蒙药菥蓂子中多糖的含量测定

中国人民解放军263医院（101149）田硕

内蒙古医学院（010059）王美霞 高建萍Δ

菥蓂子为十字花科植物遏蓝菜（又名菥蓂）的种子，菥蓂子名称源于其植物名，蒙药名为恒日格一乌布斯，恒日格一额布斯。故将菥蓂子作为正名收入质量标准中。作为蒙药“恒日格一乌布斯”始载于《认药白晶鉴》、《无误蒙药鉴》。《认药白晶鉴》中称：“生于松软的土地及田间。茎如竹箭，叶厚，绿色，开白色小花，果实状如手鼓，种子类似芝麻，红黑色，油性，味苦。”《无误蒙药鉴》中称：“……种子如芝麻，红紫色，具鼬鼠皮样斑点。”

目前，蒙医临床和蒙药生产企业使用的勃日嘎即“恒日格一乌布斯”均为菥蓂子[1][2]。本品主要用于清热，滋补，开胃，利尿，消肿。主治肺热，肝热，肾脉损伤，睾丸肿坠，遗精，阳萎，腰腿痛，恶心等症。随着菥蓂子日益被人们所认识，其应用范围也越来越广泛，但因它原来为内蒙古地区习用蒙药，使用方面并没有达到国家标准，因此需要对其品种质量进行统一规范，从而达到用药准确安全有效。本文特对菥蓂子这一药材中多糖的含量进行了研究，希望能有一定的科学参考价值[3][4][5][6][7][8]。

1 仪器、试剂及实验材料

1.1 主要仪器 725N型紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司制造）；FA-1004电子分析天平（上海新诺仪器设备有限公司制造）；DZKW-D-2电热恒温水浴锅（北京永光明医疗仪器厂）； 超声波提取仪（昆山市超声仪器有限公司制造）；旋转蒸发仪（巩义英峪子华仪器厂制造）。

1.2 试剂及材料 葡萄糖标准品（天津市化学试剂三厂）；丙酮（北京化工厂）；乙醚（天津市化学试剂三厂）；无水乙醇（天津市化学试剂三厂）；石油醚（60～90℃）；5%苯酚溶液（天津市化学试剂一厂）；浓硫酸（天津市化学试剂三厂）；以上试剂均为分析纯，中药材菥蓂子为待检品。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 葡萄糖标准品溶液的制备 精密称取干燥葡萄糖标准品25.00mg，置250ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，备用。

附图 葡萄糖标准曲线

2.1.2 样品溶液的制备 精密称取锁阳样品粉末0.5g，置于250ml具塞三角瓶中，依次用石油醚30ml，无水乙醇30ml，超声提取30min，所得残渣挥干溶剂，再加水30ml，超声提取30min，重复此操作两次，过滤，合并提取液，减压浓缩至20ml，加入无水乙醇，至纯含量约为70%，密闭静置24h，抽滤，滤饼依次用95%乙醇，丙酮，乙醚洗涤，60℃水浴挥干，残留物60℃水浴溶解，定容至100ml容量瓶中，摇匀，备用[9][10]。

2.2 最大波长的确定 精密吸取葡萄糖标准品溶液和样品溶液0.5ml，分别置于具塞刻度比色管中，各补加蒸馏水至2.0ml，再各加5%苯酚溶液1.0ml，迅速滴加浓硫酸5.0ml，摇匀，放10min，40℃水浴加热10min，取出冷却至室温，空白试剂调零，在300～600nm波长范围连续测定吸光度。结果表明，标准品溶液和样品溶液均在490nm有最大吸收，故确定490nm为测定波长。

2.3 标准曲线的绘制 精密称取葡萄糖标准品溶液0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml、0.8ml、0.9ml，分别置于10ml具塞刻度比色管中，加水补足2ml，各加入5%苯酚溶液1.0ml，然后迅速加入浓硫酸5.0ml，摇匀，放置10min，40℃水浴加热10min，取出后冷却至室温，以空白试剂作对照，于490nm处测其吸光度，以葡萄糖质量浓度（C）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线（见附图），求得葡萄糖质量浓度（C）和吸光度（A）关系的线性回归方程为A＝8.4855C－0.0038，相关系数R＝0.9990（n＝6），此结果表明葡萄糖标准品溶液在0.03623～0.08172mg/ml范围内吸光度A与浓度C呈良好线性关系，可按标准曲线法进行定量分析，见附表1。

2.4 稳定性实验 精密吸取样品溶液0.5ml，按2.3方法操作，间隔30min测定其吸光度，RSD＝0.7527%（n＝4），结果表明样品溶液在显色后2h内稳定，见附表2。

2.5 精密度实验 精密吸葡萄糖标准品溶液0.5ml，平行5份，按2.3方法操作，测定其吸光度，以葡萄糖标准品计算，得RSD＝1.443%（n＝5），见附表3。

附表1 浓度与吸光度的关系

附表2 稳定性实验

附表3 精密度实验

附表4 回收率实验

附表5 菥蓂子多糖含量测定结果

2.6 重复性实验 精密吸取样品溶液0.5ml，平行5份，按2.3方法操作，测定其吸光度，以样品含量计算，得RSD＝1.868%（n＝5）。

2.7 回收率实验 精密吸取样品溶液0.5ml，平行5份，分别加入葡萄糖对照品溶液0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml，补加水至2ml，按2.3方法操作，测定其吸光度，以加入量计算，回收率在96.26%～100.07%之间，平均回收率为98.38%，RSD＝1.45%（n＝5），见附表4。

2.8 样品含量测定 精密称取样品溶液0.4ml，0.5ml，0.6ml，0.7ml，0.8ml，0.9ml，按2.3方法操作，测定其吸光度，得样品多糖含量（以葡萄糖计）为3.945%，见附表5。

3 讨论

实验中，加入硫酸试剂时会产生热量，导致反应温度和时间不易控制。置于冰水浴中冷却，再平行加热相同时间后冷却，可以较好地提高实验结果的重现性和准确性。试验结果显示，超声波辅助提取法具有产率高、提取时间短和节约能耗的优势，并且微量分析法测定菥蓂子多糖的含量准确性高，重现性好，方法简便易操作。

菥蓂子中多糖百分含量为3.945%，稳定性较好。此方法精密度和重现性也较好，回收率为96.26%～100.07%，变异系数（RSD）均小于2%，结果表明此方法适用于对其多糖含量的微量分析。

本实验在原有“苯酚-硫酸”[11]法测定的基础上，对菥蓂子多糖进行了提取，并选择采用微量分析法测定其含量，为评价菥蓂子质量和新资源的开发利用提供了依据。目前，国内外有关菥蓂子多糖的结构组成、生物学活性的研究还不是很完善，因此这有待我们对其进一步探讨与改进。