甘蓝型油菜遗传图谱构建和重要农艺性状QTL 定位研究进展

周庆红，付东辉，黄英金

(江西农业大学 农学院/作物生理生态与遗传育种教育部重点实验室，江西 南昌 330045)

甘蓝型油菜(Brassic napus，2n=4X=38，AACC)是芸薹属中一个重要物种，起源于欧洲，被认为是5 000—10 000 年前产生的一个新物种，目前还未在自然界发现甘蓝型油菜的野生种或近缘野生种，因此也就不能通过系统发育分析确定其祖先，但许多研究表明，甘蓝型油菜的A 和C 基因组分别来自二倍体物种白菜和甘蓝，起源中心位于地中海地区、中东地区和小亚细亚半岛地区［1-3］。所以甘蓝型油菜极有可能是在中世纪时期相邻生长的白菜(B·rapa，2n=2X=20，AA)和甘蓝(B·oleracea，2n=2X=18，CC)经多次天然杂交和染色体自然加倍后形成的双二倍体。

自20 世纪80 年代RFLP 分子标记技术出现以来，使DNA 标记的研究立即成了一个非常活跃的领域。特别是随着RAPD［4］、SSR［5］、AFLP［6］、SCAR［7］等基于PCR 的DNA 标记技术的出现，这方面的研究更是日新月异。随着高通量测序技术的发展，SNP 标记成为新的研究热点，由于SNP 是在基因组上单个核苷酸的变异形成的遗传标记，一个单拷贝DNA 上存在的每个SNP 都可以用作分子标记，具有数量多、多态性丰富的特点，因此可以用来建立单倍体图和鉴别不同个体［8-9］。由于分子标记的开发都是基于被测物种个体基因组DNA 序列上的差异，应用分子标记可将控制生物性状的基因定位在遗传连锁图上，为进一步进行图位克隆以及分子标记辅助选择奠定基础。下面就分子标记技术在甘蓝型油菜遗传图谱构建和重要农艺性状QTL 定位应用进展综述如下。

1 甘蓝型油菜遗传图谱构建研究

分子遗传图谱是重要功能基因定位和图位克隆的基础，在甘蓝型油菜中，迄今已完成了多个独立的遗传图谱，分别来自30 多个作图群体(表1)。作图群体包括F2、RIL(Recombinant inbred line)、BC1(Backcross 1)、DH(Doubled haploid line)、IBL(Inbred backcross line)、NIL(Near isogenic line)等。标记的类型也由最初的RFLP(Restriction fragment length polymorphisms)标记发展到RAPD(Random amplified polymorphic DNA)、AFLP(Amplifid fragment length polymorphism)、SSR(Simple sequence repeat)、SRAP(sequence-related amplified polymorphism)、STS(Sequence tagged sites)、EST(Expressed sequence tags)、DarT(Diversity Arrays Technology)、IFLP(Intron fragment length polymorphism)、SNP(Single nucleotide polymorphism)等标记;后来又由单个群体独立的遗传图谱发展为多个群体的整合图谱。通过这些研究找到了与特定性状遗传变异相关的基因组区域，如种子产量及其产量相关性状、雄性不育性、自交不亲和性、油菜形态与发育特性、抗病虫性、开花时间、种子颜色、植物营养等方面。另外，通过遗传作图揭示了甘蓝型油菜的基因组在进化过程中所发生的结构变化和频繁的染色体重组事件。

Landry 等［10］年以Wester 和Topas 2 个油菜栽培品种为亲本杂交，以其F2代为作图群体，利用RFLP标记，最早构建了甘蓝型油菜遗传连锁图谱，19 条连锁群上共含有120 个标记位点，遗传距离总长为1 413 cm。Parkin 等［11通过人工合成的甘蓝型油菜与自然甘蓝型油菜杂交获得F2群体，同样利用RFLP标记构建了可明确区分A、C 基因组的甘蓝型油菜遗传图谱。将来自不同作图群体的甘蓝型油菜的不同遗传连锁图谱整合成统一的连锁图可得到高密度遗传连锁图，Lombard 等［12］通过整合前人发表的甘蓝型油菜遗传图谱，利用253 个标记对3 个DH 群体的数据进行了整合，构建了一张包含540 个标记、总长度为2 429 cm 的整合图谱。Udall 等［13］整合了4 个连锁图，他们发现每个连锁图平均为统一图谱提供了6 个位点/连锁群，研究表明采用这种方法将分子标记整合到连锁群上是有效的。

从标记类型看，芸薹属作物在图谱的构建上已经由单一标记向多标记类型方向发展。近年来SSR标记被广泛应用到油菜遗传图谱的构建中。Lowe 等［14］是最早大规模使用SSR 引物构建甘蓝型油菜图谱，他们将开发的398 对SSR 引物中的97 个标记成功的定位到一张原包含136 个RFLP 标记的甘蓝型油菜图谱上，19 条连锁群几乎被全部覆盖。Piquemal 等［15］以Lowe 等公开的SSR 标记为基础，搜集了911 对SSR 标记，利用由Westar 和中油821 杂交获得的DH 系作为作图群体，以356 对SSR 标记，构建了甘蓝型油菜的遗传连锁图，图谱总长达2 619 cm。Zhao 等［16］以构建的SG-DH 为作图群体，利用125个SSR 标记，构建了一张长度为1 196 cm 的甘蓝型油菜遗传图谱。后来他们又陆续用EST、SRAP、SCAR 等新型标记对该图谱进行加密［17］，使标记数达到481 个，图谱长度增至1 948.6 cm，标记间平均图距进一步缩小至4.05 cm。Radoev 等［18］利用甘蓝型油菜栽培品种“Express”和人工合成品系“R53”杂交得到DH 系为作图群体，构建了包含235 个SSR 标记和144 个AFLP 标记的遗传图谱，图谱总长达2 045 cm，该图谱用来对甘蓝型油菜产量杂种优势进行遗传分析，得出上位性和显性效应是产量杂种优势表达的决定因素。Cheng 等［19］利用163 对新设计的SSR 引物和164 对先前开发SSR 标记，建成了一张含有327 个多态性位点的高质量遗传连锁图谱。而随着自主测序和基因分型技术的发展，甘蓝型油菜高密度遗传图谱被成功构建，如Sun 等［20］利用13 351个SRAP 标记构建了长1 604.8 cm 的高密度遗传图谱，Raman 等［21］利用DarT 标记技术进一步构建了甘蓝型油菜DH 群体的一致性图谱。而在2012年甘蓝型油菜高通量SNP 芯片(60 K)被成功开发后，Liu 等［22］利用覆盖全基因组的9 164个SNP 标记对甘蓝型油菜重组自交系群体构建了高密度遗传图谱，图谱总长度为1 832.9 cm，使研究者能够从感兴趣的QTL 位点快速获知该位点的基因组序列，使基因图位克隆更为快捷和准确。

表1 甘蓝型油菜基因组作图研究Tab.1 Studies on genetic linkage maps of Brassica napus

遗传图谱是进行QTL 定位和比较作图研究的基础，还可为基因组测序提供拼接指导。随着分子生物学技术和分子数量遗传学的进一步发展，高密度遗传图谱的构建和低成本的PCR 分子标记技术的发展和应用，基于高密度分子连锁图谱和主要QTL 定位的分子标记育种技术将在甘蓝型油菜优质、高产、多抗育种中发挥重要的作用。

2 甘蓝型油菜重要农艺性状QTL 定位的研究进展

2.1 脂肪酸组成性状遗传及QTL 定位研究

不同脂肪酸组成的菜籽油用途不同，可食用的菜籽油来自于现代选育的双低油菜品种，即菜籽油中芥酸含量低于1%，菜饼中硫代葡萄糖甙含量低于30 μmol/g，还通常含有约60%的油酸，20%的亚油酸，10%的α-亚麻酸［53］。而传统的油菜品种虽然芥酸含量高(约50%)，但可作工业用润滑剂、防水剂等的生产原料。

甘蓝型油菜的芥酸含量受2 对隐性基因控制，决定芥酸含量变异的90%［54］，德国原产的饲料用甘蓝型春油菜品种Liho 是世界上首次也是唯一一次发现的低芥酸的自然突变体，但用此材料育种家已培育出一批低芥酸的油菜品种。通过分子生物学技术鉴定，已发现油菜中低芥酸性状是由脂肪酸延长酶1(FAE1)基因编码区的4 对碱基缺失形成的［55］，说明FAE1 基因控制着种子中芥酸合成。近年来，研究者们对油菜种子芥酸含量进行了相关的QTL 定位研究，Ecke 等［56］利用甘蓝型油菜DH 群体在A6 和C3 连锁群上检测到了2 个芥酸相关的QTL 位点，同时发现这2 个位点与含油量相关QTL 位点存在紧密连锁关系。刘雪平等［57］以低芥酸品种Quantum(黄花、低芥酸)与新创建的高芥酸油菜品系No12127-17(白花、高芥酸)为亲本建立的DH 群体为材料，对芥酸进行QTL 扫描，发现一个位于C3 连锁群上的主效QTL，解释了82%的芥酸表型变异。Qiu 等［35］在甘蓝型油菜TNDH 群体中A8 和C3 连锁群上探测到2 个与芥酸有关的主效QTL 位点，分别解释芥酸表型变异的45%和30%。张洁夫等［58］对甘蓝型油菜低芥酸品系APL01 与高芥酸品系M083 杂交组合的BC1F1群体进行分子标记检测，也在A8 和C3 连锁群上检测到了2 个芥酸QTL 位点，分别解释芥酸表型变异的16.74%和31.32%。Smooker 等［59］利用QDH 群体，通过与拟南芥比较作图的方法找到了控制芥酸含量的9 个QTL，其中2 个主效QTL 位点也是位于A8 和C3 连锁群上，同时发现该区域与标记BnaFAE1 位点一致，这些研究充分说明在甘蓝型油菜A8 和C3 连锁群上可能存在着控制芥酸含量的位置候选基因。

而可食用菜籽油除要求低芥酸外，还需要具有高油酸和低亚麻酸的特性，才能在高温烹调条件下保持较好的热稳定性。因此，油菜育种家将提高油菜中油酸含量(＞75%)、降低亚麻酸含量(＜3%)作为油菜脂肪酸改良的重要目标［53，60］。德国学者和加拿大学者们通过化学诱变得到了低亚麻酸的突变体，Falentin 等［61］研究发现高油酸性状受1～2 个编码脂肪酸脱氢酶FAD2 的主效基因控制，该脱氢酶负责油酸去饱和生成亚油酸，随后亚油酸在脱氢酶FAD3 的作用下去饱和生成亚麻酸，FAD3 同样受两对主效基因控制。

Tanhuanpää 等［62］在白菜型油菜F2代作图群体中检测到3 个与油酸含量有关的QTL 位点，解释的表型变异最大为85.8%，同时他们还将FAD2 基因标记定位在油酸相关QTL 位点上。Schierholt 等［63］利用2 个冬油菜高油酸突变系杂交F2群体作图，将控制油酸含量的QTL 位点定位在A5 连锁群上，并判定高油酸突变是FAD2 基因突变引起的，这在以后的Laga 等［64］和Hu 等［65］的研究中得到了证实。Zhao等［66］在德国油菜品种Sollux 和中国品种Gaoyou 杂交后代DH 群体中共检测到7 个控制油酸含量的QTL 位点，其中一个主效位点位于C8 染色体上。杨燕宇等［67］采用油酸含量差异显著的材料为亲本构建了F2作图群体，在A5 连锁群上检测到控制油酸含量的主效QTL 位点，解释的油酸含量表型变异的59.12%。王继变等［68］利用Sollux/Gaoyou 群体进行了油菜种子4 种主要脂肪酸含量与含油量之间的遗传相关研究，在C7 和A9 连锁群上共检测到20 个油酸相关QTL 位点，并发现通过标志辅助选择高含油量等位基因/QTL 位点可同步提高种子中的油酸含量。

油菜中亚油酸的含量主要受油酸、芥酸和廿碳烯酸含量的影响。Burns 等［69］利用2 个冬性的油菜品种Tapidor 和Victor 杂交得到的重组置换系为作图群体，对其脂肪酸组成和含油量进行QTL 定位，获得了5 个与亚油酸含量有关的QTL 位点，在10 个连锁群上共探测到13 个影响脂肪酸组成的QTL，其中主效亚油酸QTL 位点位于C4 和A8 连锁群上。Zhao 等［66］分别在7 个连锁群上检测到了7 个亚油酸QTL 位点，其中主效亚油酸QTL 位点位于A9 连锁群上，解释亚油酸表型变异为8%。Yan 等［70］利用甘蓝型油菜GH06 和P174 杂交获得的重组自交系为作图群体，对6 个脂肪酸组分(芥酸、棕榈酸、油酸、亚油酸、亚麻酸和二十烯酸)进行QTL 定位，在A8、A9 和C3 3 个连锁群上共探测到40 个QTL，其中控制亚油酸含量的QTL 位点主要分布在A8 和C3 染色体上。

Jourdren 等［71］以亚麻酸含量差异显著的2 个油菜品种为亲本杂交，在对F2分离群体的遗传分析时发现，亚麻酸含量主要受FAD3 基因控制，并在甘蓝型油菜A 和C 基因组上个监测到1 个主效QTL。Hu 等［65］从DH 作图群体中在A4、C4 连锁群上各检测一个控制亚麻酸含量的主效QTL。Zhao 等［66］在甘蓝型油菜C4 上也检测到一个关于亚麻酸的QTL，解释了28%的遗传变异率。同样地，杨盛强［72］以甘蓝型油菜为材料利用区间作图法在A4 和C4 连锁群上分别检测到了2 个和1 个亚麻酸含量QTL。而王继变等［68］在A1 连锁群上检测到1 个亚麻酸相关QTL 主效位点，在C7 和A9 连锁群上检测到5 个微效QTL 位点。

2.2 含油量相关QTL 定位研究

提高种子含油量一直是油菜育种工作者的主要育种目标之一，而种子含油量性状是由多基因控制的复杂的数量性状，存在基因型和环境间的互作［73］。随着甘蓝型油菜遗传图谱的构建，控制其含油量的QTL 位点也被不断鉴定出来，目前，前人用不同作图群体在甘蓝型油菜19 条连锁群上鉴定出多个含油量微效QTL［35，69-70，74-76］，Delourme 等［244］通过遗传图谱整合在多个作图群体中检测到了3 个相同的含油量QTL 位点，说明研究者可以通过图谱整合的方法来探测不同作图群体中的一致性QTL 位点。

Ecke 等［56］利用205 个标记对甘蓝型油菜DH 群体作图，并对该群体含油量QTL 进行了定位研究，结果在A6、A10 和C2 连锁群上探测到3 个控制含油量的QTL 位点，解释的含油量表型变异为51%，并且其中位于A8 和C3 连锁群上的QTL 与控制油菜种子芥酸含量的主效QTL 相重叠，说明两者存在紧密的连锁关系，因此Ecke 提出油菜芥酸含量可能对含油量具有决定作用。Burns 等［69］以Tapidor 和Victor 为亲本构建了重组置换系对甘蓝型油菜含油量进行QTL 定位，在7 个连锁群上各探测到1 个含油量QTL，但从解释的表型变异来看都属于微效基因位点。Qiu 等［35］以Tapidor 和Ningyou7 为亲本进行杂交构建了TNDH 群体，利用该群体和277 个标记构建了甘蓝型油菜的遗传图谱，在该遗传图谱上7个连锁群上也分别探测到1 个含油量微效QTL 位点。Delourme 等［75］利用305 个SSR 标记和甘蓝型油菜DH 群体构建其遗传连锁图谱，共检测到了14 个含油量有关的QTL。张洁夫等［58］在甘蓝型油菜C3连锁群上探测到1 个控制含油量的主效QTL 位点，在A1、A8 和A10 染色体上定位到4 个控制含油量的微效QTL 位点。Zhao 等［66］用欧洲油菜品种“Sollux”和中国高油份自交系“Gaoyou”杂交获得的DH 群体为材料，探测到了7 个含油量QTL 位点，分别位于7 个连锁群上。马珍珍等［77］以黄籽甘蓝型油菜GH06 和黑籽甘蓝型油菜P174 为亲本构建的重组自交系为作图群体，采用复合区间作图法共检测到8个含油量QTL，可解释表型变异的4.96%～21.83%。由此可以通过有性杂交将来源不同的多个品种中高含油量的基因位点聚合到一种材料，有望培育出超高含油量油菜新品种。

2.3 油菜开花期性状QTL 定位研究

开花性状作为油菜作物的重要农艺性状日益受到人们的重视。目前，甘蓝型油菜中许多控制开花期的QTL 位点已被鉴定出来。Ferreira 等［78］利用1 年生和2 年生甘蓝型油菜品种杂交，在F1的DH 群体中检测到3 个影响开花期的主效QTL，分别分布于A9、C2 及C6 连锁群上，其中位于A9 连锁群上的QTL 贡献率最大(28%)。Robert 等［79］利用来自拟南芥的开花基因CO 的探针在甘蓝型油菜中鉴定出4个同源位点，它们分别分布于A10 和C9 连锁群上。这些同源位点序列之间及与CO 序列之间均存在较高的同源性。赵坚义等［80］以中国的高油分油菜自交系“高油”和欧洲高含油量品种“Sollux”的F1产生的282 个株系组成的DH 群体为材料，对油菜3 个重要农艺性状(株高、开花期和成熟期)进行QTL 的联合定位分析，发现位于C4 和C9 连锁群上的2 个株高主效QTL 同时也是控制开花期和油分含量的基因位点，控制成熟期的8 个主效QTL 中有3 个同时也是控制开花期的位点，证实了开花期和成熟期高度正相关的遗传基础。Long 等［81］以对低温春化需求不同的2 个甘蓝型油菜为亲本构建了DH 和RCF2群体，共检测到42 个开花期QTL，其中过半的QTL 仅能在冬油菜种植环境检测到，并且检测到C6 连锁群上的QTL 簇对冬油菜开花早晚有决定性作用。Cai 等［40］发现甘蓝型油菜C8 连锁群上的一个QTL影响始花期和光周期敏感性，它们可以解释春油菜DH 群体开花期变异的最大部分。Mei 等［42］在油菜中发现的6 个QTLs 中有2 个对株高作用较大的QTLs 都位于与开花期有关的QTL 区域，认为这可能是开花期基因对株高的多效性。Würschum 等［82］的研究也得到了相同的结论。

2.4 甘蓝型油菜种子产量和产量相关性状的QTL 定位研究

高产一直是甘蓝型油菜育种的主要目标。由于产量性状是由微效多基因控制的数量性状，表现为连续变异，受环境的影响很大，单独依靠传统的育种方法和技术在现有基础上很难有大的突破。近年来，借助DNA 分子标记和QTL 作图，可将控制产量性状的基因位点确定在染色体具体的位置上。

近年来，有关油菜产量及其产量相关性状的QTL 定位研究一直比较活跃。对于油菜产量相关性状QTL 研究，根据收集和整理，近20 年来，至少有15 篇文献进行了油菜产量性状的QTL 定位研究。Butruille 等［32］在检验IBL 群体的作图效率时，对甘蓝型油菜的种子产量和千粒重进行了研究。结果表明，连锁群A7 和C6 之间的置换效应对该群体的产量具有较大的影响。并且发现了与种子产量有关的2 个RFLP 标记。另外发现C5 连锁群上的wg3c5 位点在杂交种和自交系群体中都可降低千粒重。易斌等［83］检测到与油菜产量及其相关性状有关的17 个QTL，其中包括与单株产量有关的3 个分别位于A3、A4 和C5 连锁群的QTL，共解释了26.6%的表型变异，得出一因多效或者相关的QTL 之间紧密连锁是性状相关的遗传基础。张书芬等［84］对油菜单株产量及其构成因素进行了QTL 定位和上位性分析，共检测到16 个QTL，分布在9 个连锁群上，其中A6 和C3 连锁群最多，均有3 个。该研究发现，产量构成性状存在主效QTL，共检测到26 对影响产量构成性状的上位性互作QTL，因此认为上位性是甘蓝型油菜产量性状杂种优势的重要遗传基础。Quijada 等［85］利用3 个作图群体经过“两年两点”的试验，对油菜产量、株高、千粒质量等性状作了研究，并在回交群体中检测到6 个来自于冬性油菜起增产效应的QTLs。Udall 等［13］利用2 个DH 群体在两个不同环境以及2 个测交群体在3 个或4 个环境中对油菜产量和其它农艺性状进行研究。通过检测，发现几个产量的QTL 与控制开花期和抗性的QTLs 定位在一起，并有2 个对杂交种产量起增产作用的QTLs 来自于不适合当地环境品种的等位基因，其中一个在多环境中都能检测到。Chen 等［37］利用强杂种优势的甘蓝型油菜杂交组合Quantum×No.2717-17 的DH群体和“永久F2”群体进行产量及其构成因子QTL 定位，共找到88 个QTL，其中至少检测到两次的QTL有18 个，包括单株产量5 个，单株总角果数为3 个，每穗实粒数为3 个，千粒重7 个。Li 等［36］利用构建的遗传图谱对12 个与产量相关的性状进行了定位研究，共获得了133 个QTL，多数QTL 汇集成簇，尤其在A2、A7 连锁群上获得了4 个在不同地点表现稳定的QTL，控制单株产量的10 个QTL 中有8 个与角果粒数、单株角果数和千粒重相关。Fan 等［45］分别以春油菜纯系和冬油菜纯系为亲本构建DH 和F2群体进行千粒重QTL 定位研究，在两个作图群体中均检测到两个主效QTL，表型贡献率为27.6%～37.9%。Shi 等［43］利用一个甘蓝型油菜DH 群体及其衍生的RC-F2群体在10 个环境中进行试验，定位了几百个产量性状QTL 及其与杂种优势有关的QTL，通过元分析整合不同实验中检测到的identified-QTL，得到了55 个种子产量consensus-QTL 和346 个产量关联性状的consensus-QTL。Wang 等［44］在常规品系04-1139 与高产多角果品系05-1054 构的F2代作图群体中共检测到12 个QTL，其中单株有效角果数4 个QTL，每果粒数获得5 个QTL，千粒重获得3 个QTL。Zhang 等［86］利用甘蓝型油菜每角粒数多的品系Y106 与每角粒数少的品系HZ396 为亲本构建了DH 群体，对该群体进行了每角粒数的遗传研究和19条连锁群每角粒数主效QTL 的定位，通过QTL 元分析，共检测到13 个consensus-QTL，与每角粒数相关的有3 个，与千粒重相关的有4 个，与角果长相关的有6 个。孙美玉等［87］对甘蓝型油菜主花序有效角果数QTL 进行了分析，发现在染色体A1、A5、C1 和C9 上的4 个QTL 可以在2 个不同的试验中重复检测到，另外还得到了16 个QTL 区间内的连锁标记。

2.5 利用关联分析定位甘蓝型油菜相关性状QTL

在利用双亲作图群体的基础让，近年来研究人员又提出了关联群体作图方法，就是以长期自然和人工选择过程中所积累的基因(位点)间连锁不平衡为基础，将目标性状多样性与基因(或标记)位点的多态性结合起来进行分析，从而鉴定出与表型多样性显著相关的基因位点或标记位点［88］。油菜的关联分析研究虽然起步较晚，但这方面的研究正在不断开展，Zhao 等［89］采用AFLP 技术对油菜自然群体中植酸和磷酸盐水平及其它发育性状进行关联分析，得到27 个达到显著水平的基因位点，其中有6 个位点与双亲群体定位的QTL 位点相吻合。Zou 等［90］利用SSR 标记进行含油量性状关联分析并与双亲群体的QTL 定位信息进行了整合。Honsdorf 等［91］在甘蓝型油菜品质性状关联分析方面做了富有成效的工作，他们对95 个甘蓝型油菜材料进行了形态和品质性状关联分析，检测到每个性状的QTL 数目为1～22 个，每个性状解释的表型变异方差为15%～53%。在甘蓝型油菜种子硫甙含量性状的关联分析中，检测到4 个与吲哚类、脂肪族类和芳香族类硫甙生物代谢有关的位点，并且这些位点与种子硫甙含量的QTL 相吻合。Jestin 等［92］对128 个甘蓝型油菜品系进行了抗黑胫病关联分析，并发现了新的抗黑胫病QTL 和基因变异位点。孙中永等［93］通过对14 个油脂形成相关候选基因标记与81 份核心种质两年度的含油量数据进行关联分析，发现与4 个QTL 连锁的6 个拟南芥油脂相关同源基因可能参与了油菜种子油分累积。

3 展望

目前，测序技术的快速发展促使研究人员开发出更为有效地分子标记，从而加速了甘蓝型油菜高密度遗传图谱的构建和重要农艺性状QTL 定位的研究，利用分子标记和遗传图谱信息可以帮助研究人员深入分析甘蓝型油菜的农艺性状，了解控制其复杂数量性状的基因及基因调控网络、基因与环境互作的效应，从而推动油菜分子标记辅助选择育种。现在利用高通量测序和基因芯片技术开发SNP 标记对甘蓝型油菜自然群体和双亲群体分别作图，在多个环境下进行表型测定，开展标记与性状间的关联分析，可以检测多样性种质资源中存在的所有QTL，使育种家能够从核心资源中寻找最优异的等位基因。另外，2011 年甘蓝型油菜的亲本之一白菜基因组测序已经完成［94］，另一个亲本物种甘蓝的基因组序列也可在芸薹属数据库中查询，相信在不久后甘蓝型油菜基因组序列也将陆续释放，分离克隆基因变得相对容易，现在最重要的是挖掘尽可能多的优良等位变异，找到具有增效的等位基因，以便在分子育种中有目的地聚合或转移，从而更加有效地开展甘蓝型油菜育种工作。

［1］Gómez-Campo C，Prakash S.Origin and domestication［M］.Biology of Brassica coenospecies，1999，:33-58.

［2］Song K M，Osborn T C，Williams P H.Brassica taxonomy based on nuclear restriction fragment length polymorphisms(RFLPs)［J］.Theoretical and Applied Genetics，1988，75(5):784-794.

［3］Warwick S I，Black L D.Molecular relationships in subtribe Brassicinae(Cruciferae，tribe Brassiceae)［J］.Canadian Journal of Botany，1993，71(7):906-918.

［4］Williams J G K，Kubelik A R，Livak K J，et al.DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers［J］.Nucleic Acids Research，1990，18(22):6531-6535.

［5］Akkaya M S，Bhagwat A A，Cregan P B.Length polymorphisms of simple sequence repeat DNA in soybean［J］.Genetics，1992，132(4):1131-1139.

［6］Vos P，Hogers R，Bleeker M，et al.AFLP:a new technique for DNA fingerprinting［J］.Nucleic Acids Research，1995，23(21):4407-4414.

［7］Li G，Quiros C F.Sequence-related amplified polymorphism(SRAP)，a new marker system based on a simple PCR reaction:its application to mapping and gene tagging in Brassica［J］.Theoretical and Applied Genetics，2001，103(2/3):455-461.

［8］Rafalski A.Applications of single nucleotide polymorphisms in crop genetics［J］.Current Opinion in Olant Biology，2002，5(2):94-100.

［9］McCarthy M I，Abecasis G R，Cardon L R，et al.Genome-wide association studies for complex traits:consensus，uncertainty and challenges［J］.Nature Reviews Genetics，2008，9(5):356-369.

［10］Landry B S，Hubert N，Etoh T，et al.A genetic map for Brassica napus based on restriction fragment length polymorphisms detected with expressed DNA sequences［J］.Genome，1991，34(4):543-552.

［11］Parkin I A P，Sharpe A G，Keith D J，et al.Identification of the A and C genomes of amphidiploid Brassica napus(oilseed rape)［J］.Genome，1995，38(6):1122-1131.

［12］Lombard V，Delourme R.A consensus linkage map for rapeseed(Brassica napus L.):construction and integration of three individual maps from DH populations［J］.Theoretical and Applied Genetics，2001，103(4):491-507.

［13］Udall J A，Quijada P A，Lambert B，et al.Quantitative trait analysis of seed yield and other complex traits in hybrid spring rapeseed(Brassica napus L.):2.Identification of alleles from unadapted germplasm［J］.Theoretical and Applied Genetics，2006，113(4):597-609.

［14］Lowe A J，Moule C，Trick M，et al.Efficient large-scale development of microsatellites for marker and mapping applications in Brassica crop species［J］.Theoretical and Applied Genetics，2004，108(6):1103-1112.

［15］Piquemal J，Cinquin E，Couton F，et al.Construction of an oilseed rape(Brassica napus L.)genetic map with SSR markers［J］.Theoretical and Applied Genetics，2005，111(8):1514-1523.

［16］Zhao J Y，Becker H C，Ding H D，et al.QTL of three agronomically important traits and their interactions with environment in a European×Chinese rapeseed population［J］.Acta Genetica Sinica，2005，32(9):969-978.

［17］Zhao J，Huang J，Chen F，et al.Molecular mapping of Arabidopsis thaliana lipid-related orthologous genes in Brassica napus［J］.Theoretical and Applied Genetics，2012，124(2):407-421.

［18］Radoev M，Becker H C，Ecke W.Genetic analysis of heterosis for yield and yield components in rapeseed(Brassica napus L.)by quantitative trait locus mapping［J］.Genetics，2008，179(3):1547-1558.

［19］Cheng X，Xu J，Xia S，et al.Development and genetic mapping of microsatellite markers from genome survey sequences in Brassica napus［J］.Theoretical and applied genetics，2009，118(6):1121-1131.

［20］Sun Z，Wang Z，Tu J，et al.An ultradense genetic recombination map for Brassica napus，consisting of 13551 SRAP markers［J］.Theoretical and Applied Genetics，2007，114(8):1305-1317.

［21］Raman H，Raman R，Nelson M N，et al.Diversity array technology markers:genetic diversity analyses and linkage map construction in rapeseed(Brassica napus L.)［J］.DNA Research，2012，19(1):51-65.

［22］Liu L，Qu C，Wittkop B，et al.A high-density SNP map for accurate mapping of seed fibre QTL in Brassica napus L.［J］.PloS one，2013，8(12):e83052.

［23］Ferreira M，Williams P，Osborn T.RFLP mapping of Brassica napus using doubled haploid lines［J］.Theoretical and Applied Genetics 1994，89(5):615-621.

［24］Uzunova M，Ecke W，Weissleder K，et al.Mapping the genome of rapeseed(Brassica napus L.).I.Construction of an RFLP linkage map and localization of QTLs for seed glucosinolate content［J］.Theoretical and Applied Genetics，1995，90(2):194-204.

［25］Sharpe A G，Parkin I A P，Keith D J，et al.Frequent nonreciprocal translocations in the amphidiploid genome of oilseed rape(Brassica napus)［J］.Genome，1995，38(6):1112-1121.

［26］Cloutier S，Cappadocia M，Landry B S.Study of microspore-culture responsiveness in oilseed rape(Brassica napus L.)by comparative mapping of a F2population and two microspore-derived populations［J］.Theoretical and Applied Genetics，1995，91(6/7):841-847.

［27］Foisset N，Delourme R，Barret P，et al.Molecular-mapping analysis in Brassica napus using isozyme，RAPD and RFLP markers on a doubled-haploid progeny［J］.Theoretical and Applied Genetics，1996，93(7):1017-1025.

［28］Howell P M，Lydiate D J，Marshall D F.Towards developing intervarietal substitution lines in Brassica napus using markerassisted selection［J］.Genome，1996，39(2):348-358.

［29］Cheung W Y，Champagne G，Hubert N，et al.Comparison of the genetic maps of Brassica napus and Brassica oleracea［J］.Theoretical and Applied Genetics，1997，94(5):569-582.

［30］Kelly A L，Sharpe A G，Nixon J H，et al.Indistinguishable patterns of recombination resulting from male and female meioses in Brassica napus(oilseed rape)［J］.Genome，1997，40(1):49-56.

［31］Pilet M L，Delourme R，Foisset N，et al.Identification of loci contributing to quantitative field resistance to blackleg disease，causal agent Leptosphaeria maculans(Desm.)Ces.et de Not.，in winter rapeseed(Brassica napus L.)［J］.Theoretical and Applied Genetics，1998，96(1):23-30.

［32］Butruille D V，Guries R P，Osborn T C.Linkage analysis of molecular markers and quantitative trait loci in populations of inbred backcross lines of Brassica napus L［J］.Genetics，1999，153(2):949-964.

［33］Udall J A，Quijada P A，Osborn T C.Detection of chromosomal rearrangements derived from homeologous recombination in four mapping populations of Brassica napus L［J］.Genetics，2005，169(2):967-979.

［34］Zhao J，Becker H C，Zhang D，et al.Conditional QTL mapping of oil content in rapeseed with respect to protein content and traits related to plant development and grain yield［J］.Theoretical and Applied Genetics，2006，113(1):33-38.

［35］Qiu D，Morgan C，Shi J，et al.A comparative linkage map of oilseed rape and its use for QTL analysis of seed oil and erucic acid content［J］.Theoretical and Applied Genetics，2006，114(1):67-80.

［36］Li Y，Shen J，Wang T，et al.QTL analysis of yield-related traits and their association with functional markers in Brassica napus L［J］.Crop and Pasture Science，2007，58(8):759-766.

［37］Chen W，Zhang Y，Liu X，et al.Detection of QTL for six yield-related traits in oilseed rape(Brassica napus)using DH and immortalized F2 populations［J］.Theoretical and Applied Genetics，2007，115(6):849-858.

［38］Rygulla W，Snowdon R J，Friedt W，et al.Identification of quantitative trait loci for resistance against Verticillium longisporum in oilseed rape(Brassica napus)［J］.Phytopathology，2008，98(2):215-221.

［39］Amar S，Ecke W，Becker H C，et al.QTL for phytosterol and sinapate ester content in Brassica napus L.collocate with the two erucic acid genes［J］.Theoretical and Applied Genetics，2008，116(8):1051-1061.

［40］Cai C C，Tu J X，Fu T D，et al.The genetic basis of flowering time and photoperiod sensitivity in rapeseed Brassica napus L.［J］.Russian Journal of Genetics，2008，44(3):326-333.

［41］Feng F，Liu P，Hong D，et al.A major QTL associated with preharvest sprouting in rapeseed(Brassica napus L.)［J］.Euphytica，2009，169(1):57-68.

［42］Mei D S，Wang H Z，Hu Q，et al.QTL analysis on plant height and flowering time in Brassica napus［J］.Plant breeding，2009，128(5):458-465.

［43］Shi J，Li R，Qiu D，et al.Unraveling the complex trait of crop yield with quantitative trait loci mapping in Brassica napus［J］.Genetics，2009，182(3):851-861.

［44］Wang F，Guan C Y.Molecular mapping and identification of quantitative trait loci for yield components in rapeseed(Brasscia napus L.)［J］.Hereditas，2010，32(3):271-277.

［45］Fan C，Cai G，Qin J，et al.Mapping of quantitative trait loci and development of allele-specific markers for seed weight in Brassica napus［J］.Theoretical and Applied Genetics，2010，121(7):1289-1301.

［46］Zhang L，Yang G，Liu P，et al.Genetic and correlation analysis of silique-traits in Brassica napus L.by quantitative trait locus mapping［J］.Theoretical and Applied Genetics，2011，122(1):21-31.

［47］Ghanbarnia K，Lydiate D J，Rimmer S R，et al.Genetic mapping of the Leptosphaeria maculans avirulence gene corresponding to the LepR1 resistance gene of Brassica napus［J］.Theoretical and Applied Genetics，2012，124(3):505-513.

［48］Raman R，Taylor B，Marcroft S，et al.Molecular mapping of qualitative and quantitative loci for resistance to Leptosphaeria maculans causing blackleg disease in canola(Brassica napus L.)［J］.Theoretical and Applied Genetics，2012，125(2):405-418.

［49］Sun M，Hua W，Liu J，et al.Design of new genome-and gene-sourced primers and identification of QTL for seed oil content in a specially high-oil Brassica napus cultivar［J］.PLoS one，2012，7(10):e47037.

［50］Cai G，Yang Q，Yang Q，et al.Identification of candidate genes of QTLs for seed weight in Brassica napus through comparative mapping among Arabidopsis and Brassica species［J］.BMC genetics，2012，13(1):105-121.

［51］Wang X，Wang H，Long Y，et al.Identification of QTLs Associated with Oil Content in a High-Oil Brassica napus Cultivar and Construction of a High-Density Consensus Map for QTLs Comparison in B.napus［J］.PloS one，2013，8(12):e80569.

［52］Raman H，Raman R，Eckermann P，et al.Genetic and physical mapping of flowering time loci in canola(Brassica napus L.)［J］.Theoretical and Applied Genetics，2013，126(1):119-132.

［53］Wittkop B，Snowdon R J，Friedt W.Status and perspectives of breeding for enhanced yield and quality of oilseed crops for Europe［J］.Euphytica，2009，170(1/2):131-140.

［54］Harvey B L，Downey R K.The inheritance of erucic acid content in rapeseed(Brassica napus)［J］.Canadian Journal of Plant Science，1964，44(1):104-111.

［55］Wu G，Wu Y，Xiao L，et al.Zero erucic acid trait of rapeseed(Brassica napus L.)results from a deletion of four base pairs in the fatty acid elongase 1 gene［J］.Theoretical and Applied Genetics，2008，116(4):491-499.

［56］Ecke W，Uzunova M，Weissleder K.Mapping the genome of rapeseed(Brassica napus L.).II.Localization of genes controlling erucic acid synthesis and seed oil content［J］.Theoretical and Applied Genetics，1995，91(6/7):972-977.

［57］刘雪平，涂金星，刘志文，等.甘蓝型油菜遗传图谱的构建及芥酸含量的QTL 分析［J］.作物学报，2005，31(3):275-282.

［58］张洁夫，戚存扣，浦惠明，等.甘蓝型油菜芥酸含量的遗传与QTL 定位［J］.江苏农业学报，2008，24(1):22-28.

［59］Smooker A M，Wells R，Morgan C，et al.The identification and mapping of candidate genes and QTL involved in the fatty acid desaturation pathway in Brassica napus［J］.Theoretical and Applied Genetics，2011，122(6):1075-1090.

［60］Scarth R，Tang J.Modification of oil using conventional and transgenic approaches［J］.Crop science，2006，46(3):1225-1236.

［61］Falentin C，Brégeon M，Lucas M O，et al.Identification of fad2 mutations and development of allele-specific markers for high oleic acid content in rapeseed(Brassica napus L.)［C］//Proceedings of the twelth International Rapeseed Conference，Wuhan，China，2007:26-30.

［62］Tanhuanpää P，Vilkki J，Vihinen M.Mapping and cloning of FAD2 gene to develop allele-specific PCR for oleic acid in spring turnip rape(Brassica rapa ssp.oleifera)［J］.Molecular Breeding，1998，4(6):543-550.

［63］Schierholt A，Becker H C，Ecke W.Mapping a high oleic acid mutation in winter oilseed rape(Brassica napus L.)［J］.Theoretical and Applied Genetics，2000，101(5/6):897-901.

［64］Laga B，Seurinck J，Verhoye T，et al.Molecular breeding for high oleic and low linolenic fatty acid composition in Brassica napus［J］.Pflanzenschutz-Nachrichten Bayer，2004，57(1):87-92.

［65］Hu X，Sullivan-Gilbert M，Gupta M，et al.Mapping of the loci controlling oleic and linolenic acid contents and development of fad2 and fad3 allele-specific markers in canola(Brassica napus L.)［J］.Theoretical and Applied Genetics，2006，113(3):497-507.

［66］Zhao J，Dimov Z，Becker H C，et al.Mapping QTL controlling fatty acid composition in a doubled haploid rapeseed population segregating for oil content［J］.Molecular Breeding，2008，21(1):115-125.

［67］杨燕宇，杨盛强，陈哲红，等.无芥酸甘蓝型油菜十八碳不饱和脂肪酸含量的QTL 定位［J］.作物学报，2011，37(8):1342-1350.

［68］王继变，陈洪成，陈玉波，等.通过条件QTL 定位分析油菜不同脂肪酸组分对含油量性状的影响［J］.浙江大学学报:农业与生命科学版，2013，39(5):504-512.

［69］Burns M J，Barnes S R，Bowman J G，et al.QTL analysis of an intervarietal set of substitution lines in Brassica napus:(i)Seed oil content and fatty acid composition［J］.Heredity，2003，90(1):39-48.

［70］Yan X Y，Li J N，Fu F Y，et al.Co-location of seed oil content，seed hull content and seed coat color QTL in three different environments in Brassica napus L［J］.Euphytica，2009，170(3):355-364.

［71］Jourdren C，Barret P，Brunel D，et al.Specific molecular marker of the genes controlling linolenic acid content in rapeseed［J］.Theoretical and Applied Genetics，1996，93(4):512-518.

［72］杨盛强.甘蓝型油菜种子亚油酸含量和亚麻酸含量的QTL 定位［D］.长沙:湖南农业大学，2010.

［73］Hom N H，Girke A，Millers C.Pollen genotype effects on seed quality and selection of single seeds by near-infrared reflectance spectroscopy(NIRS)in winter oilseed rape［J］.Vort Pflanzenzucht，2004，64:95-97.

［74］Zhao J，Becker H C，Zhang D，et al.Oil content in a European×Chinese rapeseed population［J］.Crop Science，2005，45(1):51-59.

［75］Delourme R，Falentin C，Huteau V，et al.Genetic control of oil content in oilseed rape(Brassica napus L.)［J］.Theoretical and Applied Genetics，2006，113(7):1331-1345.

［76］Chen G，Geng J，Rahman M，et al.Identification of QTL for oil content，seed yield，and flowering time in oilseed rape(Brassica napus)［J］.Euphytica，2010，175(2):161-174.

［77］马珍珍，李加纳，Benjamin WITTKOP，等.甘蓝型油菜籽粒含油量，蛋白质，纤维素及半纤维素含量QTL 分析［J］.作物学报，2013，39(7):1214-1222.

［78］Ferreira M E，Satagopan J，Yandell B S，et al.Mapping loci controlling vernalization requirement and flowering time in Brassica napus［J］.Theoretical and Applied Genetics，1995，90(5):727-732.

［79］Robert L S，Robson F，Sharpe A，et al.Conserved structure and function of the Arabidopsis flowering time gene CONSTANS in Brassica napus［J］.Plant Molecular Biology，1998，37(5):763-772.

［80］赵坚义，丁厚栋，张尧锋，等.应用中国和欧洲油菜建立的双二倍体群体对3 个重要农艺性状的QTL 定位以及与环境的互作分析［J］.遗传学报，2006，32(9):969-978.

［81］Long Y，Shi J，Qiu D，et al.Flowering time quantitative trait loci analysis of oilseed Brassica in multiple environments and genomewide alignment with Arabidopsis［J］.Genetics，2007，177(4):2433-2444.

［82］Würschum T，Liu W，Maurer H P，et al.Dissecting the genetic architecture of agronomic traits in multiple segregating populations in rapeseed(Brassica napus L.)［J］.Theoretical and Applied Genetics，2012，124(1):153-161.

［83］易斌，陈伟，马朝芝，等.甘蓝型油菜产量及相关性状的QTL 分析［J］.作物学报，2006，32(5):676-682.

［84］张书芬，傅廷栋，朱家成，等.甘蓝型油菜产量及其构成因素的QTL 定位与分析［J］.作物学报，2006，32(8):1135-1142.

［85］Quijada P A，Udall J A，Lambert B，et al.Quantitative trait analysis of seed yield and other complex traits in hybrid spring rapeseed(Brassica napus L.):1.Identification of genomic regions from winter germplasm［J］.Theoretical and applied genetics，2006，113(3):549-561.

［86］Zhang L，Li S，Chen L，et al.Identification and mapping of a major dominant quantitative trait locus controlling seeds per silique as a single Mendelian factor in Brassica napus L［J］.Theoretical and Applied Genetics，2012，125(4):695-705.

［87］孙美玉，华玮，刘静，等.甘蓝型油菜主花序有效角果数QTL 定位［J］.中国油料作物学报，2013，35(1):1-8.

［88］Flint-Garcia S A，Thornsberry J M，IV B.Structure of linkage disequilibrium in plants［J］.Annual Review of Plant Biology，2003，54(1):357-374.

［89］Zhao J，Paulo M J，Jamar D，et al.Association mapping of leaf traits，flowering time，and phytate content in Brassica rapa［J］.Genome，2007，50(10):963-973.

［90］Zou J，Jiang C，Cao Z，et al.Association mapping of seed oil content in Brassica napus and comparison with quantitative trait loci identified from linkage mapping［J］.Genome，2010，53(11):908-916.

［91］Honsdorf N，Becker H C，Ecke W.Association mapping for phenological，morphological，and quality traits in canola quality winter rapeseed(Brassica napus L.)［J］.Genome，2010，53(11):899-907.

［92］Jestin C，Lodé M，Vallée P，et al.Association mapping of quantitative resistance for Leptosphaeria maculans in oilseed rape(Brassica napus L.)［J］.Molecular Breeding，2011，27(3):271-287.

［93］孙中永，程爽，王继变，等.油菜含油量性状QTL 关联分析及有利等位基因在品种中的构成分析［J］.中国农业科学，2012，45(19):3921-3931.

［94］Wang X，Wang H，Wang J，et al.The genome of the mesopolyploid crop species Brassica rapa［J］.Nature Genetics，2011，43(10):1035-1039.