不同进箱温度对冻干甲肝疫苗的影响

黄卫新,朱 莲,吴海光,蒋秀梅,张 锋,沈立军,陈念良

(浙江省医学科学院病毒病研究所/浙江普康生物技术股份有限公司,浙江 杭州 310013)

生物制品冻干研发过程常采用-20℃或更低的低温进箱,以达到更快的降温速度,而在转大生产的过程中,发现冻干废品率高。因此,开展了不同进箱温度对冻干甲肝疫苗的影响比较,以便摸索降低废品率的方法。

一、材料和方法

1.材料。(1)实验对象。冻干甲肝疫苗。(2)主要设备和仪器。SFR-1灌装机(日本铃木);GLZ-6冻干机(北京天利);2550型酶标仪(美国BIO-RAD);VCX-600超声波粉碎仪(Sonics&materials Inc);J2-HS离心机(美国贝克曼公司)。

2.方法。冻干方法:半成品分装装盘进箱前,先将冻干机板层温度预先降至-20℃或5℃。然后,预冷-20℃-50℃的温度3-5小时,一次干燥,冻干箱搁板温度-35℃-50℃,二次干燥,搁板温度 15℃-30℃;感染性滴度CCID50检测:按 Reed-Muench公式计算[1];冻干苗物理外观检查依照饱满程度由差至好依次分为+-++++;统计学方法采用minitab R16统计软件对数据进行分析。

二、结 果

1.-20℃、5℃进箱冻干甲肝疫苗外观比较。进箱温度分别为-20℃、5℃在同一冻干箱内不同板层上制品外观,具体见表1。

表1 -20℃、5℃进箱冻干甲肝疫苗外观比较

2.冻干甲肝疫苗-20℃、5℃进箱感染性滴度检测结果,具体见表2。经t检验统计分析,P>0.05,结果表明二者之间并无明显差异。

3.进箱温度-20℃、5℃的对甲肝疫苗废品率的影响。比较了-20℃进箱温度甲肝疫苗废品率(238/250000)和 5℃进箱温度甲肝疫苗废品率(23/250000),经双比率检验统计分析,Z=13.31,P<0.05,结果表明二者之间有明显差异。

表2 进箱温度-20℃、5℃的感染性滴度(LgCCID50/ml)

三、讨 论

在实际过程中发现,小试、中试冻干数量不多,进箱时间通常很短,-20℃进箱后,直接降温预冻,制品很少见粗结晶和有致密“硬壳”废品出现[2]。但转入大规模生产,制品进冻干箱时间会长达几小时。最先-20℃进箱制品在以很慢的降温速度通过冰点温度,溶液中溶质迁移时间充足,废品率就会明显增多。因此,试用5℃进箱,使进箱制品温度均匀处在5℃附近,然后快速搁板降温,使制品温度以最快的速度通过冰点温度,尽量减少溶液中溶质向表面迁移,减低制品的废品率。但有关大样本研究观察以及冷冻干燥机理探讨有待进一步深入。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(三部).冻干甲型肝炎减毒活疫苗[M].2005年版.北京:化学工业出版社,2005.123-125.

[2]苏树强.溶液类样品冻干过错中搁板预冻特性分析[J].低温工程,2004(1):39-43.