甲状腺肿瘤雌激素受体亚型及细胞周期素D1的表达及意义*

沈利军 金东岭 杜丽敏 李文静*

①邯郸市第三医院(眼科医院)病理科 河北 邯郸 056001

②河北工程大学医学院 河北 邯郸 056002

有研究报道[1]，在甲状腺癌以及大多数其他甲状腺疾病中女性的发病率远高于男性，而且年轻女性的甲状腺癌通常分化良好，这种现象提示性激素与甲状腺癌的发生有关。雌激素参与靶组织的病理生理过程是通过雌激素受体(estrogen receptor，ER)的介导完成的，ER分为ERα、ERβ2种亚型。细胞周期的调控失常导致细胞的异常增殖， 是肿瘤发生的关键环节。尤其是G1期细胞的调控尤为重要。目前的研究表明，细胞周期素D1(cyclinD1)和EcyclinE)在G1期细胞周期转化中起重要作用，其过度表达和肿瘤关系密切[2]。为探讨ER亚型在甲状腺癌发生、发展以及细胞增殖活性中的作用，本研究应用免疫组织化学S-P法对部分正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤及甲状腺癌中ERα、ERβ和cyclinD1的表达情况进行了检测。旨在探讨雌激素对甲状腺上皮细胞增殖的影响。

1 材料和方法

1.1 一般资料

本研究所有标本来自本院病理科2006年至2010年临床资料完整的存档蜡块102例。对病理重新明确诊断并作组织病理分型。其中甲状腺癌患者60例，包括乳头状腺癌31例，滤泡状腺癌21例，髓样癌4例，未分化癌4例；男性11例，女性49例；年龄17～74岁，平均年龄为49.72岁(乳头状腺癌平均年龄37.67岁，滤泡状腺癌平均年龄48.71岁，髓样癌平均年龄55.50岁，未分化癌平均年龄57岁)；全部患者术前均无化疗、放疗及免疫治疗史；按照国际抗癌协会联盟(UICC)的TNM分期，Ⅰ期21例，Ⅱ期23例，Ⅲ期14例，Ⅳ期2例；伴淋巴结转移22例，无淋巴结转移38例。甲状腺腺瘤患者32例，男性9例，女性23例，年龄24～73岁，平均年龄为44.82岁。腺瘤旁经病理证实的正常甲状腺组织患者10例为正常对照组。

1.2 试剂及染色方法

所有标本均经4%的中性甲醛固定，常规脱水和石蜡包埋并连续4 μm切片，分别采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色法和S-P染色。鼠源性ERα单克隆抗体、兔源性ERβ单克隆抗体和兔源性cyclinD1单克隆抗体均为Santa Cruz公司产品(工作浓度水平为1∶100)。S-P试剂盒，DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。S-P染色按试剂盒说明操作，以3%H2O2室温孵育5～10 min除去内源性过氧化物酶的活性，抗原热修复，常规免疫组织化学标记。DAB显色，苏木素衬染，中性树胶封片，显微镜观察。

1.3 对照实验与结果判断

用已知ERα、ERβ和cyclinD1阳性的人乳腺导管浸润癌标本作阳性对照；用PBS代替第一抗体作阴性对照。

在细胞的细胞膜、细胞浆或细胞核有棕黄色颗粒分布即为阳性细胞。在光学显微镜下观察，将每一张切片中棕黄色阳性细胞数＞10%定义为表达阳性，阳性细胞数≤10%定义为表达阴性。

1.4 统计学处理

所取得数据应用SPSS 10.0统计软件进行统计分析。采用x2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ERα、ERβ和cyclinD1在3种甲状腺组织中的表达

研究显示，正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤组织、甲状腺癌组织中Erα、两两比较其差异均有统计学意义(x2＝1.59，x2＝5.38，x2＝9.43；P＜0.05)，且正常甲状腺组织和甲状腺腺瘤中显著低于甲状腺癌。ERβ表达在正常甲状腺组织的表达显著高于甲状腺腺瘤和甲状腺癌组(x2＝2.69，x2＝1.32，x2＝6.53；P＜0.05)；CyclinD1在正常甲状腺组织无表达，而在甲状腺腺瘤和甲状腺癌中的表达显著增高(x2＝3.05，x2＝7.89，x2＝12.16；P＜0.05)(见表1)。

2.2 ERα、ERβ和cyclinD1在甲状腺癌的表达与临床病理特征的关系

ERα的表达与性别差异有统计学意义(x2＝6.617，P＜0.05)，而ERβ和cyclinD1的表达与甲状腺癌患者的性别差异无统计学意义(x2＝0.120，x2＝01354；P＞0.05)；ERα、ERβ和cyclinD1的表达与甲状腺癌的临床分期以及淋巴结转移有统计学意义(x2＝4.411，x2＝5.219，x2＝10.250；P＜0.05)，见表2。

2.3 甲状腺癌ERα、ERβ和cyclinD1表达的相关性

甲状腺癌中ERα的表达与ERβ表达呈负相关，而与cyclinD1的表达呈正相关，见表3。

表1 甲状腺组织中ERα、ERβ和cyclinD1的阳性表达(例)

表2 甲状腺癌中ERα、ERβ和cyclinD1的表达与临床病理特征的关系(例)

表3 甲状腺癌中ERα、ERβ和cyclinD1表达的相关性(例)

3 讨论

Matthews等[3]和Chandanos等[4]研究表明，ERα和ERβ在雌激素敏感器官可以对恶性肿瘤细胞增殖发挥不同的影响。虽然甲状腺并非雌激素经典的靶器官，但有研究提示ER与甲状腺细胞的增殖有关[5-6]。本研究结果显示，ERα在正常甲状腺、甲状腺腺瘤和甲状腺癌中的表达率逐渐增高，甲状腺癌ERα的表达与甲状腺腺瘤和正常甲状腺组织有显著性差异；而ERβ在正常甲状腺组织到甲状腺腺瘤和甲状腺癌，其阳性表达率逐渐降低；甲状腺癌和甲状腺腺瘤ERβ的表达显著低于正常甲状腺组织。本研究通过分析与临床病理特征的关系显示，ERα、ERβ的表达与甲状腺癌的临床分期以及淋巴结转移有关。表明雌激素通过ERα的表达可能在甲状腺上皮细胞的增生乃至于癌变过程中发挥着刺激作用，并可促进甲状腺癌的演进和转移；而ERβ则与ERα表达有拮抗作用，ERβ的表达对甲状腺滤泡上皮可能有一定的保护作用，其表达缺失则使甲状腺滤泡上皮细胞容易受雌激素的不利影响，导致甲状腺滤泡上皮细胞的增生和癌变以及肿瘤的进展和转移。这与乳腺癌的研究结果相似[7-8]。本研究中的甲状腺癌ERα阳性率女性显著高于男性，进一步说明雌激素与甲状腺癌的发生有关。

细胞周期调控的异常与肿瘤发生密切相关[9-10]，细胞周期的转化受到细胞周期素和细胞周期素依赖性激酶(CDKs)的调节，G1期细胞周期素包括cyclinD1、D2、D3和cyclinE。此前对cyclinD1在各种肿瘤中的研究已表明，其过度表达与多种肿瘤的演进和不良预后有关[11]。本研究结果表明，CyclinD1在正常甲状腺组织无表达，而在甲状腺腺瘤和PTC中的表达呈逐渐增高的趋势；CyclinD1在Ⅲ期、Ⅳ期的PTC中的表达率显著高于Ⅰ期、Ⅱ期；有淋巴结转移者显著高于无转移者。并且肿瘤组织ERα与CyclinD1表达之间存在明显正相关，而ERβ与CyclinD1表达则为负相关关系。说明雌激素可能通过与ERα受体结合，介导某些直接、间接机制加强致癌因素，促进CyclinD1过度表达，从而使甲状腺上皮细胞增殖失控；而ERβ的表达缺失则也促进了甲状腺上皮细胞增生，使CyclinD1过度表达；即ERα高表达和ERβ低表达均可促进甲状腺癌的发生、发展和转移。

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