门静脉高压病人胃黏膜内生长激素释放肽的表达

杜学芳,王青,许琳,马晓莹

(青岛大学医学院附属青岛市市立医院消化内科,山东青岛 266011)

门静脉高压病人胃黏膜内生长激素释放肽的表达

杜学芳,王青,许琳,马晓莹

(青岛大学医学院附属青岛市市立医院消化内科,山东青岛 266011)

目的探讨门静脉高压(PHT)病人胃黏膜中生长激素释放肽(Ghrelin)的表达。方法采用免疫组化方法,检测39例乙型肝炎后肝硬化伴PHT病人(PHT组)及19例健康志愿者(对照组)胃黏膜Ghrelin的表达。结果PHT组病人胃黏膜内Ghrelin的阳性表达率较对照组明显降低(χ2＝3.928,P＜0.05)。门静脉高压性胃病(PHG)组病人胃黏膜内Ghrelin的阳性表达率与无PHG组比较差异无显著性(P＞0.05)。PHG重型组病人胃黏膜中Ghrelin的阳性表达率与PHG轻型组比较差异无显著性(P＞0.05)。结论PHT病人胃黏膜中Ghrelin的分泌减少,推测Ghrelin有保护胃黏膜的作用。

肝硬化;高血压,门静脉;促生长素释放激素

生长激素释放肽(Ghrelin)是由28个氨基酸组成的脑肠肽,主要由胃组织分泌入血,与摄食调节、肥胖、糖尿病、代谢综合征、心血管疾病、消化系统疾病等密切相关[1]。门静脉高压(PHT)并发消化道大出血是肝硬化病人常见死因,目前已引起广泛关注。最近有研究显示,Ghrelin在PHT病人及其并发症的发生、发展中扮演着重要角色。本文采用免疫组化方法检测Ghrelin在PHT病人胃黏膜组织表达,探讨Ghrelin与PHT的相关性,旨在为PHT的预防、诊断和治疗提供帮助[2-3]。

1 材料与方法

1.1 材料来源

随机选取我院2009年5月—2012年4月收治乙型肝炎(乙肝)后肝硬化伴PHT病人39例,男21例,女18例;年龄30～63岁,平均(45.79±15.73)岁。乙肝后肝硬化诊断符合由中华医学会肝病学分会、中华医学会感染病分会、中国肝炎防治基金会联合颁布的《2010年慢性乙型肝炎防治指南》中的标准。根据内镜下有无门静脉高压性胃病(PHG)分为PHG组18例和无PHG组21例,参照McCormack的分类方法将PHG病人分为PHG轻型组8例和PHG重型组10例。同时,选取本院同期胃镜检查大致正常的健康志愿者19例作为对照组,男11例,女8例,年龄25～68岁,平均(51.09± 19.58)岁。本研究由医院伦理委员会批准,受试者均已签署知情同意书。各组间性别、年龄均具有可比性。

1.2 Ghrelin免疫组化染色

常规胃镜准备,所有受试者均在晨起空腹清醒的情况下由经验丰富的医师行胃镜检查,并于胃窦处取大小约0.5 cm×0.3 cm组织1块,置于40 g/L多聚甲醛中固定2～3 d,常规脱水透明,石蜡包埋, 3μm厚连续切片。组织切片烤片2 h后,脱蜡、水化,沸水浴法抗原修复,双氧水封闭20 min,37℃下血清封闭20 min,滴加一抗(浓度为5μg/L),4℃过夜,二抗孵育20 min,DAB显色,苏木精复染,常规脱水、透明、封片、镜检。以PBS代替一抗作为空白对照。

1.3 免疫组织化学结果定量判断标准

Ghrelin阳性表达的细胞散在于黏膜固有层的腺体,棕褐色为阳性。染色后先在光学显微镜下定性观察,随机选取互不重叠的5个视野,然后于高倍镜(400倍)下观察判定Ghrelin的阳性表达情况,并取其平均值做为最后的结果。评分标准:①按显色深浅评分:不显色为0分,浅黄色显色为1分,棕黄色显色为2分,棕褐色显色为3分。②按显色比例评分:显色细胞占细胞总数＜25%为1分,25%～50%为2分,51%～75%为3分,＞75%为4分。最后以两者乘积得分作为判定标准。0分为阴性,1～4分为弱阳性,5～9分为阳性,＞9分为强阳性。统计分析时,将弱阳性与阴性归为阴性表达,强阳性与阳性归为阳性表达,计算阳性表达率[4]。

1.4 统计学处理

应用SPSS 17.0软件进行统计学分析。计数资料数据间比较采用卡方检验,以P＜0.05为差异有显著意义。

2 结 果

PHT组病人Ghrelin阳性表达12例,阳性表达率为30.8%;正常对照组Ghrelin阳性表达11例,阳性表达率为57.9%,两组比较差异有显著意义(χ2＝3.928,P＜0.05)。无PHG组病人Ghrelin阳性表达6例,阳性表达率为28.6%;PHG组病人Ghrelin阳性表达18例,阳性表达率为33.3%,两组比较差异无显著性(P＞0.05)。PHG重型组病人Ghrelin阳性表达4例,阳性表达率为40.0%;PHG轻型组病人Ghrelin阳性表达2例,阳性表达率为25.0%,两组比较差异无显著性(P＞0.05)。

3 讨 论

Ghrelin是在1999年由日本国立循环疾病中心KOJIMA等首先在小鼠胃内分泌细胞及下丘脑弓状核中发现,它是由28个氨基酸构成的多肽,主要由胃组织的X/A样内分泌细胞产生,同时存在于下丘脑、弓状核、肠道、垂体、肾脏、胎盘、胰腺、睾丸等组织中[5-6]。研究证实,Ghrelin具有刺激GH分泌、增强食欲、促进胃酸分泌、增进胃肠动力及保护胃黏膜等生物学功能[7]。越来越多的研究表明,Ghrelin受到多种不同生理病理状态的调节和影响,并对多种疾病的发生产生影响。本研究结果显示,PHT病人胃黏膜内Ghrelin的表达显著下降。PHT病人食管胃底静脉曲张[8],胃黏膜充血水肿,细胞功能受损,导致胃黏膜分泌Ghrelin减少。据有关研究报道,Ghrelin及其受体均在血管表达,Ghrelin对血管的作用限于有血管的区域,Ghrelin可直接舒张血管并逆转血管内皮素所致的血管收缩作用[9]。因此,推测Ghrelin具有保护胃黏膜的作用。PHG组病人胃黏膜内Ghrelin的阳性表达率与无PHG组比较、PHG重型组病人胃黏膜中Ghrelin的阳性表达率与PHG轻型组比较,差异均无显著意义。说明Ghrelin的表达与病人有无PHG及其程度无关。

综上所述,PHT病人胃黏膜充血水肿,胃黏膜内Ghrelin的表达下降,提示Ghrelin具有保护胃黏膜的作用。推测通过检测胃黏膜内Ghrelin的表达水平,可预测胃黏膜的预后。

[1]ANGELIDIS G,VALOTASSIOU V,GEORGOULIAS P.Current and potential roles of ghrelin in clinical practice[J].2010,33(11):823-838.

[2]于群德,曲海霞,卫红军,等.Barrett食管黏膜中Ghrelin表达[J].胃肠病学和肝病学杂志,2011,20(5):423-434.

[3]王青,许琳,李凌燕.在青岛韩国人胃炎内镜检查结果[J].青岛大学医学院学报,2009,45(6):557-560.

[4]柳亚娟,范钟麟,王学红.青海地区胃癌组织中Ghrelin和Obestatain表达的相关性及临床意义[J].现代肿瘤医学, 2011,19(9):1815-1818.

[5]KOJIMA M,HOSODA H,DATE Y,et al.Ghrelin is growth-hormone-releasing acylated peptide from stomach[J].Nature,1999,402(6762):656-660.

[6]HOWARD A D,FEIGHNER S D,CULLY D F,et al.A receptor in pituitary and hypothalamus that function in growth hormone release[J].Science,1996,273(5277):974-977.

[7]王丽,丁士刚.Ghrelin与消化系统疾病[J].胃肠病学,2006, 11(6):373-375.

[8]付慧玲,张民.慢性肝病病人282例胃镜与B超检查结果分析[J].齐鲁医学杂志,2012,25(4):363-364.

[9]SHIMIZU Y,NAGAYA N,TERANISHI Y,et al.Ghrelin improves endothelial dysfunction through growth hormone-independent mechanisms in rats[J].2003,310(3):830-835.

(本文编辑 厉建强)

EXPRESSION OF GHRELIN IN GASTRIC MUCOSA OF PATIENTS WITH PORTAL HYPERTENSION

DU Xuefang,WANG Qing,XU Lin,MA Xiaoying (The Affiliated Municipal Hospital of Qingdao University Medical College,Qingdao 266011, China)

ObjectiveTo investigate the expression of Ghrelin in gastric mucosa of patients with portal hypertension (PHT).MethodsGhrelin in gastric mucosa in 39 patients with PHT due to hepatitis B-related liver cirrhosis and 19 health volunteers(normal controls)was detected by using immunohistochemical method.ResultsThe expression of Ghrelin in gastric mucosa of the patients was lower than that of the normal controls(χ2＝3.928,P＜0.05).The difference of expression of Ghrelin between patients with portal hypertensive gastropathy(PHG)and those without was not significant(P＞0.05),the same was noted in PHG patients between severe and mild type group(P＞0.05).ConclusionThe expression of Ghrelin in gastric mucosa of patients with PHG decreases,it is presumed that Ghrelin plays a protection of gastric mucosa.

liver cirrhosis;hypertension,portal;somatotropin-releasing hormone

R575

A

1008-0341(2014)01-0052-02

10.13362/j.qlyx201401019

2013-02-25;

2013-04-19

杜学芳(1985-),女,硕士研究生。

王青(1961-),男,主任医师,硕士生导师。E-mail: qingwangqingdao＠yahoo.com.cn。