葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注的保护作用

颜秀娟

（上饶市第五人民医院，江西上饶334000）

葛根素，具有耐缺氧、抗衰老、降血脂等作用，并且体外实验显示葛根素对神经细胞的凋亡具有保护作用，可以抑制细胞凋亡时自由基的产生[1]。 然而对葛根素对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及具体作用机制并不明确。 本文拟建立大鼠中动脉梗塞模型，观察葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用，探讨其可能的作用机制。

1 材料

1.1 药品、试剂与仪器

葛根素(中国生物制品检验检定所，批号: 100818-20060)，用时用含丙二醇(0.02%)的生理盐水溶解(pH7.0)，尼莫地平(民生药业集团有限公司，批号:100703)，2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)，2' ,7'—二氯荧光素酶(DCFH-DA)等(购自Sigma 公司)，荧光分光光度计(上海精密仪器厂)，多功能酶标仪(Thermo)。

1.2 动物

Waster 大鼠，雄性，体重(200±20) g，南昌大学实验动物中心提供。

2 方法

2.1 实验分组

将大鼠随机分成6 组，每组8 只，分假手术组，缺血再灌注模型对照组，给药葛根素0.1、1.0、10mg/kg 组和尼莫地平1.0mg/kg 组。手术前15min 尾静脉给药，假手术组和模型组给予等量的生理盐水。

2.2 局灶性脑缺血模型的建立

参照Zea Longa[2]法制作大鼠中动脉闭塞模型，导致局灶性脑缺血1.5h 后，再灌注18h。 假手术组大鼠除不插拴线外，其他步骤同上，术中保持大鼠肛温(36±1)℃，术后24h，观察其神经系统症状的变化。

2.3 梗死范围和脑水肿的测定

评分结束后，立即断头处死大鼠，取出全脑，去除嗅球、小脑和低位脑干后称取大脑湿重。

2.4 ROS 的含量及Caspace-3 活性测定

参照Chiarugi[3]的方法采用2' ,7'—二氯荧光素酶测定ROS 的产生。取大脑按重量体积比加入10 倍体积冰冷0.1 mol·L 磷酸盐缓冲液匀浆后， 离心10min， 取上清液与终浓度为20μmol/L 的DCFHDA37℃下孵育30 min 后，置于冰浴中终止反应检测荧光强度。

2.5 统计学处理

用SPSS13.0 软件完成统计学处理，数据以±s 表示。组数的比较采用单因素方差分析，组间比较采用t 检验，以P<0.05 为差异有统计学意义。

3 结果

缺血1.5h 再灌注18h 后， 模型组大鼠出现明显的神经系统损伤症状。大鼠神经症状评分明显高于假手术组。与模型组相比，葛根素能显著降低神经症状评分，并呈剂量依赖性(P<0.05)。大脑中动脉内栓线阻断法大鼠脑梗死范围及含水量较假手术组明显增加(P< 0.01)，与模型对照组相比，给药剂量组和尼莫地平组均抑制脑梗死的形成，梗死范围缩小，脑组织含水量减少。 葛根素给药组可显著抑制自由基的产生以及Caspase-3 的活性，并和尼莫地平组比较无差异性。

4 讨论

本研究采用大脑中动脉内栓线阻断法建立大鼠缺血/再灌注损伤模型，观察葛根素对大鼠脑缺血/再灌注的影响，本实验结果显示葛根素能显著抑制脑缺血再灌注ROS 的增加， 从而减小梗死范围并减轻脑水肿。 caspase-3 是细胞调亡过程中重要的效应性蛋白水解酶。

［1］潘燕,张岫美.葛根素药理研究近况[J].食品与药品2005,(12):10-12.

［2］Zea Longa E L, Weinstein P R, Carlson S, et al.Reversible middle cerebral artery occlusion withoutcraniectomy in the rats[J]. Stroke, 1999, 20(1):84-91.

［3］Chiarugi PG, Pani E, Giannoni L, et al. Reactiveoxygen species as essential mediators of cell adhesion: the oxidative inhibition of a FAK tyrosine phosphatase is required for cell adhesion [J]. J Cell Biol, 2003, 161:933-944.