上海市宝山区2株疑似霍乱弧菌的鉴定及分析

沈隽卿等

霍乱是由O1群和O139群霍乱弧菌引起的急性肠道传染病，是发病急、传播快、波及面广、危害严重的甲类传染病。解放前，我国的霍乱主要由O1群古典生物型引起，1961年我国广东省首次出现El Tor生物型霍乱流行1993年，在新疆局部地区发生O139血清霍乱。上海市宝山区从1962年开始流行霍乱，当年本地人口病例数59人，发病率为12/10万；1978—1981年为发病高峰期，1980年发病率最高为15/10万；1994年有1次大爆发，病例数达到109人，隔年病例数即下降至12人；1996—2004年，处于霍乱低发时期，偶有散发病例，共检出10例阳性；2005—2011年无本地病例检出；2012年5月检出1株O139群霍乱弧菌。同我国近10年来的霍乱流行特点基本符合，多为小范围的爆发流行及散发，多数爆发为卫生条件较差的聚餐活动引起，同时出现了以稻叶型为高发流行优势菌的发展趋向和低发水平时O139霍乱病例所占比例较高的特点。

1材料与方法

1.1样品来源

2012年5月，于淞南社区卫生服务中心肠道门诊腹泻病人肛拭样品中，检测到1株O139群霍乱弧菌（编号为BS-25）；2012年7月，华山医院宝山分院送检鉴定1株未知群的霍乱弧菌（编号为7933）。

1.4病例基本情况

BS-25株的患者为宝山区淞南街道居民，女。2012年 5月1日至崇明县参加喜宴聚餐，除此之外无其他聚餐活动和不洁饮食史，并将从酒席上带回的剩余油爆虾放入冰箱中冷藏，5月5日晚取出油爆虾加热后食用，5月6日发病。大便性状为黄色糊状便，无腹痛、无呕吐、无发热等其他症状。

7933株的患者为宝山区水产路某小区居民，女，入院做阑尾手术。2012年7月29日采集阑尾渗出液进行实验室病原学检测时检出，临床使用头孢类抗生素后炎症好转。

3讨论

3.1霍乱弧菌的鉴别

3.1.1菌落形态O139群霍乱弧菌在双洗平板上半透明、扁平、黑心不明显，与O1群霍乱弧菌黑心较明显不同。O77群疑似霍乱弧菌在双洗平板上半透明、扁平、黑心明显。O139群霍乱弧菌在弧菌显色培养基上中间略有凹陷、中间蓝色，边缘透明，O77群疑似霍乱弧菌在弧菌显色培养基上菌落微凸、中间蓝绿色，边缘透明，但不明显，菌落比较大。

3.1.2生化结果2例霍乱弧菌利用甘露糖、蔗糖、阿拉伯糖、淀粉结果都为“-、+、-、+”，氧化酶试验阳性。BS-25株山梨醇迟发酵，表明是流行株，有毒力，和毒力基因试验结果符合。7933株山梨醇快发酵，表明不是流行株。

3.1.3常规荧光定量PCR结果和毒力基因检测两者常规PCR检测霍乱弧菌核酸都为阳性，这与血清凝集试验结果符合，都属于霍乱弧菌属。O139群霍乱弧菌ctx、zot、ace、tcp 4种常见毒力基因的核酸检测都为阳性，与以上流行株结果相符合。有研究发现，霍乱流行时期的O139群霍乱弧菌感染者分离株检测的毒力相关基因为阳性，将毒力相关基因分型用于判断和区分O139群霍乱弧菌的流行株与非流行株也是可行的＼[5＼]。而O77群霍乱弧菌毒力基因检测都为阴性，表明无毒力，与非流行株的结果相符合。

3.1.4药敏试验结果BS-25株有多重耐药的现象，7933株对利福平中度敏感，提示这种抗菌药物有耐药的趋向，对其余的抗菌药物则均为敏感。

3.2加强监测，及时发现疫情

虽然非O1、O139群的霍乱弧菌通常不引起严重的腹泻，且未列入法定传染病，但是这类细菌在自然界中普遍存在，有时对人们的健康也造成了一定的危害，需要引起重视。而本株O139群霍乱弧菌的检出，说明我区仍然有霍乱发病及流行的潜在危险，而且我区地处长江入海口，海水和淡水交汇处，应做好各种水源中霍乱弧菌的监测。患者大多是通过被污染的食品而感染，因此，必须搞好城镇卫生，加强疫情监测。本次疫情发生后，我区疾病预防控制中心立即组织对全区医疗卫生机构进行了霍乱弧菌知识及检测的业务培训，并加强对医疗机构的日常指导和质控，及时掌握流行动向。

4参考文献

[1]罗朝成，谢一俊，张静.霍乱流行态势及我国霍乱防控中存在的问题＼[J＼].传染病信息，2008，21（3）：153-154.

[2]燕勇，罗建勇，朱心强，等.霍乱及霍乱弧菌检测技术研究进展＼[J＼].上海预防医学，2012，24（8）：459-462.

[3]Singh DV， Sree Renjini Isac，Colwell RR. Development of a hexaplex PCR assay for rapid detection of virulence and regulatory genes in vibrio cholerae and vibrio mimicus＼[J＼]. J Clin Microbiol，2002，40（11）：4321-4324.

[4]古文鹏，伏晓庆，杨建斌，等.2011年云南省中缅边境地区三起霍乱疫情菌株分子分型研究＼[J＼].中华预防医学杂志，2012，46（6）：573-574.

[5]詹銮峰，王晓萍，郭维植，等.霍乱弧菌毒力相关基因检测分析＼[J＼].中国卫生检验杂志，2008，18（9）：1727-1728.

霍乱是由O1群和O139群霍乱弧菌引起的急性肠道传染病，是发病急、传播快、波及面广、危害严重的甲类传染病。解放前，我国的霍乱主要由O1群古典生物型引起，1961年我国广东省首次出现El Tor生物型霍乱流行1993年，在新疆局部地区发生O139血清霍乱。上海市宝山区从1962年开始流行霍乱，当年本地人口病例数59人，发病率为12/10万；1978—1981年为发病高峰期，1980年发病率最高为15/10万；1994年有1次大爆发，病例数达到109人，隔年病例数即下降至12人；1996—2004年，处于霍乱低发时期，偶有散发病例，共检出10例阳性；2005—2011年无本地病例检出；2012年5月检出1株O139群霍乱弧菌。同我国近10年来的霍乱流行特点基本符合，多为小范围的爆发流行及散发，多数爆发为卫生条件较差的聚餐活动引起，同时出现了以稻叶型为高发流行优势菌的发展趋向和低发水平时O139霍乱病例所占比例较高的特点。

1材料与方法

1.1样品来源

2012年5月，于淞南社区卫生服务中心肠道门诊腹泻病人肛拭样品中，检测到1株O139群霍乱弧菌（编号为BS-25）；2012年7月，华山医院宝山分院送检鉴定1株未知群的霍乱弧菌（编号为7933）。

1.4病例基本情况

BS-25株的患者为宝山区淞南街道居民，女。2012年 5月1日至崇明县参加喜宴聚餐，除此之外无其他聚餐活动和不洁饮食史，并将从酒席上带回的剩余油爆虾放入冰箱中冷藏，5月5日晚取出油爆虾加热后食用，5月6日发病。大便性状为黄色糊状便，无腹痛、无呕吐、无发热等其他症状。

7933株的患者为宝山区水产路某小区居民，女，入院做阑尾手术。2012年7月29日采集阑尾渗出液进行实验室病原学检测时检出，临床使用头孢类抗生素后炎症好转。

3讨论

3.1霍乱弧菌的鉴别

3.1.1菌落形态O139群霍乱弧菌在双洗平板上半透明、扁平、黑心不明显，与O1群霍乱弧菌黑心较明显不同。O77群疑似霍乱弧菌在双洗平板上半透明、扁平、黑心明显。O139群霍乱弧菌在弧菌显色培养基上中间略有凹陷、中间蓝色，边缘透明，O77群疑似霍乱弧菌在弧菌显色培养基上菌落微凸、中间蓝绿色，边缘透明，但不明显，菌落比较大。

3.1.2生化结果2例霍乱弧菌利用甘露糖、蔗糖、阿拉伯糖、淀粉结果都为“-、+、-、+”，氧化酶试验阳性。BS-25株山梨醇迟发酵，表明是流行株，有毒力，和毒力基因试验结果符合。7933株山梨醇快发酵，表明不是流行株。

3.1.3常规荧光定量PCR结果和毒力基因检测两者常规PCR检测霍乱弧菌核酸都为阳性，这与血清凝集试验结果符合，都属于霍乱弧菌属。O139群霍乱弧菌ctx、zot、ace、tcp 4种常见毒力基因的核酸检测都为阳性，与以上流行株结果相符合。有研究发现，霍乱流行时期的O139群霍乱弧菌感染者分离株检测的毒力相关基因为阳性，将毒力相关基因分型用于判断和区分O139群霍乱弧菌的流行株与非流行株也是可行的＼[5＼]。而O77群霍乱弧菌毒力基因检测都为阴性，表明无毒力，与非流行株的结果相符合。

3.1.4药敏试验结果BS-25株有多重耐药的现象，7933株对利福平中度敏感，提示这种抗菌药物有耐药的趋向，对其余的抗菌药物则均为敏感。

3.2加强监测，及时发现疫情

虽然非O1、O139群的霍乱弧菌通常不引起严重的腹泻，且未列入法定传染病，但是这类细菌在自然界中普遍存在，有时对人们的健康也造成了一定的危害，需要引起重视。而本株O139群霍乱弧菌的检出，说明我区仍然有霍乱发病及流行的潜在危险，而且我区地处长江入海口，海水和淡水交汇处，应做好各种水源中霍乱弧菌的监测。患者大多是通过被污染的食品而感染，因此，必须搞好城镇卫生，加强疫情监测。本次疫情发生后，我区疾病预防控制中心立即组织对全区医疗卫生机构进行了霍乱弧菌知识及检测的业务培训，并加强对医疗机构的日常指导和质控，及时掌握流行动向。

4参考文献

[1]罗朝成，谢一俊，张静.霍乱流行态势及我国霍乱防控中存在的问题＼[J＼].传染病信息，2008，21（3）：153-154.

[2]燕勇，罗建勇，朱心强，等.霍乱及霍乱弧菌检测技术研究进展＼[J＼].上海预防医学，2012，24（8）：459-462.

[3]Singh DV， Sree Renjini Isac，Colwell RR. Development of a hexaplex PCR assay for rapid detection of virulence and regulatory genes in vibrio cholerae and vibrio mimicus＼[J＼]. J Clin Microbiol，2002，40（11）：4321-4324.

[4]古文鹏，伏晓庆，杨建斌，等.2011年云南省中缅边境地区三起霍乱疫情菌株分子分型研究＼[J＼].中华预防医学杂志，2012，46（6）：573-574.

[5]詹銮峰，王晓萍，郭维植，等.霍乱弧菌毒力相关基因检测分析＼[J＼].中国卫生检验杂志，2008，18（9）：1727-1728.

霍乱是由O1群和O139群霍乱弧菌引起的急性肠道传染病，是发病急、传播快、波及面广、危害严重的甲类传染病。解放前，我国的霍乱主要由O1群古典生物型引起，1961年我国广东省首次出现El Tor生物型霍乱流行1993年，在新疆局部地区发生O139血清霍乱。上海市宝山区从1962年开始流行霍乱，当年本地人口病例数59人，发病率为12/10万；1978—1981年为发病高峰期，1980年发病率最高为15/10万；1994年有1次大爆发，病例数达到109人，隔年病例数即下降至12人；1996—2004年，处于霍乱低发时期，偶有散发病例，共检出10例阳性；2005—2011年无本地病例检出；2012年5月检出1株O139群霍乱弧菌。同我国近10年来的霍乱流行特点基本符合，多为小范围的爆发流行及散发，多数爆发为卫生条件较差的聚餐活动引起，同时出现了以稻叶型为高发流行优势菌的发展趋向和低发水平时O139霍乱病例所占比例较高的特点。

1材料与方法

1.1样品来源

2012年5月，于淞南社区卫生服务中心肠道门诊腹泻病人肛拭样品中，检测到1株O139群霍乱弧菌（编号为BS-25）；2012年7月，华山医院宝山分院送检鉴定1株未知群的霍乱弧菌（编号为7933）。

1.4病例基本情况

BS-25株的患者为宝山区淞南街道居民，女。2012年 5月1日至崇明县参加喜宴聚餐，除此之外无其他聚餐活动和不洁饮食史，并将从酒席上带回的剩余油爆虾放入冰箱中冷藏，5月5日晚取出油爆虾加热后食用，5月6日发病。大便性状为黄色糊状便，无腹痛、无呕吐、无发热等其他症状。

7933株的患者为宝山区水产路某小区居民，女，入院做阑尾手术。2012年7月29日采集阑尾渗出液进行实验室病原学检测时检出，临床使用头孢类抗生素后炎症好转。

3讨论

3.1霍乱弧菌的鉴别

3.1.1菌落形态O139群霍乱弧菌在双洗平板上半透明、扁平、黑心不明显，与O1群霍乱弧菌黑心较明显不同。O77群疑似霍乱弧菌在双洗平板上半透明、扁平、黑心明显。O139群霍乱弧菌在弧菌显色培养基上中间略有凹陷、中间蓝色，边缘透明，O77群疑似霍乱弧菌在弧菌显色培养基上菌落微凸、中间蓝绿色，边缘透明，但不明显，菌落比较大。

3.1.2生化结果2例霍乱弧菌利用甘露糖、蔗糖、阿拉伯糖、淀粉结果都为“-、+、-、+”，氧化酶试验阳性。BS-25株山梨醇迟发酵，表明是流行株，有毒力，和毒力基因试验结果符合。7933株山梨醇快发酵，表明不是流行株。

3.1.3常规荧光定量PCR结果和毒力基因检测两者常规PCR检测霍乱弧菌核酸都为阳性，这与血清凝集试验结果符合，都属于霍乱弧菌属。O139群霍乱弧菌ctx、zot、ace、tcp 4种常见毒力基因的核酸检测都为阳性，与以上流行株结果相符合。有研究发现，霍乱流行时期的O139群霍乱弧菌感染者分离株检测的毒力相关基因为阳性，将毒力相关基因分型用于判断和区分O139群霍乱弧菌的流行株与非流行株也是可行的＼[5＼]。而O77群霍乱弧菌毒力基因检测都为阴性，表明无毒力，与非流行株的结果相符合。

3.1.4药敏试验结果BS-25株有多重耐药的现象，7933株对利福平中度敏感，提示这种抗菌药物有耐药的趋向，对其余的抗菌药物则均为敏感。

3.2加强监测，及时发现疫情

虽然非O1、O139群的霍乱弧菌通常不引起严重的腹泻，且未列入法定传染病，但是这类细菌在自然界中普遍存在，有时对人们的健康也造成了一定的危害，需要引起重视。而本株O139群霍乱弧菌的检出，说明我区仍然有霍乱发病及流行的潜在危险，而且我区地处长江入海口，海水和淡水交汇处，应做好各种水源中霍乱弧菌的监测。患者大多是通过被污染的食品而感染，因此，必须搞好城镇卫生，加强疫情监测。本次疫情发生后，我区疾病预防控制中心立即组织对全区医疗卫生机构进行了霍乱弧菌知识及检测的业务培训，并加强对医疗机构的日常指导和质控，及时掌握流行动向。

4参考文献

[1]罗朝成，谢一俊，张静.霍乱流行态势及我国霍乱防控中存在的问题＼[J＼].传染病信息，2008，21（3）：153-154.

[2]燕勇，罗建勇，朱心强，等.霍乱及霍乱弧菌检测技术研究进展＼[J＼].上海预防医学，2012，24（8）：459-462.

[3]Singh DV， Sree Renjini Isac，Colwell RR. Development of a hexaplex PCR assay for rapid detection of virulence and regulatory genes in vibrio cholerae and vibrio mimicus＼[J＼]. J Clin Microbiol，2002，40（11）：4321-4324.

[4]古文鹏，伏晓庆，杨建斌，等.2011年云南省中缅边境地区三起霍乱疫情菌株分子分型研究＼[J＼].中华预防医学杂志，2012，46（6）：573-574.

[5]詹銮峰，王晓萍，郭维植，等.霍乱弧菌毒力相关基因检测分析＼[J＼].中国卫生检验杂志，2008，18（9）：1727-1728.