右旋雷贝拉唑钠对动物体内染色体损伤的影响实验研究

张海艇，齐 霞

（1.山东大学新药评价中心，山东济南250012；2.山东大学第二医院，山东济南250033）

右旋雷贝拉唑钠对动物体内染色体损伤的影响实验研究

张海艇1，齐 霞2

（1.山东大学新药评价中心，山东济南250012；2.山东大学第二医院，山东济南250033）

目的通过对右旋雷贝拉唑钠小鼠灌胃给药微核试验的研究，预测其遗传毒性，降低临床用药风险。方法健康雄性BALB／c小鼠60只，按体重随机分为低、中、高剂量组、溶媒对照组和阳性对照组，每组6只。分别灌胃给予右旋雷贝拉唑钠125、250、500 mg·kg－1，溶媒对照组灌胃给予灭菌蒸馏水，给药体积40 mL·kg－1；阳性对照组腹腔注射给予环磷酰胺50 mg·kg－1，给药体积为20 mL·kg－1。于给药后24 h和48 h将动物颈椎脱臼处死，取胸骨骨髓常规制片、姬姆萨染色。显微镜双盲法阅片，每只小鼠观察2 000个嗜多染红细胞（PCE），计数出现微核的嗜多染红细胞，计算微核率，并计算嗜多染红细胞与总红细胞比例。结果研究结果显示，小鼠灌胃给药24 h后，低、中、高剂量组的骨髓微核发生率分别为1.92‰、1.58‰、1.83‰，与溶媒对照组（1.75‰）相比无显著性差异，但其与阳性对照组之间（23.92‰）有非常显著性差异（P＜0.01）。在灌胃给药48 h后，低、中、高剂量组的骨髓微核发生率分别为1.75‰、1.58‰、1.50‰，与溶媒对照组（1.83‰）相比无显著性差异，但其与阳性对照组（21.83‰）之间具有非常显著性差异（P＜0.01）。结论在本试验条件下，右旋雷贝拉唑钠小鼠灌胃给药微核试验结果为阴性。

右旋雷贝拉唑钠；小鼠；染色体损伤

雷贝拉唑（rabeprazole）是新一代质子泵抑制剂（proton pump inhibitors，PPI），为苯并咪唑衍生物，具有较高的PKaA值，口服可在体内快速活化，与质子泵结合发挥抑酸作用。右旋雷贝拉唑钠是新型的抑制胃酸分泌的药物，右旋雷贝拉唑比左旋雷贝拉唑及消旋雷贝拉唑更显著有效。但其进入人体后的遗传毒性乃至致癌性尚不明确，本研究通过判断其是否具有诱导体内染色体损伤，预测其是否具有遗传毒性，降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险［1］。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试品与动物 右旋雷贝拉唑钠由扬子江药业集团有限公司提供；BALB／c雄性小鼠，购自山东大学实验动物中心，动物质量合格证号：0007327。

1.1.2 主要试剂 注射用环磷酰胺由山西普德医药股份有限公司生产；姬姆萨染液购自美国Sigma公司。

1.2 方法［2，3］

1.2.1 动物分组及给药方法 将60只小鼠按体重随机分成2大组，每组再分别分为高剂量组（500 mg·kg－1）、中剂量组（250 mg·kg－1）、低剂量组（125 mg·kg－1）、溶媒对照组以及阳性对照组（50 mg·kg－1），每组6只小鼠。阳性对照组腹腔注射给药，给药容积为20 mL·kg－1；其他组为灌胃给药，给药容积为40 mL·kg－1，给药前动物空腹12～16 h，动物给药均为单次。

1.2.2 制片及计数 小鼠分别于给药24 h和48 h后，颈椎脱臼处死，解剖取出胸骨，用纱布剔除粘附在胸骨的肌肉，用止血钳挤出骨髓液，与玻片一端小牛血清混匀，常规涂片。待骨髓液干燥后，用甲醇固定，固定时间为10 min，晾干；将固定好的涂片放入姬姆萨应用液中染色，染色时间12 min，染色结束后立即用蒸馏水冲洗，晾干写好标签，标签注明专题代号、取材时间、小鼠编号；置阴凉干燥处保存。选择细胞完整、分散均匀、着色适当的区域，在油镜下观察。经姬姆萨染色后，嗜多染红细胞胞质（PCE）呈灰蓝色，正染红细胞（NCE）呈粉红色。微核多为单个，圆形，边缘光滑整齐，嗜色质与核质一致，呈紫红色或蓝紫色，直径约为细胞核的1／20～1／5。采用双盲法阅片。每只小鼠计数2 000个PCE细胞，观察含有微核的PCE细胞数，并记录微核在玻片上的坐标。微核率以千分率表示。每只动物观察200个PCE细胞，计数在观察PCE细胞过程中见到的NCE细胞数，计算PCE／（NCE＋PCE）。如果受试物所诱发的微核率出现有剂量依赖性的升高，或某一计量组在某一测试点呈现可重复性的明显升高，可判定为阳性结果。

2 结果

小鼠灌胃给药24 h后，骨髓微核发生率见表1，灌胃48 h后结果详见表2。

表1 右旋雷贝拉唑钠小鼠灌胃给药24 h后对骨髓细胞微核率形成的影响（±s，n＝6）

表1 右旋雷贝拉唑钠小鼠灌胃给药24 h后对骨髓细胞微核率形成的影响（±s，n＝6）

注：①与Veh组相比，**P＜0.01；②PCE：嗜多染红细胞；NCE：正染红细胞

受试物 剂量（mg·kg－1）细胞数 微核数 微核率（‰） PCE／（NCE＋PCE）观察500 12 000 22 1.83 0.597±0.023 Veh ／ 12 000 21 1.75 0.605±0.025 CP 50 12 000 287 23.92** 0.359±0.012**右旋雷贝拉唑钠组125 12 000 23 1.92 0.605±0.021 250 12 000 19 1.58 0.607±0.028

表2 右旋雷贝拉唑钠小鼠灌胃给药48 h后对骨髓细胞微核率形成的影响（±s，n＝6）

表2 右旋雷贝拉唑钠小鼠灌胃给药48 h后对骨髓细胞微核率形成的影响（±s，n＝6）

注：①与Veh组相比，**P＜0.01；②PCE：嗜多染红细胞；NCE：正染红细胞

受试物 剂量（mg·kg－1）细胞数 微核数 微核率（‰） PCE／（NCE＋PCE）观察500 12 000 18 1.50 0.601±0.024 Veh ／ 12 000 22 1.83 0.606±0.016 CP 50 12 000 262 21.83** 0.366±0.015**右旋雷贝拉唑钠组125 12 000 21 1.75 0.620±0.030 250 12 000 19 1.58 0.605±0.030

3 结果与讨论

因右旋雷贝拉唑钠临床为口服给药，故采用小鼠灌胃给药方式研究其毒性。在本试验条件下，右旋雷贝拉唑钠微核试验结果为阴性，提示右旋雷贝拉唑钠遗传毒性为阴性。

在灌胃给药24 h后，低、中、高剂量组的骨髓微核发生率分别为1.92‰、1.58‰、1.83‰，与溶媒对照组（1.75‰）相比无显著性差异，但其与阳性对照组之间（23.92‰）有非常显著性差异（P＜0.01）；在灌胃给药48 h后，低、中、高剂量组的骨髓发生率分别为1.75‰、1.58‰、1.50‰，与溶媒对照组（1.83‰）相比无显著性差异，但其与阳性对照组（21.83‰）之间具有非常显著性差异，见表1～2。说明右旋雷贝拉唑钠对小鼠骨髓细胞无致微核作用。PCE／（NCE＋PCE）比值是作为药物细胞毒性的指标之一，主要用来检测药物对骨髓造血功能的影响。PCE／（NCE＋PCE）比值减小，表示药物对骨髓造血功能有抑制作用。右旋雷贝拉唑钠给药组与溶媒对照组，PCE／（NCE＋PCE）比值没有显著性差异，表明右旋雷贝拉唑钠对骨髓细胞的造血功能没有产生抑制作用。而阳性对照组，PCE／（NCE＋PCE）比值明显降低，表明阳性对照药环磷酰胺对小鼠骨髓造血功能具有抑制作用。

［1］郭增光，郭洪涛.雷贝拉唑钠肠溶片处方工艺研究［J］.药学研究，2013，32（6）：345－347.

［2］Bodhanker SL，Jain BB，Shitole PP.The effect of rabeprazole and its isomers on aspirin and histamine－induced ulcers in rats［J］.Indian JPharmacol，2008，38（5）：357－358.

［3］袁伯俊，王治乔.新药临床前安全性评价与实践［M］.北京：军事医学科学出版社，1997.

M icronucleus test of the right－handed rabeprazole sodium in m ice

ZHANG Hai-ting1，QIXia2
（1.Center for New Drug Evaluation of Shandong University，Jinan 250012，China；2.The Second Hospital of Shangdong University，Jinan 250033，China）

ObjectiveTo studymousemicronucleus test of rabeprazole sodium administered orally，evaluation dextral rabeprazole sodium on chromosome damage in animals to predict their genetic toxicity.MethodsHealthy male BALB／c mice were 60，were randomly divided into low，medium and high dose groups，vehicle control group and positive control group，n＝6.Intragastric administration of rabeprazole sodium were handed 125，250，500 mg·kg－1，and vehicle control group was given sterile distilled water，dosing volume 40 mL·kg－1；Positive control group was given intraperitoneal injection of cyclophosphamide amide 50 mg·kg－1，dose volume of20mL·kg－1.After24 h and 48 h of administration the animalswere killed by cervical dislocation，took sternum bone marrow conventional producers，Giemsa staining.Microscopy double－blind read the piece，each mouse was observed 2 000 polychromatic erythrocytes（PCE），micronuclei count appeared polychromatic erythrocytes，calculated micronucleus rate，micronucleus rate expressed in parts per thousand，and calculated the total proportion of red blood cells and red cells.Results24 h after oral administration，the bonemarrow micronucleus incidence of low，medium，high－dose group were 1.92‰，1.58‰，1.83‰，respectively，compared with the vehicle control group（1.75‰），there had no significant differences.But therewere very significant differences（P＜0.01）between it and positive control group（23.92‰）.After gavage for48 h，the incidence of bonemarrow of low，medium and high dose group were 1.75‰，1.58‰，1.50‰，respectively，and vehicle control group（1.83‰）had no significant difference，but had a very significant difference（P＜0.01）compared with positive control group（21.83‰）.ConclusionUnder the experimental conditions，the result ofmicronucleus test of the right－handed rabeprazole sodium administration orally inmice was negative.

The right－handed rabeprazole；Mouse；Chromosomal damage

R965

：A

2095－5375（2014）07－0384－003

张海艇，男，助理研究员，研究方向：药物安全性评价，E－mail：haitingzh＠sdu.edu.cn