蒙药冬青叶-7胶囊的镇咳祛痰抗炎药理作用及急性毒性实验研究

李英格 萨仁图雅 安 达 王 欢

(1.内蒙古民族大学附属医院，内蒙古 通辽 028000;2.内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028000)

蒙药冬青叶-7胶囊由冬青叶、北沙参等7味药组成的民间验方。该方具有清“巴达干”、热邪、化痰散结、平喘通络作用。临床上多年用于急、慢性气管炎，支气管炎，肺气肿，肺心病，哮喘，慢性咳嗽等症疗效较佳［1，2］。本实验对冬青叶-7胶囊进行了镇咳、祛痰、抗炎作用的研究，为该方剂的进一步开发提供实验依据。

1 实验材料

1.1 仪器与试剂:YP型电子天平，上海越平科学仪器有限公司;AR:1140型电子天平，奥豪斯国际贸易(上海)有限公司;UV-240型号紫外分光光度计(岛津);氨水、酚红、二甲苯市售。

1.2 动物:昆明种小鼠，18～22g，雌雄各半，购于吉林省长春市亿斯实验动物技术有限公司;批准号:SCXK(吉)-2011-0004。

1.3 药物:蒙药冬青叶-7胶囊，由内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂室提供，批准号:2012091601;七味冬青叶散，内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂室提供，批准号:20120809:桂龙咳喘宁胶囊，桂龙药业(安微)有限责任公司，批准号:Z20053135。

2 实验方

2.1 镇咳实验［3］:取84只小鼠，按体重随机分为空白组，阳性组，七味冬青叶散组，蒙药冬青叶-7胶囊低(0.225g/Kg)、中(0.45g/Kg)、高(0.9g/Kg)剂量等 6 组，每组 12 只。每组小鼠分别灌胃0.2ml/10g(体重)0.3%CMC-Na溶液，桂龙咳喘宁胶囊混悬液，七味冬青叶散混悬液，连续给药7d。末次给药1h后，将小鼠放入引喘仪内，以20%氨水喷雾10s并记录2min内咳嗽次数及首次咳嗽时间(潜伏期)，以小鼠腹肌收缩或缩胸，同时张大嘴为咳嗽指标，结果见表1。

2.2 酚红祛痰法［4］:按上述分组给药，末次给药后1h，各小鼠按0.2ml/10g(体重)腹腔注射3%酚红。注射酚红1h后，脱颈椎处死小鼠，剥离气管周围组织，剪下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管并放入盛有2ml生理盐水的试管中，再加入5%碳酸氢钠溶液0.1ml，离心0.5h，取上清液，用紫外可见分光光度计于波长546nm测吸光度，结果见表2。

2.3 二甲苯耳肿胀实验［5，6］:分组和给药法跟上述一致，末次给药0.5h后，用微量进样器取0.04ml二甲苯均匀涂在各小鼠右耳正反面，同样左耳涂等量的蒸馏水。致炎1h后，颈椎脱臼处死小鼠，用直径为6mm打孔器双耳同一部位等面积打下耳片并用电子天平称重(mg)，求左右耳片重量之差作为耳肿胀度。肿胀度(mg)=致炎耳重(mg)-对照耳重(mg)。结果见附表3。

2.4 急性毒性实验［7，8］

2.4.1 急性毒性预试验:将小鼠禁食12h后按体重随机分两组，给药组和空白组，每组6只，雌雄各半。给药组按0.3ml/10g(体重)灌胃蒙药冬青叶-7胶囊混悬液1次，空白组灌胃等体积0.3%CMC-Na溶液。根据小鼠死亡情况作适当调整，找出蒙药冬青叶-7胶囊100%死亡率(LD100值)、0%死亡率(LD0值)和相应的剂量组间距r值并进行半数致死量(LD50)的测定。按最大容积(0.3ml/10g)2次/1d，间隔6h，灌胃给药进行最大耐受量(MTD)和最大给药量的测定。

经蒙药冬青叶-7胶囊急性毒性预试验，全部小鼠存活，未测出LD50。所以进一步进行最大耐受量(MTD)和最大给药量的正式试验。

2.4.2 急性毒性正式实验:取40只小鼠，雌雄各半，按体重分两组，分别为给药组和空白组，每组20只。将小鼠禁食12h后，给药组按0.3ml/10g(体重)灌胃蒙药冬青叶-7胶囊混悬液1次，空白组灌胃等体积CMC-Na溶液。隔6h再同量给药1次。给药后4h结束禁食，连续14d观察小鼠毒性反应情况(如，出现毒性反应详细记录症状出现、加重、减轻或死亡的时间和出现反应的动物数量，计算动物死亡率)。第14d处死存活动物，解剖肉眼观察脏器情况，计算MTD值及人临床你用计量的倍数。

观察指标:小鼠的体重，外观，行为，分泌物，排泄物等详细记录毒性反应出现的起始时间、严重程度、持续时间和是否可逆等。如果有死亡的应及时进行大体解剖并肉眼观察，任何器官出现体积、颜色、质地等改变时，应记录并进行组织病理学检查。

2.5 数据处理:实验结果用SPSS21.0软件，计量资料以均数±标准差表示，组间差异用单因素方差分析，作F检验。

3 结果

3.1 对小鼠镇咳作用的影响:与空白对照组相比，蒙药冬青叶-7胶囊中、高剂量组和阳性对照组都明显减少咳嗽次数并显著延长咳嗽潜伏期(P＜0.01);蒙药冬青叶-7胶囊低组，原药组有减少咳嗽次数，延长咳嗽潜伏期(P＜0.05)。表明蒙药冬青叶-7胶囊对氨水诱导的小鼠咳嗽具有一定的镇咳作用，结果见表1。

表1 蒙药冬青叶-7胶囊的镇咳作用±S)

表1 蒙药冬青叶-7胶囊的镇咳作用±S)

注:与空白对照组相比:*P ＜ 0.05，＊＊ P ＜0.01;n=12

组别 引咳潜伏期(s) 咳嗽次数(次)空白对照组16.00 ±3.13 14.20 ±2.20冬青叶 -7 胶囊低 20.40 ±2.01* 10.70 ±1.57*冬青叶 -7 胶囊中 22.60 ±3.06* 9.30 ±1.16*冬青叶 -7 胶囊高 20.90 ±2.56* 7.50 ±1.58＊＊七味冬青叶散 20.50 ±1.72* 7.20 ±1.14*阳性对照组组 28.20 ±4.65* 6.70 ±0.95＊＊

3.2 对小鼠祛痰作用的影响:与空白对照组比较，蒙药冬青叶-7胶囊中、高剂量组，原药组和阳性对照组都明显祛痰作用(P＜0.01);蒙药冬青叶-7胶囊低剂量组有排痰作用(P＜0.05)。表明蒙药冬青叶-7胶囊能增加小鼠呼吸道分泌物，通过稀释痰液起到祛痰作用，结果见表2。

表2 蒙药冬青叶-7胶囊的祛痰作用±S)

表2 蒙药冬青叶-7胶囊的祛痰作用±S)

注:与空白对照组相比:*P ＜ 0.05，＊＊ P ＜0.01;★P ＜0.05，n=12

组别 吸光度空白对照组0.4695 ±0.1051冬青叶 -7胶囊低 0.7022±0.1409*冬青叶 -7 胶囊中 0.8921 ±0.0751★冬青叶 -7 胶囊高 0.9810 ±0.1301★七味冬青叶散 0.8331 ±0.1037★阳性对照组组 0.9951 ±0.5718★

3.3 对小鼠抗炎作用的影响:与空白对照组比较，蒙药冬青叶-7胶囊中、高剂量组，原药组和阳性对照组对耳肿胀都有明显抑制作用(P＜0.01);蒙药冬青叶-7胶囊低剂量组对耳肿胀有抑制作用(P＜0.05)。表明蒙药冬青叶-7胶囊能抑制小鼠耳肿胀而起到抗炎作用。结果见表3。

表3 蒙药冬青叶-7胶囊对二甲苯致小鼠耳肿胀影响±S)

表3 蒙药冬青叶-7胶囊对二甲苯致小鼠耳肿胀影响±S)

注:与空白对照组相比:＊＊P＜0.01;n=12

组别 肿胀度(mg)空白对照组3.49 ±0.17冬青叶 -7胶囊低 3.06±0.14＊＊冬青叶 -7胶囊中 2.70±0.19＊＊冬青叶 -7胶囊高 2.53±0.23＊＊七味冬青叶散 2.82 ±0.10＊＊阳性对照组组 2.46 ±0.26＊＊

3.4 急性毒性实验结果:蒙药冬青叶-7胶囊连续2次灌胃给予小鼠后，在给药即可出现短暂的活动减少，但给药2h后恢复正常。其余外观、饮食、饮水、一般行动、分泌物、排泄物连续观察14d均无异常。空白组小鼠灌胃等体积CMC-Na后，外观、饮食、饮水、一般行动、分泌物、排泄物均无异常，病理解剖未见脏器明显而由药物引起的病理变化。连续观察14d，两组无动物死亡。蒙药冬青叶-7胶囊灌胃给予小鼠，小鼠的最大耐受量(MTD)9g/Kg，相当于成人临床你用剂量的133.3倍。小鼠的最大耐受量倍数=(小鼠的耐受药量(g)/成人平均体重(g))/(小鼠的平均体重(g)成人每日用药量(g))

4 讨论

蒙药冬青叶-7胶囊为原来七味冬青叶散剂改为胶囊的新剂型，临床上多年用于急、慢性气管、支气管炎，慢性咳嗽，肺纤维化等症疗效较理想。但对其该方的镇咳、祛痰、抗炎作用研究至今尚未见相关报道。冬青叶是该方的主要配方，研究表明冬青叶的有效成分倍半萜类化合物，对小鼠浓氨水诱导的咳嗽有明显的镇咳作用;对小鼠酚红排泄试验证明，所含倍半萜和萜类化合物对组胺所致支气管痉挛有防治等作用［9］。丹参也是该方的成分之一，肌注丹参注射液对角叉菜致大鼠足跖部炎症有明显的抑制作用。甘草具有抗炎，镇咳，祛痰作用。从本试验研究表明蒙药冬青叶-7胶囊能明显延长氨水诱导的小鼠咳嗽潜伏期，降低咳嗽次数，提示该方具有明显的镇咳作用;同样剂量还可促进小鼠气管的酚红排泌量，增加小鼠气管痰液分泌量，提示该方具有明显祛痰作用;该方对二甲苯致小鼠耳肿胀也有明显的抑制作用，表明该方具有明显的抗炎作用。

［1］李英格.蒙药复方冬青叶胶囊治疗肺间质纤维化的临床疗效观察［J］.中国民族医药杂志，2008，(11):26

［2］李英格.蒙药复方冬青叶胶囊治疗慢性咳嗽240例疗效观察［J］.中国民族医药杂志，2010，7

［3］周延萌，张小敏，王一林，等.苦苣菜水提物的镇咳祛痰及抗炎作用研究［J］.时珍国医国药，2012，23(4):1027

［4］侯仙明，张凯，王亚利，等.肉桂镇咳祛痰及平喘作用的药效学研究［J］.时珍国医国药，2009，20(4):831

［5］李学坚，胡文姬，杜正彩，等.析因分析法研究槲皮素对芒果苷抗炎祛痰作用的影响［J］.时珍国医国药，2012，23(1):27，28

［6］赵协慧，袁明，马玉花.藏药茜草胶囊镇痛抗炎药效学研究［J］.时珍国医国药，2010，21(2):382

［7］李仪奎，金诺敏，王钦茂.中药药理实验方法学［M］.上海，上海科学技术出版社，2006

［8］谢元璋，孙蓉，张亚囡，等.养血生发胶囊对小鼠急性毒性实验研究［J］.中国药物警戒，2011，4:209

［9］国家中医药管理局.中华本草(蒙药卷)［M］.上海:上海科学出版社，2004，9:171