HPLC法测定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量

李 琛

(武汉市中医医院，湖北 武汉 430014)



HPLC法测定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量

李 琛

(武汉市中医医院，湖北 武汉 430014)

目的：建立高效液相色谱测定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量的方法。方法：色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18，流动相为0.4%醋酸溶液-乙腈，梯度洗脱，流速为1.0mL/min，检测波长为269nm，柱温为30℃。结果：实验结果表明，木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷分别在0.055 1～0.350 2g/L和0.064 2～0.125 1g/L浓度范围内与其峰面积积分呈良好的线性关系，r分别为0.999 3和0.999 5，加样回收率分别为98.45%和99.68%。结论：采取高效液相色谱法测定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量简便可行，专属性较强，结果准确可靠，可作为菊花中有效成分的含量测定方法，用于其质量控制。

菊花；木犀草素；木犀草素-7-O-葡萄糖苷；高效液相色谱法；含量测定

菊花为菊科植物菊花的干燥头状花序，其主要功效为疏风、清热、明目、解毒等，可用于治疗头痛、目赤、眩晕、疔疮、心胸烦热以及肿毒等症[2]。现代药理学研究表明，菊花可治疗冠心病、降血压、预防高血脂等，并具有抗病毒、抗菌、抗衰老等诸多药理活性。中药材有效成分相对复杂，近年研究显示，菊花含有的木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷具有显著的降血脂、降血压以及双向免疫调节作用[2]。因此本研究建立了高效液相色谱测定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量的方法，以控制菊花药材的质量，现报道如下。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

Agilent 1100 系列高效液相色谱仪，包括配套的UV 检测器，四元泵，自动进样器以及柱温箱；电子天平。

1.2 试剂与药材

木犀草素对照品，木犀草素-7-O-葡萄糖苷对照品，纯度均>98.5%；菊花药材，购自5个不同产地，通过鉴定证实为菊科菊属植物菊的干燥头状花序。乙腈为色谱纯，醋酸为分析纯，实验用水为乐百氏纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱，流动相为0.4%醋酸溶液-乙腈，梯度洗脱，A相为0.4%醋酸水溶液，B相为乙腈，0～5min时B相浓度为5%～15%，5～10min时为15%～25%，10～25min时为25%～55%。流速为1.0mL/min，检测波长为269nm，柱温为30℃，进样量为20μL[3]。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液制备 精密称取木犀草素1.02mg和木犀草素-7-O-葡萄糖苷1.04mg，经甲醇溶解后定容至1mL容量瓶中，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过后得到混合对照品溶液，于4℃下保存备用。

2.2.2 供试品溶液制备 菊花药材经充分粉碎后过60目筛，精密称取1g菊花粉末，用20mL甲醇溶解，超声提取1.5h，所得提取液经石油醚萃取，萃取液经0.45μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液，于4℃下保存备用。

2.3 线性关系考察

将对照品溶液配制成一系列浓度的溶液，在上述色谱条件下进样检测，以色谱峰面积作为纵坐标，对照品质量浓度作为横坐标进行线性回归，得回归方程为：Y(木犀草素)=56 923X-1.613，r=0.999 3，木犀草素在0.055 1～0.350 2g/L浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系；Y(木犀草素-7-O-葡萄糖苷)=57 144X-1.703，r=0.999 5，木犀草素-7-O-葡萄糖苷在0.064 2～0.125 1g/L浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系。

2.4 精密度考察

取同一浓度供试品溶液在上述色谱条件下进样检测，连续操作6次，计算木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷峰面积的RSD值，结果表明木犀草素峰面积RSD值为0.98%，木犀草素-7-O-葡萄糖苷峰面积RSD值为0.77%，均在允许范围内，表明该方法精密度良好。

2.5 重复性考察

取同一批次的菊花药材，制成供试品溶液，在上述色谱条件下进样检测，计算木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的峰面积RSD值，结果表明木犀草素峰面积RSD值为1.01%，木犀草素-7-O-葡萄糖苷峰面积RSD值为1.12%，均在允许范围内，表明该方法重复性良好。

2.6 稳定性考察

取同一供试品溶液，分别在配制后0、2、4、6、8、12、16h时在上述色谱条件下进样检测，计算木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的峰面积RSD值，结果表明木犀草素峰面积RSD值为1.22%，木犀草素-7-O-葡萄糖苷峰面积RSD值为1.28%，表明供试品溶液在16h内具有良好的稳定性，测定结果可靠。

2.7 加样回收实验

称取5份已知有效成分含量的菊花样品，每份1g，分别精密加入一定量的木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷对照品溶液，制成供试品溶液，在上述色谱条件下进样检测，计算木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的回收率，结果见表1。

表1 加样回收率实验结果

2.8 样品测定

将5个不同产地的菊花药材充分粉碎后过60目筛，制成供试品溶液，在上述色谱条件下进样测定，测得木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的含量详见表2。

表2 不同产地菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量测定结果 (mg/g)

3 讨论

菊花属于药食同源植物，目前关于菊花的分类、鉴定、化学成分、临床以及药理研究均较多，其有效成分复杂，其中木犀草素与木犀草素-7-O-葡萄糖苷为两种重要成分[4]。为了对菊花进行充分开发利用，本研究拟建立高效液相色谱测定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量的方法。本研究对超声提取法的提取时间、提取溶剂以及提取次数等均进行了考察，结果发现，无水甲醇一次性超声提取1h的色谱峰响应值最高，且含量也未发生明显改变，稳定性良好。其后对流动相比例也进行了考察，最后确定流动相为乙腈-0.4%醋酸水溶液梯度洗脱[5]。

通过线性关系、精密度、重现性考察证实，木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷分别在0.055 1～0.350 2g/L和0.064 2～0.125 1g/L范围内与其峰面积呈良好的线性关系，r分别为0.999 3和0.999 5，加样回收率分别为98.45%和99.68%。该法精密度与重现性良好，加样回收实验表明木犀草素与木犀草素-7-O-葡萄糖苷的回收率分别为97.6%和99.8%；稳定性实验表明菊花供试品溶液在16h内具有良好的稳定性；最后对5个不同产地菊花药材中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的含量进行了测定，结果表明，不同产地菊花的有效成分含量存在一定差异，说明菊花的有效成分含量会受产地的影响，值得关注[6-7]。

综上所述，本研究建立的检测方法具有较高的可行性和专属性，精密度与重现性良好，检测结果准确，可作为菊花药材质量控制的有效手段，为市场药材流通以及临床用药提供了可靠依据，值得关注并推广。

[1] 朱晓丽,宋亚芳,李学林,等.高效液相色谱法测定野菊花中绿原酸的含量[J].中国实验方剂学杂志,2010,11(2):334-335.

[2] 李志浩,李鹏,朱雪松,等.反相高效液相色谱法同时测定神农香菊中绿原酸木犀草素和蒙花苷的含量[J].医药导报,2010,14(4):921-923.

[3] 侯坤,许浚,张铁军.HPLC同时测定小蓟中蒙花苷和绿原酸的含量[J].中国实验方剂学杂志,2010,23(13):783-784.

[4] 朱丽,卢化.HPLC法测定药用菊花中木犀草素的含量[J].湖北中医杂志,2010,14(2):1098-1099.

[5] 杨柳,李俐,雷基祥,等.不同品种菊花和贵州产野菊花中木犀草素的含量比较[J].中国野生植物资源,2009,23(1):452-454.

[6] 王柯,王艳艳,赵东保,等.HPLC法测定金银花不同部位中木犀草素及其苷的含量[J].河南大学学报:自然科学版,2011,22(1):1121-1122.

[7] 陈月圆,李典鹏,卢凤来,等.HPLC-ELSD法测定细风轮菜中醉鱼草苷Ⅳ的含量[J].农业研究与应用,2011,16(3):1145-1146.

(责任编辑：尹晨茹)

2014-01-06

李琛(1973-)，女，湖北省武汉市中医医院主管中药师，研究方向为中药制剂。

R284.1

A

1673-2197(2014)08-0019-02