Hp感染与胃癌患者阴性淋巴结中CK19和CK20表达的相关性研究

魏小果，高 翔，康国兰，詹 丽

（甘肃省人民医院，甘肃 兰州 730000）

幽门螺杆菌（Hp）是胃癌启动因子，促进胃癌发病及转移的发生，为胃癌的预后影响因素，区域淋巴结（即阴性淋巴结）转移直接影响患者长期生存[1-2]。目前对阴性淋巴结微小转移灶已有研究，但尚无对Hp感染与阴性淋巴结微转移的相关性报道。本研究采用前瞻性对照研究，分析术前Hp感染与胃癌患者阴性淋巴结CK19、CK20表达的相关性，进一步明确Hp感染与胃癌阴性淋巴结微转移的关系。

1 资料与方法

1.1 基本资料

收集2011年10月—2012年12月经我院胃镜及病理确诊的胃癌患者64例，其中男性35例，女性29例；年龄34～76岁，平均年龄56.7岁；术前未经放、化疗，术后经常规组织病理证实且排除远处转移。本研究获得甘肃省人民医院伦理委员会批准，同时标本采集得到了患者的知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 Hp 检测 所有患者均于入院后次日行14C-尿素呼气试验（14C-UBT）检测Hp，操作流程严格按说明书进行，以14C-UBT≥100dpm/mmolCO2为阳性判断值。依照结果将患者分为Hp（+）组和Hp（-）组。

1.2.2 CK19、CK20 检测 两组患者术后共切除淋巴结846枚，中位数为12（6～16）枚，所有淋巴结均行常规病理检查。将阴性淋巴结经常规制备后连续切片（厚度3μm），分别用免疫组化法检测CK19和CK20，操作流程严格按照试剂操作说明进行。标本检测在24小时内进行。

阳性判断：定位于细胞胞浆内，如细胞胞浆经免疫组化染色后出现棕黄色颗粒为阳性着色，终止反应，显微镜下观察结果。

1.3 结果判断标准

胃癌淋巴结微转移表现为单个散在和（或）数个聚集成小团状的癌细胞位于淋巴窦内，以边缘窦为主[3]。个别淋巴结巨噬细胞和浆细胞等内可见AE1交叉反应，结合细胞形态特点、部位及AE1染色特征可以明确区分。

1.4 统计学处理

采用SPSS17.0软件包统计分析，本研究数据为计数资料，检验水准α=0.05，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Hp（+）组与Hp（-）组胃癌患者分组情况

胃癌患者Hp感染率为54.7%，其中Hp（+）组胃癌患者35例，共检出阴性淋巴结348枚；Hp（-）组胃癌患者29例，共检出阴性淋巴结331枚。两组比较经χ2检验，χ2=6.084，P<0.05，差异有统计学意义。

2.2 Hp（+）组与Hp（-）组胃癌患者阴性淋巴结中CK19、CK20的表达

Hp（+）组胃癌患者阴性淋巴结CK19阳性表达率为11.8%（41/348），Hp（-）组CK19的阳性表达率为6.3%（21/331），两组比较，差异有统计学意义（χ2=6.004，P=0.014）。Hp（+）组胃癌患者阴性淋巴结CK20阳性表达率为9.2%（32/348），Hp（-）组CK20的阳性表达率为4.8%（16/331），两组比较，差异有统计学意义（χ2=4.912，P=0.027）。具体见表1。

表1 Hp（+）组与Hp（-）组胃癌患者阴性淋巴结中CK19、CK20 的表达

3 讨论

3.1 胃癌阴性淋巴结微转移的发生

胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，在甘肃河西走廊地区尤为高发[4]，进展期胃癌根治术术后5年存活率约为40%，直径<2mm的阴性淋巴结癌转移灶即微转移是肿瘤根治术后复发和转移的重要原因之一[1]，同时微转移也是临床的难点[5]。胃癌可通过黏膜下、肌间或浆膜下的淋巴管蔓延、浸润，因而淋巴转移发生早[6]。同时，由于淋巴静脉通路的存在，肿瘤细胞可以很容易地由淋巴系统进入循环系统，反之亦然。所以胃癌患者行手术治疗时，淋巴转移率高达50%～70%。因而在常规病理检查的基础上，检测阴性淋巴结的微转移对于患者的预后判断有重要意义。

3.2 CK19、CK20 表达与胃癌微转移的检测

CK19、CK20等所属的细胞角蛋白家族是上皮细胞所特有的一种中间丝，特异性地表达于上皮组织和上皮来源的肿瘤，几乎不表达于血液、淋巴组织和骨髓组织。因此，淋巴结中细胞角蛋白的表达提示存在癌细胞，即有微转移的发生。应用CK19、CK20等同步检测，有助于提高胃癌阴性淋巴结微转移的检出率，使胃癌在临床上得以重新分期，对于判断预后和指导治疗均有一定意义。

3.3 Hp 感染影响胃癌阴性淋巴结微转移的机制

Hp能引起长期炎症刺激，导致胃黏膜萎缩—肠化—异型增生的系列演化，是胃癌的主要病因之一[1]，其与胃癌的不良预后相关[7]。本研究提示，CK19、CK20在Hp（+）和Hp（-）的胃癌患者阴性淋巴结中存在不同表达，其中Hp（+）胃癌患者CK表达增高，部分组织学分化较差、术后分期较高的患者CK表达更高，提示Hp感染可能促进肿瘤微转移的发生，从而使微转移的指标高表达。Hp促进微转移的发生是通过促进胃癌细胞之间的分离、增强癌细胞与基质成分的黏附作用、加快细胞外基质的降解及癌细胞的移出等来实现的。分子机制的研究指出，Hp感染直接刺激胃癌细胞释放巨噬细胞移动抑制因子（MIF），而MIF可能通过上调基质降解酶（MMP）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达来促进肿瘤的浸润和转移[8-9]。

实际上，少量癌细胞进入淋巴结后，在淋巴结内的转归也不尽相同，包括：（1）增生形成大的转移瘤；（2）被机体免疫系统清除；（3）暂时进入G0期，环境适宜时再增生形成大的转移瘤[10]。因此，即使是免疫组化证实的微转移，预后也并非一定不良。胃癌患者早期检测Hp，术后检测阴性淋巴结微转移，对改善患者预后有一定意义。研究者也意识到，由于微转移的影响因素众多，同时限于样本量，Hp与阴性淋巴结微转移的相关性仍需要在后续工作中继续研究、证实。

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