E2F-1及相关蛋白在子宫内膜癌中的表达及其相关性研究*

周海霞 李燕辉 时志民* 王 蕾 司军英 吴彩花 范 建

子宫内膜癌是女性生殖道常见的恶性肿瘤之一，约占女性恶性肿瘤的7%，近年来在我国其发病率逐年上升，已占到女性生殖系统恶性肿瘤的20%～30%。肿瘤的发生发展是多因素、多步骤和多基因参与的过程，在这一过程中凋亡抑制、细胞过度增殖、癌基因激活等起到了重要作用。

1 材料与方法

1.1 材料

选取2009年1月至2012年3月在本院妇科行子宫内膜癌切除术的子宫标本60例，年龄35～68岁，平均年龄为52.22岁，所有子宫内膜癌患者术前均未行放、化疗及激素治疗；取因子宫肌瘤或子宫脱垂而行子宫切除术的正常子宫内膜标本32例，年龄在32～61岁，平均年龄为48.25岁。按照2000年国际妇产科联盟(Federation International of Gynecology and Obstetrics，FIGO)标准进行临床病理分期和组织分级：Ⅰ期15例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例，Ⅳ期9例；G1级36例，G2级13例，G3级11例。病灶局限于黏膜层及浸润≤1/2肌层44例，浸润＞1/2肌层16例。

1.2 试剂与方法

常规免疫组化试剂盒S-P、二硝基联苯胺(DAB)显色液及兔抗人E2F转录因子1(E2F-1)多克隆抗体购自美国Santa Cruz生物技术有限；鼠抗人Ki-67单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采用免疫组化(streptavidin-peroxidase，SP)法操作，按试剂盒说明书进行，取已知切片作为阳性对照，以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判断

E2F-1和Ki-67阳性定位于细胞核，以各种抗体在细胞核或胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性信号。参照Parenti等的标准，每张切片均随机观察5个高倍视野(×400)，阳性细胞数＜5%为(－)，5%～25%为(＋)，＞25%～50%为(＋＋)，＞50%为(＋＋＋)。以＋～＋＋＋均视为阳性表达，－视为阴性表达。

1.4 统计学分析

应用SPSS 12.0统计软件，计数资料采用x2检验。相互关系用等级相关性分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 E2F-1和Ki-67在正常子宫内膜、子宫内膜癌组织中的表达

在32例正常的子宫内膜中E2F-1无表达，Ki-67有4例；60例子宫内膜癌中E2F-1的表达31例，表达率为58.33%(35/60)，两者比较差异有统计学意义(x2＝27.71，P＜0.05)；60例子宫内膜癌组织中Ki-67阳性表达51例，表达率为85.00%(51/60)，两者比较差异有统计学意义(x2＝42.63，P＜0.05)(见表1)。

2.2 E2F-1和Ki-67在子宫内膜癌中的表达与临床病理指标的关系

E2F-1和Ki-67在子宫内膜癌中的表达与组织学分级、临床病理分期以及淋巴道转移有关(x2＝20.64，x2＝5.23，x2＝11.77，x2＝4.04，x2＝5.79，x2＝8.28；P＜0.05)；而与组织学类型无关(x2＝3.51，x2＝0.941；P＞0.05)(见表1)。

表1 E2F-1和Ki-67在正常子宫内膜及子宫内膜癌中的表达与临床病理指标的关系

2.3 E2F-1和Ki-67在子宫内膜癌组织中的相关性分析

E2F-1和Ki-67在子宫内膜癌组织中的表达无明显相关性(r＝0.166，P＞0.05)(见表2)。

表2 E2F-1和Ki-67在子宫内膜癌组织中表达的相关性分析

3 讨论

细胞周期不同时相间存在关键的检查点，人体细胞的正常生长依赖于各种调节因子对其检查点的平衡调控，任何一种紊乱的发生将导致细胞异常增殖，从而诱发肿瘤[1]。E2F-1蛋白作为转录因子家族中的一员，调控因子是E2F家族中第一个被克隆出来的蛋白，对细胞周期限制点起直接调控作用，是细胞周期中G1期向S期过渡的重要调控因子，调控作用机制可能是通过p16INK4a-cyclinD1/CDK-pRb通路[2]。近年来的研究发现，作为G1/S期检查点的重要调控因子E2F-1在许多肿瘤中均有表达，且与肿瘤的生物学行为有关，在胃癌和涎腺肿瘤中均可见到E2F-1的过度表达[3]。在食管鳞状细胞癌、乳房癌及表面移行细胞癌中E2F-1的表达与肿瘤进展关系密切[4-6]。本实验结果显示，E2F-1蛋白阳性表达主要位于细胞核内，在子宫内膜癌组织中呈过度表达，在正常子宫内膜组织中不表达，差异有统计学意义(x2＝27.71，P＜0.05)，由此推断在子宫内膜癌中，E2F-1过表达起到了促进作用；E2F-1与FIGO分期、组织学分级、有无淋巴结转移及浸润深度有关，表明E2F-1的过表达在一定程度上可以反映子宫内膜癌的生物学特性，其表达水平越高肿瘤的侵袭力越强，恶性度则越高。

Ki-67是一种与细胞增殖密切相关的大分子蛋白，属于IgG家族，是目前临床上广泛应用的检测细胞增殖的标志。Ki-67的检测对于判断肿瘤的恶性程度、进展及其生物学行为具有重要的意义。Ki-67在除了G0期之外的所有细胞周期中都有表达，定位在细胞核，与细胞的合成代谢有关，其表达的高低反映了细胞增殖的程度。另外有报道，Ki-67的表达水平与子宫内膜癌的临床分期和组织学分级相关[6]，是目前研究细胞增殖活性的重要指标，已被应用于许多肿瘤生物学行为的研究。Ki-67抗原表达可反映肿瘤细胞的增殖活性，与恶性肿瘤的发展、转移和预后高度相关[7-8]。近年来有学者研究发现，Ki-67的表达能较好地体现肿瘤细胞分化低、增殖快的特点，可作为肿瘤发生发展的早期事件[9-10]。本研究结果表明，在子宫内膜癌组织中Ki-67阳性表达定位于细胞核，呈过度表达，而与正常组织中表达差异有显著性(x2＝42.63，P＜0.05)；Ki-67与FIGO分期、组织学分级及有无淋巴结转移有关(x2＝4.04，x2＝5.23，x2＝8.28；P＜0.05)。因此，子宫内膜癌中Ki-67的高表达可提示肿瘤细胞增殖活跃，侵袭性强，易发生转移，预后不良。Ki-67能客观反映子宫内膜癌的增殖活性，可以成为评价子宫内膜癌发生、发展和预后的重要指标。

本研究对E2F-1和Ki-67在子宫内膜癌组织中表达进行相关性分析发现，E2F-1和Ki-67在子宫内膜癌中无相关性，但是两者都定位在细胞核，在细胞周期中E2F-1起到了使细胞由GI期顺利进入S期，而Ki-67在S期后逐渐显示作用，表明在子宫内膜癌的早期E2F-1表达升高，促使GI期进入S期，之后Ki-67可能发挥作用，促使细胞异常增殖。E2F-1与Ki-67在子宫内膜癌中可能存在某种联系，有待于进一步深入研究。通过对E2F-1和Ki-67在子宫内膜癌的研究证实，两者均可促进子宫内膜癌发生和发展。

总之，子宫内膜癌组织中E2F-1和Ki-67处于过表达状态，均促使细胞异常增殖，在子宫内膜癌的发生、发展过程中起到了一定作用，检测两者可以对临床诊断和治疗提供一定的帮助。

[1]Mckay JA，Douglas JJ，Ross VG，et al.Analysis of key cell-cycle checkpoint proteins in colorectal tumours[J].J Pathol，2002，196(4)：386-393.

[2]伍宏彪，吴巨钢，张鹏，等.胃癌进展中转录因子e2f-1的表达变化及其意义[J].中国普外基础与临床杂志，2010，17(6)：573-580.

[3]Etges A，Nunes FD，Ribeiro KC，et al.Immunohistochemical expression of retinoblastoma pathway proteins in normal salivary glands and in salivary gland tumors[J].Oral Oncol，2004，40(3)：326-331.

[4]Yamazaki K，Hasegawa M，Ohoka I，et al.Increased E2F-1 expression via tumor cell proliferation and decreased are correlated with adverse prognosis in patients with squamous cell cancer of the oesophagus[J].J Clin Pathol，2005，58(9)：904-910.

[5]Ebihara Y，Miyamoto M，Shichinohe T，et al.Overexpression of E2F-1 in esophageal squamous cell cancer correlates with tumor progression[J].Dis Esophagus，2004，17(2)：150-154.

[6]Zhu C，Luo J，Shi H，et al.Expression of tubulin，p53，ki67，receptors for estrogen，and progesterone in endometrial cancer[J].Eur J Gynaecol Oncol，2009，30(5)：514-517.

[7]Han B，Lin S，Yu LJ，et al.Correlation of18F-FDG PET activity with expressions of survivin，Ki-67，and CD34 in non-small-cell lung cancer[J].Nucl Med Commun，2009，30(11)：831-837.

[8]刘伟，余英豪，欧阳学农，等.P53和Ki67在胃癌中的表达及其临床意义[J].世界华人消化杂志，2011，19(4)：367-373.

[9]Ma YL，Peng JY，Zhang P，et al.Immunohistochemical analysis revealed CD34 and Ki67 protein expression as signifi cant prognostic factors in colorectal cancer[J].Med Oncol，2010，27(2)：304-309.

[10]杨欢，陈晓耕，陈新，等.乳腺浸润性导管癌组织Ki-67表达及其分子分型的意义[J].中华肿瘤防治杂志，2012，19(3)：212-216.