土鳖虫药材质量标准的提高

水彩红 曹 红

（中国人民解放军总后勤部卫生部药品仪器检验所，北京 100071）

土鳖虫药材质量标准的提高

水彩红 曹 红

（中国人民解放军总后勤部卫生部药品仪器检验所，北京 100071）

目的对土鳖虫药材的质量标准进行方法提高。方法采用薄层色谱法对土鳖虫中所含四种主要的氨基酸精氨酸、甘氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定该药材中尿囊素的含量，色谱柱为Agilent ZORBAX NH2（150 mm×4.6 mm；5μm）；流动相：乙腈-水（96∶4）；检测波长：205 nm；柱温：40 ℃；结果薄层色谱法可鉴别出该药材中的精氨酸、甘氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸，薄层色谱斑点清晰。尿囊素在0.01402～0.4206 μm范围内，进样量与峰面积线性关系良好（r＝0.9999）；样品的平均加样回收率为：99.76%，RSD为1.02%，（n=6）。结论此方法简便、准确、重复性好，能有效控制土鳖虫药材的质量。

土鳖虫；TLC；HPLC；氨基酸；尿囊素

土鳖虫是传统的活血化瘀及治疗外伤的中药。始载于《神农本草经》，具有破瘀血、续筋接骨的功效，主要用于治疗筋骨折伤、血瘀经闭等病症。据文献报道，土鳖虫中所含的蛋白质、氨基酸是活血化瘀的有效成分；尿囊素具有镇静作用，且外用能促进皮肤溃疡面和伤口愈合及生肌作用[1，2]。本文通过薄层色谱法，对土鳖虫中的主要氨基酸进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对土鳖虫中的尿囊素进行含量测定，以提高药材质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

METTLER XS 205DU电子天平；Agilent-1200高效液相色谱仪；KQ-300E型超声波清洗器。

1.2 对照品与试药

对照品：精氨酸对照品（批号110872-201207）、甘氨酸对照品（批号110735-200102）、缬氨酸对照品（批号110874-201207）、苯丙氨酸对照品（批号111615-200301）、尿囊素对照品。试药：土鳖虫药材，北京绿野药业有限公司（批号：10072506、10072507），药店自购土鳖虫药材1批（产地河北，批号10061201）硅胶G薄层板：青岛海洋化工。乙腈为色谱纯；水为重蒸水；其他试剂均为分析纯。

2 薄层色谱鉴别

2.1 对照品溶液的制备

取精氨酸、甘氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸对照品，加甲醇制成每1 mL各含0.5 mg的混合溶液，作为对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

取1 g本品粉末，加50 mL50%的甲醇，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加1 mL甲醇使溶解，作为供试品溶液。

2.3 展开剂与显色条件

吸取供试品溶液和对照品溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上。以正丁醇-冰醋酸-水（3∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105 ℃加热直至出现清晰的斑点。

2.4 结果

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1。

3 含量测定

3.1 色谱分析条件

色谱柱Agilent ZORBAX NH2（150 mm×4.6 mm；5 μm）；流动相为乙腈-水（96∶4）；检测波长为205 nm；流速为1.0 mL/min；柱温40 ℃。

图1 薄层色谱

3.2 供试品溶液的制备

精密称取0.3 g土鳖虫药材粉末，置具塞锥形瓶中，精密称定，加入浓度为30%的甲醇25 mL，做30 min超声处理，自然冷却后重新称重，减失的重量用30%的甲醇补足，摇匀，过滤，取续滤液即可。

3.3 专属性试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与空白溶剂各5 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果空白溶剂在与尿囊素对照品相同保留时间处，无明显色谱峰，对测定无干扰。

3.4 样品溶液稳定性试验

将待测样品溶液，分别在0、2、5、8、12 h测定，结果表明，样品溶液在12 h内基本稳定，尿囊素峰面积RSD为1.33%。

3.5 精密度试验（重复性试验）

取同一批次（10072506）的土鳖虫药材，提取方法相同，按上述色谱条件，重复测定样品6次，结果土鳖虫药材中尿囊素的平均含量为：1.033 mg/g，RSD=1.28%（n=6）。表明此法重复性良好。

3.6 线性关系的考察

精密量取尿囊素对照品溶液（0.2804 mg/mL）0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.0 mL，至10 mL量瓶中，加30%甲醇稀释至刻度，配制成不同浓度的对照品溶液，依次注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以进样量（μg）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，回归方程为：Y=5.36 X–0.5581，相关系数r=0.9999（n=6）。结果表明尿囊素在0.01402～0.4206 μm范围内呈良好的线性关系。

3.7 准确度试验（加样回收率试验）

精密称取已知含量的土鳖虫药材（批号：10072506，尿囊素含量为：1.033 mg/g）的样品0.15 g（共测定6份），分别精确加入尿囊素对照品适量，按“3.3”项下方法制备供试品溶液，测定其含量，并计算回收率，尿囊素的回收率为99.76%，RSD为1.02%。结果表明本测定方法的回收率良好。

3.8 样品测定

按上述方法，对收集到的土鳖虫药材进行尿囊素的含量测定，结果为：药店自购：批号为10061201，测定的尿囊素为0.983 mg/g。北京绿野药业有限公司：批号为10072506，测定的尿囊素为1.033 mg/ g，批号为10072507，测定的尿囊素为1.005mg/g。

4 讨 论

4.1 《中国药典》2010年版一部中土鳖虫药材仅有对照药材的薄层色谱鉴别，本文建立了土鳖虫药材中氨基酸的薄层色谱鉴别，同时采用高效液相色谱法对土鳖虫中的尿囊素进行含量测定，以更好的控制药材质量。

4.2 展开系统的选择

曾选用正丁醇-乙醇-冰醋酸-水（4∶1∶1∶2）、正丁醇-冰醋酸-水（5∶1∶5）、正丁醇-冰醋酸-水（3∶1∶1）等溶液为展开剂。经试验，本文选用的展开系统各斑点分离效果好，显色清晰，方法重现性较好，能确证土鳖虫药材中氨基酸的特征。

4.3 检测波长的选择

对尿囊素在200～400 nm波长范围内进行光谱扫描，吸收值最大值在205 nm处，灵敏度最高，故选择其为测定波长。

4.4 含量测定项下供试品溶液提取溶媒的选择：分别选取甲醇浓度为30%、50%及70%作为提取溶媒进行比较，结果显示提取较完全的是30%甲醇。

4.5 供试品溶液提取方法的选择：我们仔细考察了超声和加热回流的时间，实验结果表明：超声处理30 min尿囊素提取效率较高，且操作简便。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010.

[2] 景晶,曹红.HPLC法测定土鳖虫中尿嘧啶和尿囊素的含量[J].药学实践杂志,2010,28(2):134-136.

表3 两组治疗前后肺功指标比较

沐舒坦主要活性成分是盐酸氨溴索，能作用于分泌细胞，使浆液分泌增加加强纤毛的摆动，促进痰液排出；降低痰黏稠度、稀释痰液，使其易于咳出，降低肺泡表面张力，促进肺表面活性物质的合成和分泌，从而促进肺成熟[4]，促进纤毛运动，使受损的纤毛运动加强，进而维护上呼吸道的自净机制[5]；沐舒坦能刺激肺泡n型细胞合成和分泌肺泡表面活性物质，防止肺泡委陷和肺不张，协助无纤毛区痰液的运送，还可清除氧自由基进而防止肺损伤[6]。当表面活性物质达到一定浓度时还有抗炎作用；抑制炎性介质的释放；对肺有高度亲和力、吸收快，在肺组织中浓度高。沐舒坦作为化痰止咳的辅助药已广泛用于临床，本组结果亦说明沐舒坦具有稀释痰液、促进黏液排除作用及溶解分泌物的特性，对治疗呼吸道感染疗效确切[7]。

普米克令舒是新合成的肾上腺糖皮质激素，成分为布地奈德，对气道的解痉作用是氢化可的松的600倍，是地塞米松的20倍。布地奈德的抗炎强度是二丙酸倍氯米松的2倍，且与之相比具有较少的全身作用；皮质激素的吸入疗法由于用量少，药物不需经血液循环而直接作用于靶器官，因此疗效好而不良反应少。布地奈德混悬液（普米克令舒）是目前唯一可雾化给药的吸入型皮质激素，吸入后部分被吸收至全身，但首次即有85% ～90%的药物经肝脏降解，所形成的代谢产物活性极低，因此安全可靠。普米克令舒是新合成的肾上腺皮质激素，具有抑制细胞生长因子和趋化因子释放作用从而使血液中嗜碱粒细胞、嗜酸粒细胞、单核细胞和淋巴细胞，尤其是黏膜上的肥大细胞显著减少，对中性粒细胞和巨噬细胞趋化因子有明显抑制作用，从而减少中性粒细胞、巨噬细胞向炎症部位游走和聚集，可直接收缩血管，从而降低血管通透性和黏膜水肿，阻止变态反应递质的释放和降低各种变态反应递质的活性，能有效清除呼吸道炎症。高压空气泵是以产生的压缩空气为动力，喷出的雾化颗粒直径＜5 pm，可以使药物最有效地沉积在呼吸道，不需用力吸气即可达到疗效，因而采用了医用压缩雾化机这一气泵驱动装置，进行被动吸入治疗。通气道高反应性及肺功能损害，主要表现为小气道阻力增加、阻塞性气功能障碍。在呼吸功能测定中多项指标，其中FEV1（L）、FEV1/FVC（%）、FEV1/预计值（%）是反映肺功能的最主要指标，治疗组经雾化吸人沐舒坦后，气道阻塞减轻，FEV1（L）、FEV1/FVC（%）、FEV1/预计值（%）明显升高，氧分压与二氧化碳分压也得到明显改善，与对照组单纯雾化吸入相比，改善更明显，此结果可解释为急性期治疗组显效率明显高于对照组，在喘憋、肺部哮鸣音、咳嗽症状改善方面优于对照组。故采用盐酸氨溴索与普米克令舒压缩雾化吸入治疗支气管炎，诸如肺部哮鸣音、喘憋、咳嗽改善方面较好。临床疗效也有统计学意义（P＜0.05），可以缩短支气管炎的病程。在肺功能方面有明显改善。同时氧分压与二氧化碳分压也得到明显改善，此结果可解释治疗组显效率明显高于对照组。胸部手术后患者并发肺部感染较为常见，多因术后置胸腔闭式引流，胸部手术创伤使胸廓活动受限，术口疼痛使患者不能有效的排痰等因素引起。尤其是心肺功能不全的老年患者、长期吸烟者和慢性支气管炎患者的发生率更高。

本试验结果表明，盐酸氨溴索、普米克令舒的联合应用，在老年肺炎患者雾化吸入时有协同作用，可降低气道阻力，改善肺通气功能，增加其抗炎活性，临床效果显著，且糖皮质激素的吸入其不良反应远低于全身激素治疗，在给药途径简捷的同时，提高了患者的依从性，是老年肺炎治疗值得推荐的方法。

参考文献

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[4] 程晓仙,涂亚兰.沐舒坦联合激素预防新生儿肺透明膜病45例疗效观察[J].重庆医学,2007,36(4):288.

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[6] 姜建强.沐舒坦雾化吸人治疗毛细支气管肺炎的疗效观察[J].实用临床医学,2006,7(11):144-145.

[7] 祁庆姣.沐舒坦治疗下呼吸道感染168例临床观察[J].重庆医学,2009,38(6):1398-1399.

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1671-8194（2014）11-0069-02