多囊卵巢综合征患者妊娠期血清、胎盘局部雄激素水平的检测及评价

赵楠楠，崔毓桂，刘嘉茵

（江苏南京医科大学第一附属医院，南京 201129）

多囊卵巢综合征（PCOS）是育龄妇女常见的生殖内分泌疾病，发病率占育龄期女性的5%～10%［1］，是不排卵性不孕的最常见病因，虽然经促排卵治疗及辅助生殖技术（ART）大多数患者可以成功妊娠，但有研究显示PCOS患者妊娠后增加了不良妊娠结局发生的危险，如妊娠期高血压疾病、先兆子痫、胎儿宫内生长发育受限、早产、低于胎龄体重儿［2］。有报道约50%以上的中国PCOS患者有高雄激素血症［3］，PCOS患者妊娠期外周血雄激素水平会明显升高［4］，而PCOS患者妊娠期胎盘组织局部是否存在雄激素水平的升高尚未有明确的报道。因此，本研究旨在观察具有高雄激素血症的PCOS患者胎盘组织局部雄激素水平是否升高，并探讨胎盘局部高雄激素水平与PCOS患者不良妊娠结局的关系。

资料与方法

一、研究对象

选择2012年3月至2013年1月在江苏省人民医院生殖中心接受体外受精－胚胎移植（IVF-ET）治疗的PCOS患者17例（PCOS组），年龄27～39岁，足月、剖腹产、单胎、胎儿出生体重2，500～4，550g，无孕期并发症，因PCOS伴或不伴输卵管因素行IVF-ET治疗后妊娠；男方精液常规检查结果正常。以上严格的入选标准旨在避免研究结果受到其他因素干扰。另选择同期卵巢功能正常，因输卵管因素、流产后继发不孕的非PCOS妇女19例为对照组，匹配产次、产妇年龄、妊娠时间、出生性别等参数，排除妊娠期及分娩并发症。PCOS的诊断标准参照鹿特丹标准，血清雄激素水平升高的诊断参照本院执行标准（0．35～2．60nmol／L）。ART临床应用获得原国家卫生部授权，所有受试者签订知情同意书，本研究方案得到南京医科大学第一附属医院伦理委员会批准。

二、方法

1．标本采集：分娩当日空腹抽肘静脉血5～10ml，分离血清置－20℃保存待测，分娩后立即收集入选者胎盘组织。避开胎盘梗死和血管瘤部分，从脐带植入点旁开5cm处纵向切开胎盘组织。参照Sood等［5］报道，将胎盘组织纵向分为3部分，即母体部分、中间部分和胎儿部分，每一部分都具有不同的功能。本研究收集中间部分绒毛，以尽量减少其他部分对本研究结果的影响。所有胎盘组织在冰预冷的PBS中充分漂洗后，保存在液氮中备用。

2．检测：1g胎盘组织分别在冰台上解冻，冰浴中制备匀浆，在4℃低速冷冻离心机（1，500r／min）离心20min，取上清液使用BCA蛋白浓度测定试剂盒（RD，美国）测量蛋白浓度，使用性激素结合球蛋白（SHBG）酶联免疫吸附法（ELISA）测定试剂盒（RD，美国）测量SHBG浓度，匀浆样品用5ml×2次乙醚提取总类固醇，提取混合物40℃水浴蒸干后用1ml PBS液重组，用碘125睾酮放射免疫分析药盒（北京北方生物技术公司）测定其中的总睾酮（TT），分别比较各组间TT，SHBG和游离睾酮指数（FAI）（FAI＝TT×100／SHBG）等指标。

三、统计学分析

结 果

一、两组一般情况比较

PCOS组与对照组相比，孕母年龄、妊娠时间、平均新生儿体重、新生儿体重／胎盘重量比值差异均无统计学意义（P＞0．05）（表1）。

表1 两组样本流行病学资料（±s）

表1 两组样本流行病学资料（±s）

注：＊新生儿／胎盘指数：新生儿出生体重／胎盘重量

组 别 n 初产妇 分娩方式 年龄（岁）妊娠时间（周）出生体重（g）出生性别男 女新生儿／胎盘指数＊PCOS组 17 15 剖腹产 32．3±3．1 39．1±0．18 3，282．4±568．4 12 5 6．59±0．08对照组 19 18 剖腹产 33．4±2．8 39．0±0．82 3，210．5±556．9 12 7 6．82±0．26

二、PCOS组和对照组患者血清、胎盘组织匀浆液中TT和SHBG水平

与对照组或PCOS非高雄组比较，PCOS高雄组血清及胎盘组织中TT、FAI明显升高，差异具有统计学意义（P均＜0．001）；PCOS高雄组SHBG稍有降低，但无显著差异（P＞0．05）；对照组和PCOS非高雄组比较，各项指标均无显著差异（P＞0．05）（表2）。

表2 PCOS患者和正常对照组血清和胎盘组织中TT、SHBG和FAI的水平（±s）

表2 PCOS患者和正常对照组血清和胎盘组织中TT、SHBG和FAI的水平（±s）

注： FAI＝TT×100／SHBG；与对照组或PCOS非高雄组比较，＊P＜0．001

组 别 n 血清TT（nmol／L）胎盘组织TT（nmol／L）血清SHBG（nmol／L）胎盘组织SHBG（nmol／L） 血清FAI 胎盘组织FAI PCOS非高雄组 5 1．44±0．38 0．08±0．01 121．87±22．49 4．50±1．36 1．21±0．40 2．00±0．41 PCOS高雄组 12 4．84±1．20＊ 0．18±0．07＊ 114．53±29．07 4．04±1．58 4．46±1．51＊ 5．04±2．84＊对照组 19 1．60±0．36 0．10±0．06 115．36±19．50 4．60±2．43 1．42±0．35 2．20±0．87

讨 论

高雄激素血症是PCOS的重要特征之一，在妊娠期可通过影响胎盘和胚胎发育引起各种不良妊娠结局，并发先兆子痫和妊娠期糖尿病的孕妇也常伴有外周血雄激素水平的升高［6，7］。胎盘作为妊娠期连接母胎的独特器官，具有重要的功能。在妊娠期，胎盘是类固醇激素生成的重要器官，通过这些类固醇激素来影响胎儿、胎盘以及母体的相关代谢和发育。妊娠初期胎盘形成，子宫螺旋动脉由蜕膜面长入胎盘，胎盘绒毛上特定亚型的细胞滋养层细胞分化为绒毛外滋养层细胞，侵入子宫螺旋动脉肌弹性纤维层，螺旋动脉壁重塑，成为大容量血管，血管阻力降低。而PCOS患者孕期胎盘滋养层细胞侵袭受损，子宫动脉压持续增高，胎盘灌注不足，诱发胎盘缺血缺氧，胎盘绒毛坏死和血管形成异常，这与先兆子痫、胎儿宫内发育异常的发生密切相关［8］，PCOS患者体内的高雄激素水平可能是导致这种改变的主要原因［9］。PCOS患者在妊娠期常出现胰岛素抵抗的恶化和胰岛素水平升高［10］，胰岛素可抑制P450芳香化酶的活性［11］和促进3β－羟固醇 脱氢酶－1的活性［12］，导 致胎盘局部过多的雄激素生成，雌激素水平降低。在其他伴有胰岛素抵抗和高胰岛素血症的疾病中，如先兆子痫和妊娠期糖尿病，常发现P450芳香化酶的活性降低［13，14］。胎盘屏障是胎盘的重要功能结构，它将母体血和胎儿血限制在两个不同的空间，同时两者又能进行充分的物质交换，胎盘屏障由合体滋养层（syncytiotrophoblast，ST）细胞、血管内皮细胞、各自的基膜以及两者之间的间质组成。紧密连接存在于人胎盘滋养层细胞之间和胎儿血管内皮细胞之间，参与胎盘屏障的形成［15－17］。在 血 脑 屏 障［18］、血 眼 屏 障［19］、血 气 屏障［20］等多种血－组织屏障中发现氧气浓度、甾体激素及炎症因子可引起紧密连接（tight junction，TJ）功能失调，表现为TJ相关因子表达和定位改变，影响上皮细胞旁转运能力，导致上皮屏障功能障碍。研究发现，异常的激素水平可以破坏TJ结构［21］，影响胎盘屏障的功能。有报道在先兆子痫胎盘血管内皮细胞中存在TJ功能异常，伴有多个TJ因子表达下降［17］。

PCOS伴高雄激素血症患者病理妊娠发生率高，不仅危及孕产妇生命，而且影响人口素质，造成家庭和社会负担，故早期对PCOS患者进行高雄激素血症的诊断、综合干预治疗，对有效防治产科并发症和改善母婴结局具有重要意义。

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