白细胞介素1A多态性与神经胶质瘤的相关性

岩 亮，舒 云

(西双版纳州人民医院 1.外四科；2.普通外科，云南 景洪666100)

白细胞介素1(interleukin-1，IL-1)是由多种细胞分泌的一种多功能细胞因子，颅内多种神经元、胶质细胞等均可产生IL-1。IL-1具有多种生物学效应，包括炎症反应、免疫调节和抗肿瘤特性。IL-1A作为IL-1家族成员之一，可通过激活抗肿瘤免疫、抑制肿瘤细胞生长，从而发挥抗肿瘤效应[1]。IL-1A基因存在两个功能性多态位点：-889C/T(rs1800587)和+4845G/T(Ala114Ser，rs17561)。目前，多项研究报道了IL-1A基因多态性与卵巢癌、鼻咽癌、前列腺癌、多发性骨髓瘤、胃癌、乳腺癌等肿瘤的相关性[2-7]。然而，其与神经胶质瘤的关系至今未见报道。本研究运用病例-对照研究探讨IL-1A -889C/T和+4845G/T多态性与神经胶质瘤的相关性，旨在为阐明神经胶质瘤的发病机制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象

神经胶质瘤组：来自于我院神经外科，共154例，其中，男性87例，女性67例，平均年龄44.9±15.0岁，中位年龄45岁。所有病例均经组织病理学确诊，根据1997年世界卫生组织(WHO)病理分级标准：Ⅰ-Ⅱ级84例，Ⅲ-Ⅳ级70例。样本采集前均未进行放化疗。正常对照组：来自于我院健康体检中心，共195例，其中，男性105例，女性90例，平均年龄43.7±12.6岁，中位年龄43岁，均为体检正常标本，并且无肿瘤家族史。神经胶质瘤组和正常对照组在性别和年龄上无差异。

1.2 基因组DNA提取和引物合成

采集入选研究对象外周静脉血2 ml，酚/氯仿法抽提基因组DNA。参照文献[8]设计-889C/T引物，上游:5’-GGGGGCTTCACTATGTTGCCCACACTGGACT AA-3’，下游:5’-GAAGGCATGGATTTTTACATATGACCTTCCATG-3’，扩增片段长度为300 bp。参照文献[9]设计+4845G/T引物，上游：5’-ATGGTTTTAGAAAT CATCAAGCCTAGGGCA-3’，下游:5’-AATGAAAG

GAGGGGAGGATGACAG AAATGT-3’，扩增片段长度为231 bp。引物由北京奥科生物技术有限公司合成。

1.3 基因分型

运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)方法进行基因分型。PCR反应体系为20 μl，含 PCR mix(北京百泰克生物公司)10.0 μl，上、下游引物(10 μM)各0.2 μl，基因组DNA 1.5 μl，用无菌去离子水补足至20 μl。PCR反应条件：94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，退火30 s(-889C/T:61℃；+4845G/T:54℃)，72 ℃延伸30 s，共35个循环；最终72 ℃延伸10 min。限制性内切酶酶切PCR扩增产物：酶切反应体系为10 μl，含PCR产物2 μl，限制性内切酶1U(NEB公司，-889C/T:Nco I；+4845G/T:Fnu4H I)，10×NEB buffer 1 μl，无菌去离子水补足至10 μl。混匀后，37℃酶切过夜。聚丙烯酰胺凝胶电泳，常规硝酸银染色，判型。

1.4 统计学方法

运用SPSS19.0软件统计分析数据。直接计数法计算基因型和等位基因频率，组间比较采用χ2检验，以优势比(odds ratio，OR)和95%可信区间(confidence interval，CI)表示神经胶质瘤的发病风险。检验水准α=0.05。

2 结果

IL-1A -889C/T位点检测到3种基因型：CC基因型：271和29 bp两条带；CT基因型：300、271和29 bp 三条带；TT基因型：300 bp一条带。IL-1A +4845位点亦检测到3种基因型：GG基因型：123、79和29 bp三条带；GT基因型：152、123、79和29 bp四条带；TT基因型：152和79 bp两条带。经检验，两位点各基因型在对照组和神经胶质瘤组中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)，说明两组入选人群具有群体代表性。

对照组和神经胶质瘤组IL-1A基因多态性比较见表1。IL-1A +4845G/T位点：GG和GT/TT基因型在对照组中的频率分别为86.7%和13.3%，在神经胶质瘤组中的频率分别为76.6%和23.4%，两组相比，差异具有统计学意义(GT/TT与GG相比：χ2=5.94，P=0.015)；G和T等位基因在对照组中的频率分别为93.1%和6.9%，在神经胶质瘤组中的频率分别为87.7%和12.3%，两组相比，差异有统计学意义(χ2=5.97，P=0.015)。未发现IL-1A -889C/T多态性频率分布在对照组和神经胶质瘤组之间存在显著差异。根据神经胶质瘤病理分级进行亚组分析，未发现IL-1A -889C/T和+4845G/T多态性与病理分级存在明显相关性(P>0.05)(见表2)。

表1 对照组和神经胶质瘤组IL-1A多态性比较

表2 IL-1A多态性与神经胶质瘤病理分级的关系

各组比较，P>0.05

3 讨论

神经胶质瘤的发病机制至今尚未完全阐明，有研究显示，炎症在其发生发展中发挥着至关重要的作用。IL-1作为由多种细胞分泌的小分子多肽，不仅参与炎症反应，而且具有调节免疫应答和细胞生长分化的特性，能够诱导神经胶质瘤细胞表达多种酶类和(或)多肽类物质，例如环氧化酶-2等，提高机体对肿瘤的免疫监视，通过影响肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和转移等恶性生物学行为而介导抗肿瘤免疫反应[1,10]。

IL-1家族包含IL-1α、IL-1β和白细胞介素受体拮抗剂(IL-1 receptor antagonist，IL-1Ra)。IL-1A基因位于人类第2号染色体长臂1区4带(2q14)，含7个外显子和6个内含子，编码IL-1α蛋白。该基因上存在2个功能性多态位点：位于基因启动子区可影响IL-1α蛋白表达的-889C/T多态性和位于第5外显子的+4845G/T多态性，G→T单核苷酸变异可引起氨基酸的改变(丙氨酸转变为丝氨酸)。目前，多项研究报道了IL-1A -889C/T多态性与肿瘤的相关性。Abazis-Stamboulieh等[5]报道IL-1A -889CT基因型显著增加了欧洲人群多发性骨髓瘤的发病风险。Snoussi等[7]报道携带IL-1A -889TT基因型的乳腺癌患者无病生存率和总体生存率明显降低。然而，有研究报道IL-1A -889C/T多态性与鼻咽癌、前列腺癌和胃癌的发病无关[3,4,6]。本研究亦未发现IL-1A -889C/T多态性与中国人群神经胶质瘤存在明显的相关性。造成以上研究结果不一致的原因可能是：其一、IL-1A 在不同类型肿瘤发病中的作用不尽相同；其二、种族差异。因此，有必要在多个种族中深入研究IL-1A -889C/T多态性与不同类型肿瘤的关联，以明确该位点在肿瘤发病中的作用。目前，关于IL-1A +4845G/T多态性与肿瘤关系的研究较少。本研究运用PCR-RFLP方法调查了IL-1A +4845G/T多态性在154例神经胶质瘤患者和195例正常对照组中的分布，结果显示携带GT/TT基因型和T等位基因的个体患神经胶质瘤的风险分别增加了1.98和1.89倍，提示IL-1A +4845G/T可能是中国人群神经胶质瘤的一个易感基因位点。

综上所述，本研究首次发现IL-1A +4845G/T多态性与中国人群神经胶质瘤的发病相关。然而，其与神经胶质瘤复发、预后等的关系以及详细的分子机制有待进一步研究。

作者简介：岩亮(1972-)，男(傣族)，云南景洪人，副主任医师，本科，主要研究方向：神经外科学。

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