桦褐孔菌多糖对急性感染弓形虫小鼠血清中IL－1β及IL－12含量的影响

姚 琳，王韵箎，鞠玉琳

（延边大学农学院动物医学系，吉林延吉 133002）

刚地弓形虫（Toxoplasmagondii）是一种机会 性寄生原虫，在细胞免疫功能缺陷、受损或者先天性弓形虫感染的人群中常有较高的发病率和死亡率［1－3］，刚地弓形虫可感染人和多种动物，引起人兽共患弓形虫病。李佳佳等［4］证明桦褐孔菌多糖能促进急性感染弓形虫小鼠细胞因子IL－2、IFN－γ的释放，达到抗弓形虫的目的。本试验通过研究桦褐孔菌多糖对急性感染弓形虫小鼠血清中细胞因子IL－12、IL－1β的影响，为桦褐孔菌多糖治疗急性感染弓形虫小鼠早期作用机制提供理论依据，进一步在分子免疫水平上探讨桦褐孔菌多糖抗弓形虫的作用机理。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品与试剂 桦褐孔菌多糖的提取方法在文献［5］方法的基础上进行改良，获得的桦褐孔菌多糖含量为49.45%。小鼠血清IL－12、IL－1βELISA检测试剂盒，购自RB公司。

1.1.2 虫株与实验动物 弓形虫RH株由日本带广原虫病研究所惠赠，延边大学农学院药理实验室保种，液氮保存。昆明种小鼠，体重18g～22g，由延边大学医学院小动物实验中心提供。

1.2 方法

1.2.1 急性感染弓形虫小鼠模型的建立 接种RH株的小鼠72h后处死，并用生理盐水洗涤腹腔，适当稀释后计数备用。除阴性组外，其余各组小鼠腹腔接种RH株弓形虫速殖子102个／只，阴性组小鼠腹腔注射生理盐水0.2mL／只。在感染前3d开始灌胃桦褐孔菌多糖，总共6d。

1.2.2 小鼠血清的制备及细胞因子IL－12、IL－1β的测定 取健康雄性昆明种小鼠45只，随机分为3组，即阴性组，急性感染弓形虫小鼠模型组，桦褐孔菌多糖试验组。阴性组及模型组每天灌胃蒸馏水0.2mL／只，试验组每天灌胃桦褐孔菌多糖0.2 mL／只。于接种后12、24、36、48、60h摘眼球采血，分离血清，置－20℃保存备用。用时分别将IL－1β、IL－12组待测血清原倍、100倍稀释，按试剂盒说明书进行测定，根据所给标准品绘制标准曲线，将OD值换算成浓度（pg／mL）。

1.2.3 数据处理及统计 对试验结果进行方差分析，结果用±SD表示。数据差异显著性采用SPSS12.0软件进行单因素ANOVA t检验。

2 结果

2.1 小鼠血清中IL－12的测定

分别在12、24、36、48、60h采集阴性组、模型组、试验组的小鼠全血，分离血清，用时将待测血清稀释100倍，按试剂盒说明书进行测定，将OD值换算成浓度如表1所示。

由表1可知，阴性组中不同时间之间无显著性差异（P＞0.05）；模型组中不同时间比较均呈极显著差异（P＜0.01）；试验组中24h和60h比较差异不显著（P＞0.05），12、36、48h相比较均呈极显著差异 （P＜0.01）；模型组和试验组与阴性组比较均呈极显著差异 （P＜0.01）；模型组及试验组IL－12的峰值均出现在36h，48h开始下降，但试验组IL－12值一直高于阴性组，低于模型组。

2.2 小鼠血清中IL－1β的测定

分别在12、24、36、48、60h采集阴性组、模型组、试验组的小鼠全血，分离血清，按试剂盒说明书进行测定，将OD值换算成浓度如表2所示。

表1 各组小鼠不同时间血清中IL－12水平比较Table1 The serum level of IL－12in different time among different groups in mice

表2 各组小鼠不同时间血清中IL－1β水平比较Table 2 The serum level of IL－1βin different time among different groups in mice

由表2可知，阴性组中不同时间之间无显著性差异（P＞0.05）；模型组中不同时间比较均呈极显著差异（P＜0.01）；试验组中12、48、60h比较差异不显著（P＞0.05），24h和36h比较呈极显著差异（P＜0.01）；模型组和试验组与阴性组比较均呈极显著差异 （P＜0.01）；模型组及试验组的IL－1β峰值均出现在24h，36h开始下降，但试验组IL－1β值一直高于阴性组，低于模型组。

3 讨论

宿主感染弓形虫后，多种细胞和细胞因子在机体免疫中起重要作用。目前已发现29种白介素（IL），在细胞间相互作用、免疫调节、造血以及炎症过程中发挥重要调节功能［6］。IL－1β由活化的巨噬细胞产生，是早期免疫反应的介质，能促进IL－2、IFN－γ等细胞因子的产生，增强细胞毒性T淋巴细胞和 NK 细胞的杀虫活性。IL－12［7－8］由巨噬细胞分泌，其通过诱导和调节T淋巴细胞、NK细胞、淋巴因子活化的杀伤细胞等产生IFN－γ、TNF－α等细胞因子来杀伤弓形虫［9］。本研究结果显示，用药3d后模型组和试验组小鼠血清中细胞因子IL－12和IL－1β表达量分别在36h和24h达到高峰，而后呈现下降趋势，而试验组于用药3d后在12h～60h期间IL－12、IL－1β值一直高于阴性组，低于模型组，表明桦褐孔菌多糖能够抑制急性感染弓形虫小鼠血清中细胞因子IL－1β、IL－12的过度释放。至于桦褐孔菌多糖对急性感染弓形虫小鼠血清中细胞因子IL－12和IL－1β的调节，是否通过影响IL－2、IFN－γ而间接达到抗虫目的，还有待于进一步研究。

李佳佳等［5］试验结果证明，桦褐孔菌多糖可使急性感染弓形虫小鼠血清中IFN－γ、IL－2值升高到适当水平，并可有效调节染虫小鼠CD4＋、CD8＋T细胞比例；刘妍等［10－11］的病理学试验结果证明，桦褐孔菌多糖能减轻染虫小鼠病理损伤，提高染虫小鼠生殖器官机能，促进染虫小鼠及孕鼠功能胎鼠的发育。本试验结果表明，桦褐孔菌多糖能够抑制急性感染弓形虫小鼠血清中细胞因子IL－1β、IL－12的过度释放。上述结果充分的说明桦褐孔菌多糖能有效的通过调节小鼠的细胞免疫功能来减轻弓形虫病对机体的伤害。本试验用为桦褐孔菌多糖治疗急性感染弓形虫小鼠早期作用机制提供了科学依据，同时为弓形虫病的防控提供了新思路。

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