TBX2基因在结肠癌患者癌组织中的表达及其临床意义

陈佰清 叶 锋 朱 杰 宋笑玲 李意平

(杭州市余杭区中医院肛肠科，浙江 杭州 311106)

结肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，近年来其发病率出现了增高的趋势〔1〕。T-box2(TBX2)是T-Box基因家族成员之一，其编码蛋白TBX2是一个指导胚胎、组织器官轴向发育的重要转录因子，属于发育调控相关转录因子基因。有研究〔2〕发现TBX2在多种肿瘤组织中表达上调，可视为新的肿瘤标志物，其促进肿瘤发生发展的作用日益受到关注。本研究旨在研究结肠癌患者TBX2蛋白的表达与结肠癌临床病理特征的关系。

1 材料与方法

1.1标本来源 选取2008～2012年浙江大学医学院附属第一医院病理科的存档标本100例，其中40例为正常结肠黏膜〔结肠腺瘤旁确诊为正常的结肠黏膜组织，平均年龄(54.1±3.7)岁〕，60例为结肠癌〔平均年龄(55.2±4.8)岁〕，全部病例在术前均未接受放疗及化疗，临床及病理资料完整。根据国际抗癌联盟修订TNM分期法，其中0～Ⅰ期32例、Ⅱ～Ⅳ期28例；有淋巴结转移21例，无淋巴结转移39例；组织学分型：24例未侵及浆膜和36例侵及浆膜。

1.2TBX2蛋白在正常结肠黏膜和结肠癌组织的检测 采用ELISA法检测，ELISA试剂盒购于南京建成生物有限公司，操作步骤严格按照说明书进行。

1.3TBX2蛋白在正常结肠黏膜和结肠癌组织表达灰度值的检测 采用免疫组织化学法检测，鼠抗人TBX2单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒和二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒均购于福州迈新生物技术有限公司。常规石蜡切片，4 μm，60℃烤箱烘片4 h，然后脱蜡至梯度酒精至水洗，采用柠檬酸抗原修复液煮沸1 min进行抗原修复，抗体稀释液浓度均为1∶100，其余步骤严格按照说明书进行，DAB显色后，用苏木精复染，封片。采用Motic Images Advanced 3.2图像分析仪分析，灰度值越大基因表达越低，灰度值越小基因表达越高。

1.4TBX2基因在正常结肠黏膜和结肠癌组织阳性率的检测 阳性表达位于细胞质，呈棕黄色颗粒样物质。在200倍镜下观察全片，按阳性细胞所占百分比及着色程度进行结果判定。按阳性细胞比例判定：阳性细胞≤10%计1分，10%～50%计2分，>50%计3分。按染色程度判定：阴性为0分，淡黄色为1分，中度黄色2分，棕黄色3分。按阳性细胞得分×染色程度计总分，总分<3为阴性，≥3为阳性。

2 结 果

2.1TBX2蛋白在正常结肠黏膜和结肠癌中含量的比较 与正常结肠黏膜〔(2.30±0.16)pg/ml〕比较，TBX2蛋白在结肠癌中的含量〔(7.83±1.05)pg/ml〕显著升高(P<0.01)。

2.2TBX2蛋白在正常结肠黏膜和结肠癌中免疫组化灰度值的比较 TBX2的阳性表达定位于细胞质，呈棕黄色；与正常结肠黏膜灰度值(135.29±3.17)比较，TBX2蛋白灰度值在结肠癌中(95.62±2.51)显著降低(P<0.01)。

2.3TBX2基因在正常结肠黏膜和结肠癌中阳性表达率的比较 TBX2基因在正常结肠黏膜阳性表达率为25.00%(10例)，与结肠癌(85.00%，51例)比较有统计学差异(P<0.01)。

2.4TBX2与临床病理特征的关系 TBX2的阳性表达率在结肠癌组织随组织病理分级的升高而升高〔0～Ⅰ期为14例(43.75%)、Ⅱ～Ⅳ期为21例(75.00%)〕(P<0.01)，有淋巴结转移的〔17例(80.95%)〕高于无淋巴结转移〔14例(35.89%)〕(P<0.01)，浸及浆膜组〔28例(77.78%)〕高于未浸及浆膜组〔8例(33.33%)〕(P<0.01)。

3 讨 论

TBX2在多种肿瘤中高表达，并且与细胞恶性转化、肿瘤细胞增殖以及细胞凋亡等有关〔3〕，TBX2能直接参与细胞周期进程中DNA的复制及肿瘤化疗药物耐药性的产生，其编码蛋白TBX2主要通过其C末端的转录抑制结构域发挥转录抑制作用〔4〕。英国学者Bilican等〔5〕提出TBX2基因失效可使癌细胞休眠。一般而言，人体能使那些已经发生突变的细胞处于一种休眠状态，阻止其分裂和生长。但如果这种突变是癌变，人体的这种功能会受到抑制，从而导致癌细胞快速扩散。研究人员在对致命的恶性黑色素瘤的研究〔6〕中发现，在破坏人体抑制细胞分裂功能的过程中，TBX2基因一旦失效，黑色素瘤细胞便失去分裂能力。本实验结果表明TBX2基因是与肿瘤发生发展相关的基因，这为肿瘤转移的分子机制提供了新的线索，同时为早期诊断及早期治疗肿瘤提供了靶基因。

4 参考文献

1张伟健,车小群,钟 倩,等.Survivin与Bax蛋白在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达及临床意义〔J〕.中国医药指南，2011；9(3)：11-2.

2陈 平,田德安,刘 梅,等.TBX2蛋白在胰腺癌组织和细胞中的表达及其意义〔J〕.临床内科杂志,2007；24(5):341-3.

3宋一村,王晓菲,包虹旭,等.MDM2基因和TBX2在子宫内膜样腺癌中的表达及临床意义〔J〕.现代生物医学进展,2012；12(31):6127-30.

4Rowley M，Grothey E，Couch FJ.The role of TBX2and Tbx3 in mammary development and tumorigenesis〔J〕.J Mammary Gland Biol Neoplasia，2004；9(2)：109-18.

5Bilican B，Goding CR.Cell cycle regulation of the T-box transcription factor TBX2〔J〕.Exp Cell Res，2006；312(33)：2358-66.

6Vacce KW,Carreira S,Brosch G，etal.TBX2is overexpressed and plays an important role in maintaining proliferation and suppression of senescence in melanomas〔J〕.Cancer Res,2005；65(16)：2260-8.