银杏叶提取物对大鼠肺磷形细胞癌表达肿瘤坏死因子-α的影响

彭宗玉 张佩娟 赵瑞霞

银杏叶提取物对大鼠肺磷形细胞癌表达肿瘤坏死因子-α的影响

彭宗玉 张佩娟 赵瑞霞

目的银杏叶提取物对大鼠肺磷形细胞癌分泌和表达肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法用大鼠的肺磷形细胞癌与不同浓度的银杏叶提取物进行培养，采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附测定方法分别检测枯否细胞TNF-αmRNA和蛋白质表达。结果大鼠肺磷形细胞癌肿瘤坏死因子-α表达的分泌与银杏叶提取物浓度的提高呈负相关。结论银杏叶提取物可以改变大鼠肺磷形细胞癌TNF-α的表达，减少肺癌细胞对正常肺细胞的损害，发挥保护的作用。

银杏叶提取物；肿瘤坏死因子-α；大鼠肺磷形细胞癌

调节肺磷形细胞癌分泌和表达肿瘤坏死因子-α，对抗肺癌细胞对正常肺细胞的损害[1]。以往文献报告银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract,GBE)具有软化血管、调节正常细胞的代谢，抗炎、抗氧化应激的功能[2]。本实验目的是通过银杏叶提取物作用大鼠肺磷形细胞癌，观察随着银杏叶提取物浓度的改变，大鼠肺磷形细胞癌TNF-α表达的变化及对正常肺细胞的影响。

1 材料与方法

1.1 主要试剂银杏叶提取物、RT-PCR试剂、引物。

1.2 主要仪器CO2培养箱、UVP，倒置相差显微镜，低温离心机，各种电泳仪等。

1.3 细胞分离、培养与鉴定及实验分组成功的分离肺磷形细胞癌加入含10%胎牛血清的DMEM培养基，接种于培养瓶2h后，洗去非贴壁细胞。24h后，培养的肺磷形细胞癌分别加入不同浓度的GBE(15，25，50)μg/ml共同培养24h。实验共分为四组（1组为对照组、2组为GBE15ug/ml、3组为GBE25ug/ml、4组为GBE50ug/ml）。

1.4 TNF-α的测定用酶联免疫吸附测定法和逆转录一聚合酶链反应，检测肿瘤坏死因子mRNA的分泌表达。收集各浓度组银杏叶提取物与肺癌细胞的培养及对照组细胞，按各组细胞总mRNA提取，溶于无Rnase水中。根据RT-PCR试剂盒提供的说明书进行RT-PCR反应。RT-PCR反应产物电泳条带用数字成像系统进行分析和拍照。计算TNF-α产物的相对量。

1.5 统计学方法采用单因素方差分析，以P＜0.01为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同浓度的GBE对肺磷形细胞癌细胞表达TNF-αmRNA的影响大鼠肺磷形细胞癌细胞TNF-αmRNA和蛋白的表达与银杏叶提取物的浓度呈负相关，随着GBE的浓度的增加，TNF-αmRNA表达逐渐减少，见图1。

图1 不同浓度的GBE对肺磷形细胞癌细胞表达TNF-αmRNA的影响

3 讨论

TNF-α首先与一定时期的肿瘤细胞质膜表现特异性受体结合，在细胞表面形成帽状聚集而入细胞，进入细胞后沿微管移动与溶酶体结合，在TNF作用下溶酶体破裂，释放出溶酶体酶致使细胞自溶，TNF-α可以使中性粒细胞聚集粘附于内皮细胞，引起肺损伤。同时又可激活Caspase-8，二者共同作用进一步加重肺内皮细胞损伤。二者协同促使机体产生更多的氧自由基及炎性介质，其代谢产物大量堆积在肺泡内皮细胞上，导致肺组织结构改变和肺功能衰竭[1-5]。银杏叶提取物具有敛肺平喘、活血化瘀，促进血液循环，具有很强的清除自由基和抗氧化作用，银杏叶中的黄甙、氨基酸和氨基酸合成胶原蛋白成份对人体美容，抑制黑色素生长，保持皮肤光泽与弹性起着不小的作用[6]。本实验研究发现肺磷形细胞癌细胞TNF-α蛋白的表达分泌与银杏叶提取物的浓度呈负相关性，随着浓度的增加，肺磷形细胞癌细胞TNF-αmRNA及其蛋白质表达逐渐减少，因此可推测银杏叶提取物抑制肺磷形细胞癌细胞释放TNF-α的分泌与表达，减轻TNF-α诱导的细胞损伤，对正常肺细胞表现出较强的保护作用。

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R734.2

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1673-5846（2013）01-0036-02

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