RP－HPLC法同时测定人体中富马酸喹硫平和氯氮平浓度

于海燕 何粤红 胡冬竹 胥小叶

云南省精神病医院药剂科，云南 昆明 650224

RP－HPLC法同时测定人体中富马酸喹硫平和氯氮平浓度

于海燕 何粤红 胡冬竹 胥小叶

云南省精神病医院药剂科，云南 昆明 650224

目的：建立同时测定人血浆中喹硫平与氯氮平的反相高效液相色谱法。方法：以Agilent Herpesil ODS C18柱（250mm× 4mm，5μm）为色谱柱，流动相为甲醇∶水（70∶30），每250ml水中加入0.55ml三乙胺；流速1.2ml·min－1；柱温40℃；检测波长254nm。以乙酸乙酯为提取剂。结果：喹硫平在40～800ng·ml－1、氯氮平在20～1000ng·ml－1浓度范围内，峰面积与其浓度呈良好线性关系；喹硫平、氯氮平的高、中、低浓度相对平均回收率分别为101.86%、97.35%、101.56%和98.65%、97.69%、102.06%；日内、日间RSD均＜9%（n＝5）。分析方法的检测限10 ng·ml－1；喹硫平标准曲线回归方程为：Y＝0.20665388X＋2.186141，r＝0.99479（n＝9），氯氮平的标准曲线回归方程为Y＝0.31172966X－3.215692，r＝0.99795（n＝9）。结论：该方法灵敏、准确、简单、快捷，可用于临床喹硫平与氯氮平的血浆浓度监测和药物动力学研究。

喹硫平；氯氮平；血药浓度；高效液相色谱；反相

富马酸喹硫平（Quetiapine Fumarate），化学名称11－｛4－［2－（2－羟基乙氧基）乙基］－1－哌嗪基｝二苯骈［b，f］［1，4］硫氮杂卓半富马酸盐，属新型抗精神病药，为脑内多种神经递质受体拮抗剂，喹硫平作用机理尚未明确，可能是通过拮抗中枢D2受体和5－HT2受体来发挥其抗精神分裂症作用的。该药在治疗剂量范围内使用安全，不良反应少。在临床用药范围内，血浆浓度与剂量呈线性关系。

氯氮平（Clozapine），化学名称8－氯－11－（4－甲基－1－哌嗪基）－5H－二苯并［b，e］二氮杂卓，为一种非典型抗精神病药物，较少引起锥体外系反应。对脑内5－羟色胺（5－HT2A）受体和多巴胺受体具有阻滞作用。

临床上，喹硫平和氯氮平常联合用于治疗难治性的精神分裂症患者，笔者参考相关文献，建立了一种简单、快速同时测定人血浆中喹硫平和氯氮平的反相高效液相色谱法，并应用于临床血药浓度检测。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪（Agilent 1100，包括G1379A在线脱气机、G1311A四元泵、G1313A自动进样器、G1316A可调柱温恒温箱、G1314A可变波长紫外检测器和Agilent色谱化学工作站），快速混匀器（XK96－A，姜堰市新康医疗器械有限公司），电子分析天平（BP61S，德国赛多利斯股份有限公司），小型通用离心机（TGL－16GB，上海安亭科学仪器厂），真空干燥箱（ZKF040，上海实验仪器厂有限公司）。

1.2 药品和试剂 喹硫平与氯氮平对照品（均由湖南洞庭药业股份有限公司提供，含量均＞99%），甲醇（Fisher Scientific公司，色谱纯），三乙胺（天津市光复精细化工研究所，分析纯），乙酸乙酯（天津市瑞金特化学品有限公司，分析纯），水为哇哈哈纯净水。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的配制 精密称取喹硫平对照品与氯氮平对照品各10.0mg，分别置于2个25ml量瓶，加甲醇溶解，并定容至25ml，置冰箱4℃保存。临用时用甲醇稀释成所需浓度的喹硫平与氯氮平对照品溶液。

2.2 色谱条件 色谱柱：Agilent Herpesil ODS C18柱（250mm×4mm，5μl）；流动相：甲醇∶水（70∶30），每250ml水中加入0.55ml三乙胺；流速1.2ml·min－1；柱温40℃；检测波长254nm；灵敏度AUFS为0.01。

2.3 样品处理方法 取含喹硫平与氯氮平的血浆样品0.4ml，加NaOH液0.1ml，快速振荡数秒，加入乙酸乙酯1.2ml，密塞，涡旋振荡3min，3600r·min－1离心10min。吸取上清液，32℃真空干燥至干。进样前加入甲醇40μl快速振荡数秒溶解残渣，吸取15μl进样。

2.4 色谱分离情况 在本实验条件下，空白血浆、喹硫平与氯氮平对照品血浆，以及精神患者服药后的血浆样品，经高效液相色谱分析法测定，得到的色谱图见图1。由图1可知，喹硫平与氯氮平的色谱峰能够完全分离。喹硫平与氯氮平的保留时间为4.70min和5.50min。

2.5 标准曲线的制备 在9个具塞的离心管中分别加入不同浓度、相同体积的喹硫平和氯氮平对照品溶液，再加空白血浆0.4m l，振荡数秒，使血浆喹硫平浓度分别为40.0、100.0、200.0、300.0、400.0、500.0、600.0、700.0、800.0ng·ml－1，氯氮平为20.0、100.0、200.0、300.0、400.0、500.0、600.0、800.0、1000.0 ng·ml－1。然后按照“2.3”项处理后，经高效液相色谱分析，测得喹硫平与氯氮平的峰面积（Y）分别对应其浓度（X：ng·m l－1）进行线性回归（n＝9），得到喹硫平40～800 ng·m l－1，氯氮平20～1000ng·ml－1标准曲线。Y＝0.20665388X＋2.186141，r＝0.99479（n＝9），氯氮平的标准曲线回归方程为Y＝0.31172966X－3.215692，r＝0.99795（n＝9）。当信噪比（S/N）＝3时，喹硫平与氯氮平的检测定量下限可达到10ng·ml－1。

2.6 回收率与精密度实验 取喹硫平浓度为40.0、400.0、700.0 ng·ml－1的含药血浆样品，氯氮平浓度为20.0、400.0、800.0 ng·ml－1的含药血浆样品，经色谱分析。同时在1天内重复5次和1周内重复5次测定浓度，计算日内、日间误差、回收率（见表1）。结果表明，该方法符合生物样品分析要求。

表1 日内、日间精密度、方法回收率实验（n＝5）

2.7 样品的稳定性实验 按照“2.5项”的方法分别配置40.0、400.0、700.0 ng·ml－1喹硫平和20.0、400.0、800.0 ng·m l－1氯氮平血浆样品，3组共18个样品（双样），分别在室温（17～23℃）放置0，24h和－20℃冻存1d，以及－20℃冻存1，4周，分别进行色谱测定，未见冻存样品的药物降解，统计结果显示RSD均＜9%。

2.8 样品的质量控制 按“2.5项”方法分别配制40.0、400.0、700.0 ng·ml－1喹硫平和20.0、400.0、800.0 ng· ml－1氯氮平60个血浆样品（一式12份）。置－20℃冰箱冻存备用，为质控样品。每次检测血样时同时检测质控样品，如果相对回收率均在85%～115%之内，即可认为仪器检测正常，操作人员操作正常，否则及时检查整个操作过程及仪器原因。

2.9 患者血样测定 1例男性精神病患者，口服氯氮平（江苏恩华制药股份有限公司，批号：20120203，规格：50mg/片）150mg·d－1和喹硫平（湖南洞庭制药股份有限公司，批号：B120603，规格：200mg/片）800mg·d－1。2周后早晨服药前空腹采血检测其血浆药物浓度。结果喹硫平为285.32 ng.ml－1，氯氮平为110.24 ng.ml－1。

3 讨论

喹硫平与氯氮平的化学结构比较相似，都有二个苯环，故都具有明显的紫外吸收。为了减少溶剂峰和其它杂质的干扰，选择254nm为检测波长。喹硫平的血药浓度检测方法文献已有报道，本实验采用高效液相色谱法同时测定喹硫平与氯氮平的血药浓度方法，具有操作简单、成本低、精密度和回收率高等特点、适用于化学药物分析和临床药动学研究，结果可靠。

以甲醇和水为流动相，有严重的拖尾现象，故加入一定量的封端试剂三乙胺可以改变拖尾现象，改善峰形。比较甲醇和水不同配比，结果甲醇∶水（70∶30）时，样品保留时间理想，喹硫平与氯氮平可以较好的分离。

本实验过程中笔者分别使用乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷、正己烷为提取剂，乙酸乙酯的提取率最高，所取血浆仅为0.4ml，进样量15μl便达到实验要求，提高了灵敏度减少了样品杂质的干扰，保证色谱柱能够进行大量样品的连续分析。

精神科药物存在治疗窗较窄、患者服药后个体差异大、不良反应较大等特点，因此对精神科药物进行治疗药物监测具有积极的临床意义，本实验建立人血浆中喹硫平与氯氮平同时测定的方法，用于临床治疗药物监测，达到临床监测的要求。

［1］陈彦方，顾牛范.新编临床精神药物手册［M］.济南：山东科学技术出版社，1998：10－15.

［2］赵敏，陈清霞，朱军，等.高效液相色谱法测定人血浆中喹硫平浓度［J］.海峡药学，2010，22（2）：168－170.

［3］傅崇铭，张桂华，唐茂芹，等.精神分裂症患者富马酸喹硫平血药浓度测定及其临床效应的相关性［J］.中国药学杂志，2004，12（39）：928－930.

［4］林治光，翁毅仁，庄冬梅，等.RP－HPLC法测定人体中富马酸喹硫平血药浓度［J］.四川精神卫生，2003，16（3）：140－142.

Concentration Determination of Quetiapine and Clozapine in Human Plasma by RP－HPLC

YU Hai－yan，HE Yue－hong，HU Dong－zhu，XU Xiao－ye
（Yunnan Mental Hospital，Kunming City，Yunnan Province，China）

Objective：To estabilish a method for determining the concertration of Quetiapine and Clozapine in human plasma by RP－HPLC.Methods：The drug from plasma was analyzed by a reverse phase HPLC system with a Agilent Herpesil ODS C18column（250mm×4mm，5μm），methanol－H2O（0.55mlTEA＋250mlH2O）（70∶30）were used as mobile phase；the flow rate was 1.2ml· min－1；the detection wavelength was at254nm；Ethyl acetate was used as extracting solvent.Results：The relation of peak area and concentration showed linear in the range of40－800ng·ml－1for Quetiapine，20－1000ng·ml－1for Clozapine，respectively.The average recoveries of Quetiapine and Clozapine at high，middle and low concentrations were 101.86%，97.35%，101.56%and 98.65%，97.69%，102.06%，respectively.The intra－day and inter－day variations（RSD）were less than 9%（n＝5）.The minimum detectable concentration was 10.0 ng·ml－1The regression equation of Quetiapine was Y＝0.20665388X＋2.186141，r＝0.99479（n＝9），and Clozapine was Y＝0.31172966X－3.215692，r＝0.99795（n＝9），respectively.Conclusion The method is sensitive，accurate，simple and quick，which can be used for clinical drug monitoring and pharmacokinetic studies of Quetiapine and Clozapine.

Quetiapine，Clozapine；Plasma concentration；RP－HPLC

R914

A

1007－8517（2013）03－0043－02

2013.01.05）