广州健康儿童鼻前庭定植金黄色葡萄球菌危险因素研究*

傅锦坚，叶小华，樊燕平，陈思东△

(1.广西壮族自治区柳州市妇幼保健院检验科 545001；2.广东药学院广东省分子流行病学重点实验室，广州 510006)

·调查报告·

广州健康儿童鼻前庭定植金黄色葡萄球菌危险因素研究*

傅锦坚1，叶小华2，樊燕平2，陈思东2△

(1.广西壮族自治区柳州市妇幼保健院检验科 545001；2.广东药学院广东省分子流行病学重点实验室，广州 510006)

目的了解社区健康儿童鼻前庭定植金黄色葡萄球菌及其危险因素。方法采用横断面调查研究方法，收集广州市荔湾区1 012名健康小学生的相关资料及鼻拭子样本，对细菌进行分离鉴定后，使用聚合酶链反应(PCR)法检测金黄色葡萄球菌16 SrRNA及mecA基因。结果小学生鼻前庭甲氧西林敏感性金黄色葡萄球菌(MSSA)定植率为38.9%，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)定植率为1.2%。MSSA定植主要与过去1年曾有过抗生素暴露史及皮肤软组织感染史有关(P<0.05)，MRSA定植主要与过去1年曾有医院/门诊看病史有关(P<0.05)。结论广州荔湾区在校健康儿童MSSA鼻前庭定植率较高而MRSA鼻定植率较低，MSSA流行主要与抗生素使用史和皮肤软组织感染史有关，MRSA流行主要与过去1年有医院暴露史有关。

金黄色葡萄球菌；鼻定植；儿童；危险因素

金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus，SA)简称金葡菌是重要的条件致病菌，可定植于健康人群的鼻前庭[1-2]，健康儿童鼻前庭定植金葡菌较常见，已有文献表明鼻定植金葡菌，特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistantstaphylococcusaureus,MRSA)与随后的内源性感染存在必然的联系[3-4]。儿童可以担当载体，在社区和医院环境传播金葡菌[5]。在美国甚至有社区相关MRSA (community-associated MRSA,CA-MRSA)菌株导致社区健康儿童死亡的报道[6]，而这些健康儿童并无任何医院相关危险因素暴露。

多项调查表明，学校儿童是金葡菌定植的高危人群，尽管有多项研究表明学校是金葡菌传播的有利场所，但尚未清楚这些细菌是如何通过常规的传播途径在学校范围内放大传播。为此，通过对广州社区健康儿童鼻携带金葡菌进行主动监测，能使我们了解金葡菌、特别是MRSA在本地健康儿童群体的流行情况，并揭示金葡菌鼻携带的危险因素，及早对监测阳性人群采取相应控制措施(如隔离MRSA阳性定植者，对毒力较强菌株定植者及时进行治疗以达到消除MRSA定植的目的)，为控制金葡菌在社区儿童的流行提供重要信息。

1 对象与方法

1.1 研究对象 2011年3～5月抽取广州市荔湾区部分健康小学生。家长签署知情同意书，由经过培训的调查员现场进行鼻拭子采样，问卷以天记名的方式由学生家长独立完成。纳入标准：采样前14 d未服用/注射抗生素，采样当天未发生急性疾病，并且在校的健康小学生。

1.3 研究内容 研究内容包括三大部分：基本人口学资料；与社区相关的因素；与医院相关的直接暴露因素，以及间接暴露于医疗环境因素。调查表于调查前提前发放，并于采样当天收回。

1.4 鼻拭子标本的采集 由经过培训的调查员对每个儿童的双侧鼻前庭进行采样，标注样品编号，在采样后6 h内送到广东药学院广东省分子流行病学重点实验室进行培养。

1.5 金葡菌分离鉴定 按金黄色葡萄球菌鉴定的标准操作规程[8]，对上述采样后的试管经7.5%氯化钠肉汤增菌、甘露醇氯化钠琼脂培养基初步鉴定分离后，对疑似阳性单菌落进行革兰染色、触酶、耐热核酸酶、甲苯胺蓝DNA酶、血浆凝固酶及溶血试验，将上述试验全阳性的菌落保存。采用聚合酶链反应确定金黄色葡萄球菌及mecA基因，引物的设计及PCR反应体系参考张坤炎教授报道的文献进行[9]。

1.6 统计学处理 剔除资料不完整的调查表，在Epidata 3.0建立数据库，对调查表的数据进行双人双录入，一致性检验后，将数据导入至SPSS17.0软件，并进行数据分析。样本率的比较用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 一般情况 剔除资料不完整的调查表后，一共有1 012名小学儿童接受了本次调查，这些儿童的年龄7.0～12.5岁，平均 (10.25±1.79)岁。

2.2 金葡菌的定植情况 经过生化鉴定后，采用PCR检测金葡菌特征性基因16Sr RNA，其条带为756 bp,MRSA特征性基因mecA，其条带为147 bp，ATCC 25923 (MRSA)和ATCC 29213 (MSSA)用做质控。结果如图1所示。金葡菌在广州健康儿童人群中的鼻前庭定植率达40.1% (406/1 012)。其中1.2%(12/1 012)为MRSA，38.9%(394/1 012)为甲氧西林敏感性金黄色葡萄球菌(methicillin susceptiblestaphylococcusaureus,MSSA)。

1～7：金葡菌样本；M：Maker；8：MRSA质控；9：MSSA质控。

图1 金黄色葡萄球菌16Sr RNA、mecA基因检测

2.3 金葡菌的危险因素分析 小学中MSSA定植相关的危险因素是：过去1年内曾有皮肤软组织破损感染(P=0.015)、过去1年内有抗生素暴露史(P=0.020)。小学中MRSA流行与儿童过去1年有医院暴露史有关(P=0.021)，具体结果见表1。

表1 MSSA和MRSA在小学健康儿童的分布特征分析[n=1 012，n(%)]

续表1 MSSA和MRSA在小学健康儿童的分布特征分析 [n=1 012，n(%)]

3 讨 论

在中国台湾和美国，已有广泛的关于社区儿童MRSA鼻定植的研究[6,10]，在中国大陆，儿科ICU病房常有相同型别MRSA导致小规模病例感染的报道[11]。尽管尚未有关于儿童及青少年群体中暴发MRSA感染的报道，但有研究证据表明，MRSA早已在中国儿童群体中传播并成为一种重要的病原体[11]。本研究结果显示，金葡菌及MRSA在儿童群体中的定植率分别为40.1%、1.2%，国外对相同年龄组人群进行金葡菌携带率的流行病学调查研究显示，MRSA在健康儿童人群的流行率较低(约为0.2%～2%)[2,6]，本研究结果与其相近。最近的几个研究均表明MRSA在亚洲健康儿童鼻前庭的携带率在不断上升，如台湾健康儿童鼻前庭MRSA携带率达6.2%～9.2%[11]，韩国儿童鼻前庭MRSA的携带率甚至达到9.3%[12]。成都幼儿园儿童金黄色葡萄球菌携带率为18.4%，而MRSA的携带率为1.1%[13]。表明了MRSA在中国社区健康儿童人群流行率处于中等水平。

了解危险因素暴露与定植菌株情况的关系，在金葡菌无症状携带人群中显得尤为重要。本研究结果表明，在儿童人群中定植的MSSA及MRSA菌株与危险因素暴露情况不一致。流行于学校健康儿童群体中数量最多的金葡菌为MSSA，它与儿童过去1年有过皮肤软组织感染及抗生素暴露史有关，这些社区因素影响着MSSA在健康儿童群体中的流行情况。事实上，本研究发现，有将近40%的儿童在过去1年内使用过抗生素。而中国大陆的抗生素滥用情况严重，早期的报道显示，通常在抗生素药敏结果出来之前，儿科医生已开具青霉素、红霉素、克林霉素等去治疗儿童感染性疾病[11]。有文献报道在儿童医院流行的金黄色葡萄球菌与皮肤软组织感染有关，甚至有研究表明，儿童鼻定植金黄色葡萄球菌可导致随后的皮肤软组织感染发生率增高[14]。而从分子生物学角度及流行病学角度出发，可解释此菌株在学校环境中流行的情况，MSSA可通过各种途径定植在儿童人群中，高度拥挤的环境有利于金黄色葡萄球菌在校园内进行传播。拥挤的环境、常常有密切接触、卫生条件差、使用被细菌污染的体育器材以及儿童本身的免疫因素等均促进MSSA在学校环境进行传播。事实上，早就有关于学校是获得及传播MSSA的有利场所及幼儿长时间待在托儿所容易定植MSSA的报道[10]。有报道指出杀白细胞素(PVL)可引起健康儿童及运动员发生皮肤软组织感染及坏死性筋膜炎等[15-16]。本研究结果表明健康儿童携带MSSA的一个危险因素之一是过去一年有皮肤软组织感染史。究竟是否由携带杀白细胞素的金葡菌引起，由于尚未做PVL基因检测，结果有待进一步的实验研究证实。

儿童鼻前庭易定植MRSA可解释为其与医疗机构有密切接触。对全球有关社区获得性MRSA感染与定植的危险因素随机对照试验进行汇总的Meta分析报告表明，有医院暴露史(如近期住院史、长期入住健康护理院及与医务人员接触、近期有手术或侵入性操作)是社区获得性MRSA感染与定植的危险因素[17]。综合之前的文献报道，及有证据支持在我国，无论是社区或是住院儿童群体中流行的MRSA菌株，优势株均为CA-MRSA (ST59-MRSA-Ⅳa/V)[11,13]，作者推测，小学生其鼻前庭易定植MRSA 与其间接暴露于在医院环境传播的优势株有关，这些细菌可能由有医院接触的儿童从医院看病后带回学校，从而增加了学校儿童感染医院流行MRSA菌株的机会。

综上，在中国广州市荔湾区，社区健康儿童MSSA鼻定植较高，已出现MRSA定植者。MSSA流行主要与抗生素使用史和皮肤软组织感染史有关，MRSA流行主要与过去一年有医院暴露史有关。

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Analysis on risk factors ofstaphylococcusaureusnasal vestibule colonization Among Guangzhou healthy children*

FuJinian1,YeXiaohua2,FanYanping2,ChenSidong2△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,LiuzhouMunicipalMaternityandChildHealthCareHospital,Liuzhou,Guangxi545001,China;2.GuangdongProvincialKeyLaboratoryofMolecularEpidemiology,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou,Guangdong510006,China)

ObjectiveTo understand thestaphylococcusaureusnasal vestibule colonization situation and its risk factors among the community children.MethodsThe cross-sectional survey study method was adopted,the related data and the nasal swab samples from 1 012 healthy elementary school students in the Liwan district of Guangzhou city were collected.The 16Sr RNA and mecA gene were detected by PCR method after bacterial isolation and identification.ResultsThe nasal vestibule colonization rate of methicillin-susceptiblestaphylococcusaureus(MSSA) was 38.9% and which of methicillin-resistantstaphylococcusaureus(MRSA) was 1.2%.The MSSA colonization was related with the antibiotic exposure history in the past 1 year and the skin soft tissue infection(P<0.05).The MRSA colonization was mainly related with the history of visiting to clinic during the past 1 year(P<0.05).ConclusionThe nasal vestibule colonization rate of MSSA among healthy children at school in the Liwan district of Guangzhou city is higher,while which of MRSA is lower.The prevalence of MSSA is mainly related with the antibiotic use history and skin soft tissue infection,while which of MRSA is mainly related with the hospital exposure history in the past 1 year.

staphylococcusaureus;nasal colonization;children;risk factors

10.3969/j.issn.1671-8348.2015.26.022

广东省自然科学基金(S2011010002481)；广东省医学科研基金(B2013195)。

：傅锦坚(1981-)，博士，主管技师，主要从事多药耐药细菌分子流行病学研究。△

，E-mail:chensidong1@126.com。

R725

A

1671-8348(2015)26-3669-03

2015-04-08

2015-06-21)