgG＞PAIgM＞PAIgA，血小板计数越低，血小板抗体水平越高。与相关报道结果一致［6，10-11］。

骨髓形态学检查诊断ITP，虽然以排除其他血小板减少性疾病而确诊，但它是诊断ITP不可缺少的基础技术手段之一。ITP的极少数患者有轻度贫血或白细胞增高，骨髓象增生程度多以增生活跃或明显活跃为主。巨核细胞增多或正常，极少数患者巨核细胞减少或缺如，以颗粒型巨核细胞增多为主，产板型巨核细胞减少。以巨核细胞成熟受阻为主要表现，可能是巨核细胞和血小板含有共同抗原，PAIg也可抑制骨髓中的巨核细胞发育，影响血小板的产生，使其发生成熟障碍。个别患者由于出血可伴有轻度缺铁性贫血或伴有感染表现。近年来，随着医学科学技术的迅猛发展，流式细胞仪以快速检测、灵敏度高、重复性好、准确度高、所需标本量少等优点在临床诊断及研究中得到广泛应用，即使血小板计数＜10×109/L仍可分析。流式细胞仪也存在特异性差的不足，如果仅依靠PAIg检测诊断ITP，可能会导致误诊。临床上引起血小板减少的疾病有很多，如白血病、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血等血液系统疾病［12］，骨髓形态学与PAIg联合检测才能保证ITP的正确诊断。随着对ITP发病机制的研究不断深入［13-14］，对于ITP的诊断与治疗将不断完善。

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（本文编辑：刘斯静）

THE APPLICATION VALUE OF DETECTING PLATELET ASSOCIATED ANTIBODY AND BONE MARROW MORPHOLOGY IN THE DIAGNOSIS FOR IDIOPATHIC THROMBOCYTOPENIC PURPURA

XING Jiangtao1，zHANG Yuna1，SUN Jie2，TAO Chaoxin1，LIU Lu1，zHU Yun3*
（1.Department of Laboratory，Shijiazhuang Pingan Hospital，Hebei Province Shijiazhuang 050021，China；2.Department of Foreign Guests Ward，the Second Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，China；3.Department of Laboratory，the Second Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，China）

ObjectiveTo investigate the value of platelet-associated antibody（PAIg）and bone marrow morphology in the diagnosis of idiopathic thrombocytopenic purpura（ITP）and the correlation between the platelet relative antibody and number of platelet count.MethodsThe platelet associated IgG（PAIgG）in peripheral blood of the 30 patients with ITP were detected by flow cytometry（FCM），meanwhile the hemogram bone marrow morphology were observed.ResultsIn the 30 patients，there were 24 cases whose platelet antibody was positive，the positive rate was 80.0%，of which IgG 79.0%，IgA 33.0%，IgM 62.0%，among them there were 3 cases whose three platelet antibodies simultaneous positive（12.5%），12 cases whose two antibodies positive（50.0%），and 9 cases whose one positive（37.5%），The Bone marrow examination of most ITP patients revealed that the numbers of the megalokaryocyte（MK）were increased and its main manifestation was the maturation arrest of MK.But in a few ITP patients the numbers of the MK were normal or decreased.ConclusionThere is a tendency in the levels of PAIgG，PAIgA，PAIgM，The lower expression of platelet count，the higher expression of platelet antibodies.Therefore the PAIgG can be used as an effective indicator in the diagnosis，clinicaltreatment and prognostic evaluation of ITP.

purpura，thrombocytopenic，idiopathic；antibodies；flow cytometry

R554.6

A

1007-3205（2012）11-1283-03

2012-04-12；

2012-07-04

邢江涛（1976-），男，河北廊坊人，河北省石家庄市平安医院主管检验师，医学硕士，从事血液病形态学诊断及染色体技术研究。

*通讯作者。E-mail：zhuyun_2008@yahoo.com.cn

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.11.018