中药复方配伍酪蛋白水解物对其降压作用的影响

赵莹翟明叶小玲

（嘉应学院医学院药学系，梅州514030）

中药复方配伍酪蛋白水解物对其降压作用的影响

赵莹翟明叶小玲

（嘉应学院医学院药学系，梅州514030）

目的考察中药复方(CHines herbal compound，CHC)配伍酪蛋白水解物（Casein hydrolysate，CH）后对复方降血压作用的影响o方法1）采用小鼠最大耐受量考察中药复方-酪蛋白混合物（CHC-CH）的急性毒性o2）S D大鼠分为空白对照组和正常给药组，分别给予蒸馏水（10m l/kg）和CHC-CH（0.67g/kg，0.0.033g/kg）；原发性高血压大鼠(S H R)分为模型组，牛黄降压胶囊组（0.288g/kg），低、中、高剂量CH C与CH配伍组（低剂量CHC-CH分别为0.33和0.016g/kg、中剂量CHC-CH分别为0.67和0.033g/kg，高剂量CHC-CH分别为1.33和0.067g/kg）和CH C组（0.033g/kg），每天灌胃给药1次，连续给药4周，于第1、2、4周及停药后1周记录各组大鼠收缩压、舒张压和心率，动物处理后测定血清一氧化氮（NO）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、内皮素-1（ET-1）含量o结果1）CH-CH C的最大给药剂量为96g生药/kg合并CH 5.6g/kg，并未见引起小鼠明显急性毒性反应o2）与高血压模型对照组比较，CHC-CH组和CH C组S H R大鼠的收缩压和舒张压、NO、AngⅡ、ET-1含量等均具有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)，CH-CH C降血压作用显著大于CH C组(P＜0.05)，各药物组对大鼠心率影响均无显著差异o结论该中药复方与酪蛋白水解物配伍后未见具有明显急性毒性o中药复方具有显著的降血压作用，配伍酪蛋白水解物可以加强其降压作用，两者对正常动物血压无影响o

中药复方；酪蛋白水解物；降血压；动物实验；大鼠

高血压疾病是一个严重危害人类健康的常见心血管疾病，也是全球范围内的重大公共卫生问题之一［1］o发达国家发病率达20%以上，我国现有高血压患者近2亿，目前临床主要应用合成降压药物如利尿剂、β受体阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)、血管紧张素受体阻滞剂(ARB)、钙拮抗剂(CCB)及α受体阻滞剂等，大多存在较大副作用［2-4］o因此源于食品的降血压肽受到越来越多的关注，研究发现酪蛋白水解物(casein hydrolysate，CH)具有显著降血压作用，长期食用可显著降低高血压和心血管疾病的发生率［5，6］o进一步的研究表明CH可抑制血管紧张素转化酶(ACE)的活性，使血管紧张素Ⅱ的生成和激肽的破坏均减少，使血压下降，达到一定治疗高血压的效果［7，8］o然而高血压是多因素、多环节、多阶段和个体差异较大的疾病，发病机制复杂o为实现多途径多靶点协同降血压的效果，本实验拟通过复方中药配伍CH的方式，考察配伍酪蛋白水解物对中药复方降压作用的影响o以期为充分利用酪蛋白水解物提供实验数据，为寻找安全的多靶点降压药物提供参考o

1 材料与方法

1.1 动物SD大鼠，雄性，体重180～220g，KM小鼠，雌雄各半性，体重18～22g，由广东省医学实验动物中心提供（合格证号：44007200017836）；原发性高血压大鼠(SHR)，雄性，10～12周龄，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供(合格证号：11400700087313)o

1.2 药物及试剂酪蛋白水解物(CH)由无限极（中国）有限公司提供（批号：20140820）；天麻，杜仲，何首乌，白芷饮片均购自四川新荷花中药饮片股份有限公司；牛黄降压胶囊（百善唐威（沧州）药业有限公司，批号C04100）o大鼠内皮素-1（ET-1）酶联检测试剂盒（上海西塘生物科技有限公司产品，批号：1503261）；大鼠血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）酶联检测试剂盒（上海西塘生物科技有限公司产品，批号：1503252）；一氧化碳（NO）测试盒（南京建成生物工程研究所提供，批号：20150414）o

1.3 仪器JJ3000动物电子秤，G&G公司产品；BS224S电子天平，德国SARTORIUS产品；CODA多通道无创测压系统，美国Kent公司产品；Thermo Varioskan光栅型多功能微孔板读数仪，美国赛默飞世尔公司产品o

1.4 中药复方及样品制备按相同比例称取天麻、杜仲、何首乌、和白芷各200g，分别加12倍量水煎煮1.5h和10倍量水煎煮1h，滤过合并滤液，减压浓缩至所需浓度oCH使用时按剂量要求加入中药浓缩液，加热溶解，搅拌均匀o牛黄降压胶囊使用时以蒸馏水配制成所需浓度o

1.5 急性毒性实验取KM小鼠，所有动物适应性饲养5d后开展实验，分为正常组、CH-CHC组和CHC组，每组20只动物，禁食12小时后给药，按最大给药体积灌胃小鼠，剂量为96g生药/kg合并CH 4.8g/kg，中药组未加CH，每天灌胃2次，间隔6小时，其中正常组给予等量蒸馏水o

1.6 动物分组与给药SD大鼠分为正常对照组和正常给药组，分别给予蒸馏水(10ml/kg)和CHC-CH (CHC 0.67g/kg，CH 0.033g/kg)的药物混合液；SHR大鼠按血压及体重随机分为模型对照组、牛黄降压胶囊组(0.288g/kg)、CHC-CH低、中、高剂量组（低剂量CHC-CH分别为0.33和0.016g/kg、中剂量CHC-CH分别为0.67和0.033g/kg，高剂量CHC-CH分别为1.33和0.067g/kg）和CHC组（0.67g/kg），每组动物均为8只，灌胃给药，每天1次，连续给药4周o

1.7 指标测定所有大鼠于第1，2，4周及停药后1周采用CODA多通道无创测压系统测定血压，对每个待测组大鼠进行组间平行测压，检测内容包括收缩压(SP)、舒张压(DP)、心率（HR）o实验结束当天，取血，分离血清，采用试剂盒检测各组大鼠血清中一氧化氮（NO）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、内皮素-1（ET-1）含量o

1.8 统计学方法应用SPSSl7.0软件进行统计学分析，数据用表示，采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）进行组间比较，以P＜0.05为差异具有统计学意义

2 结果

2.1 急性毒性结果

2.1.1 一般情况观察正常组、CHC-CH和CHC组动物均无一死亡，其行为活动、进食、体重、体表颜色、运动功能等未见明显异常；正常反射、翻正反射等神经反射存在，无僵硬、痉挛、或运动不协调，无四肢或全身震颤oCHC-CH的最大给药剂量为96g生药/kg合并CH 4.8g/kgo

2.1.2 各组小鼠体重各组小鼠体重结果表明，给药后各组小鼠体重增加趋势基本相同，对小鼠体重无明显影响（P＞0.05）o

2.1.3 各组小鼠脏器变化情况观察得知，小鼠肝脏、肾脏、脾脏、胸腺、肾上腺、睾丸或子宫等脏器均无发现有明显异常，各样品组动物脏器指数与正常组比较均无显著性差异（P＞0.05），见图1o

图1 小鼠主要脏器指数

2.2 CH C-CH降压作用结果

2.2.1 血压测定结果从图2、图3和图4结果可看出，和模型对照组比较各给药组对大鼠收缩压和舒张压均有一定的降低作用，CHC-CH中高剂量组与模型组比较，降压作用均具有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)o配伍酪蛋白的CHC-CH中剂量组降血压作用显著优于CHC组（P＜0.05）o对比空白对照组与CHC-CH正常给药组，血压值及心率均无显著性差异（P＞0.05），表明药物不影响正常动物血压o停药后一周，CHC-CH组血压值与模型组比较仍具有显著性差异(P＜0.05)，可知配伍CH后可较好的维持复方降血压作用o

2.2.2 生化指标测定结果由表1可以得出，各给药组相对模型组与对照组相应血清AngⅡ、NO和ET-1水平也均具有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)o同时，CHCCH组血清AngⅡ浓度显著降低(P＜0.05)，表明复方中药与CH配伍联合使用可以显著增强中药的降血压作用，尤其可以降低血清AngⅡ含量o

图2 各组大鼠收缩压水平

图3 各组大鼠舒张压水平

图4 各组大鼠心率的变化

表1 各组大鼠血清生化指标

表1 各组大鼠血清生化指标

注：#示与正常组比较P＜0.05，##示与正常组比较P＜0.01；*示与模型组比较P＜0.05，**示与模型组比较P＜0.01；△示与CH-中药中剂量组比较P＜0.05，△△示与CH-中药中剂量组比较P＜0.01

组别NO(μ m o l/L）Ang（n g/m l）ET-1（p g/m l）空白对照组16.06±5.021.54±0.3715.04±4.49CHC-CH正常组16.21±5.801.57±0.3315.22±2.39模型对照组7.95±1.28##2.59±0.45##25.43±4.76##牛黄降压胶囊组10.40±3.37**1.99±0.37*16.96±4.90**CHC-CH低组8.35±2.272.33±0.5422.56±5.56CHC-CH中组9.25±2.35*1.92±0.13*20.90±5.27*CHC-CH高组9.64±1.52*1.89±0.41*19.42±3.46*CH C组9.31±3.23*2.38±0.3621.10±2.57*

3 讨论

高血压的发病机制复杂，主要有激素机制和血管机制o肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）是引发高血压的主要激素机制，AngⅡ则是RAAS的主要效应物质，作用于血管紧张素Ⅱ受体，通过RAAS系统作用使血压升高［9］o血管机制方面，覆盖在血管壁内表面的内皮细胞能生成、激活和释放一氧化氮（NO）和内皮素（ET）等各种血管活性物质，用以调节心血管功能，其中ET是目前所知体内最强的血管收缩因子，NO则是主要的舒血管物质，在高血压的发生和发展中有重要作用［10，11］o

酪蛋白水解物是生物降血压活性肽的主要来源，目前国内外研究者应用生物酶技术和发酵技术已获得具有强ACE(血管紧张素转换酶)抑制活性的酪蛋白源降血压肽［4，5，8］o该肽具有较强的ACE非竞争性抑制活性，通过与ACE活性中心结合，竞争性地抑制ACE活性，阻碍血管紧张素Ⅱ生成，发挥降血压作［2，8］o中药天麻和杜仲是常用降血压中药，两药均可提高血浆NO含量，降低ET-1和AngⅡ含量，促进内源性舒血管物质的生成，抑制内源性缩血管物质的释放，具有显著的降低收缩压和舒张压的作用［12-14］o复方中所配伍的何首乌和白芷，具有舒张血管，活血化瘀、降低脂质过氧化作用对心血管的损伤等系列作用，对高血压及其所致的心脑血管疾病有较好的药理作用［15-17］o

本实验以CH配伍上述中药复方为研究对象，选择SHR大鼠作为模型动物，其收缩压、舒张压及血液中与高血压相关的指标成分NO、AngⅡ和ET-1等与正常对照组比较均具有显著性差异，可知模型动物选择可较真实地反应高血压的生理病理特点o实验结果表明，CHCCH组和CHC组均具有较好定的降血压作用，可显著降低SHR大鼠收缩压和舒张压(P＜0.05或P＜0.01)，AngⅡ、NO和ET-1含量也具有显著差异(P＜0.05)o而CHC-CH组的降压作用较CHC组也具有显著性差异(P＜0.05)，可知CH的配伍，对复方中药降压作用具有显著影响，其可能是通过上述多种靶点，多种途径共同实现o样品对正常动物收缩压、舒张压和心率及血液指标均未见影响o样品未见急性毒性试验，样品使用具有较好的安全性o实验结果表明，酪蛋白水解物配合中药复方可以作为充分利用酪蛋白水解的一种有效途径，也可以为寻找安全的多靶点降压药物提供参考o但两者配伍用药对药物成分的影响及共同作用机制等，有待进一步研究发现o

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ZHAO Ying， ZHAI Ming， YE Xiaoling
(Department of Pharmacy， Medical College of Jiaying Vniversity， Guangdong Province， Meizhou 514030， China）

ObjectiveTo observE The influence of casein hydrolysate(CH)to Rhizoma Gastrodiae，Eucommia Ulmoides，Polygonium Multiflorum and Radix Angelicae Dahuricae compound(Chines herbal compound，CHC)on antihypertensive effect and acutE Toxicity.MethodsKM rats were divided into control group and CH-CHC groups，distilled water and CH incorporated with CHC(CH-CHC)were intragastric administered at the Maximum gastric capacity，twice every day for 14days.SD rats were divided into control group and normal control group，distilled water and CHC-CH，were intragastric administered.SHR rats were divided into positive control group and 5experiment groups，Niuhuang Jiangya capsules(0.288g/kg)，CHC-CH low dose group，low，middle，high dosage of CH-CHC and CHC group，and all groups were daily intragastric administered respectively for 4weeks.Systolic pressure(SP)，diastolic pressure(DP)，heart rate(HR)，angiotonin Ⅱ(Ang Ⅱ)，nitric oxide(NO)and endothelin-1(ET-1)were determined.ResultsSP，DP，Ang，NO and ET-1of rats from CHC-CH groups and CHC group were all decreased significantly comparing with those of control groups(P＜0.05or P＜0.01).SP，DP and Ang Ⅱ levels of serum were also significant decrease between CHC-CH and CHC groups，the normal controle group had no significant different with control group.The HR of every group and all itmes in acutE Toxcity test had no significant different. Conclution CHC-CH and CHC groups had significant antihypertensive effects on SHR rats，and CH can enhancE The effects significantly，which had no influence on hypotensioN On normal rats and no acutE Toxicity.

Chines herbal compound;casein hydrolysate;lowerinGBlood pressure;animal experiment;rat

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.23.072

1672-2779（2015）-23-0140-03

：张文娟本文校对：陈有军

2015-09-07）