消食十味丸的质量标准

白翠兰， 李昭日格图， 萨仁格日乐， 王青虎*

(1. 内蒙古民族大学 蒙医药学院，内蒙古 通辽028000;2. 内蒙古民族大学附属医院，内蒙古 通辽028000)

消食十味丸，由黑冰片、白豆蔻、牛胆粉、连翘、荜拨、石榴、木鳖子(制)、光明盐、诃子、肉桂等十味药材组成。蒙医临床上用于治疗消化不良、胃脘疼痛、寒性痞症、嗳气吞酸，对寒性“协日”尤为有效［1］，但目前收载本品原丸剂没有“薄层鉴别”项及“含量测定”项。消食十味丸含有没食子酸、连翘苷、胡椒碱、肉桂酸等化合物，具有防腐、收敛、胃溃疡、抗菌、抗炎等作用［2-10］。本实验采用TLC 法对消食十味丸中诃子、石榴、连翘和荜拨进行定性鉴别研究，并运用HPLC 法同时测定其中没食子酸、肉桂酸和连翘苷的量，为该制剂的质量控制提供依据。

1 实验材料

高效液相色谱仪 (包括LC-20AT 输液泵，SPD-M20A 检测器，CBM-20A 工作站，CTO-22A柱温箱);AUW220D 型电子天平 (日本岛津);KQ-600DB 型系列超声波冲洗器(昆山市超声仪器有限公司)。黑冰片、白豆蔻、牛胆粉、连翘、荜拨、石榴、木鳖子(制)、光明盐、诃子、肉桂等十味药材，由内蒙古民族大学附属医院提供。没食子酸对照品 (批号0831-9501)，肉桂酸对照品(批号621-3655)，连翘苷对照品(批号1102354-2010302)和胡椒碱(批号168701)由中国食品药品检定研究院提供。单宁酸(批号140155-4)由上海江莱生物科技有限公司提供;乙腈为色谱纯(天津市大茂化学试剂厂);水为超纯水;硅胶G(薄层色谱用)由青岛海洋化工厂提供;其他所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 荜拨的鉴别 取本品2.0 g，加10 mL 三氯甲烷，超声处理30 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取荜拨药材0.2 g 和缺荜拨阴性样品2.0 g，照供试液制备方法操作，即得阳性对照液和阴性对照液。吸取样品供试品溶液、阳性对照液和阴性对照液5 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮(7 ∶2 ∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，以10%硫酸乙醇溶液显色，置紫外灯365 nm 下观察，结果见图1。

2.1.2 连翘的鉴别 称取本品3.0 g、连翘0.5 g和阴性样品3.0 g，加10 mL 甲醇，超声处理30 min，滤过，即得样品供试液、阳性对照液和阴性对照液。吸取样品供试品溶液、阳性对照液和阴性对照液5 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以二氯甲烷-甲醇(10 ∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，以10%硫酸乙醇溶液显色，结果见图1。

2.1.3 石榴的鉴别 称取本品1.0 g、石榴0.2 g和阴性样品1.0 g，加10 mL 70%乙醇，超声处理30 min，滤过，即得样品供试液、阳性对照液和阴性对照液。吸取样品供试品溶液、阳性对照液和阴性对照液4 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(6 ∶4 ∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，以10% 硫酸乙醇溶液显色，结果见图1。

2.1.4 诃子的鉴别 称取本品1.0 g、诃子0.2 g和阴性对照品1.0 g，加10 mL 95%乙醇，超声处理30 min，滤过，即得样品供试液、阳性对照液和阴性对照液。吸取样品供试品溶液、阳性对照液和阴性对照液3 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水(9 ∶4 ∶1 ∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，以10%硫酸乙醇溶液显色，结果见图1。

2.2 样品中成分测定［11-15］

2.2.1 供试品溶液制备 称取供试品3.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇30 mL，称定质量，超声处理30 min，再称定质量，用甲醇补足损失的质量，摇匀，滤过。精密吸取滤液10.0 mL 于20 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得。

2.2.2 对照液的制备 精密吸取没食子酸对照品适量，用甲醇配成质量浓度为2.00 mg/mL 的对照品贮备液。另精密称取肉桂酸和连翘苷对照品适量，用甲醇配成质量浓度为1.00 mg/mL 的对照品贮备液。

图1 消食十味丸薄层色谱图Fig.1 TLC chromatograms of Xiaoshi Shiwei Pills

2.2.3 色谱条件与系统适用性试验 日本岛津Inertsil ODS-SP 柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相为乙腈-水，梯度洗脱(0 ～10 min，18% ～35%乙腈;10 ～20 min，35% ～65%乙腈);检测波长254 nm;体积流量1.0 mL/min。在上述色谱条件下，肉桂酸、没食子酸和连翘苷达到基线分离(R ＞1.5)，理论塔板数均不低于6 000，见图2。

图2 样品、对照品、肉桂阴性样品、连翘阴性样品、石榴阴性样品和诃子阴性样品色谱图Fig.2 HPLC chromatograms of samples，reference substances，sample without Cinnamomi Cortex，sample without Forsythia suspensa，sample without Punica granatum and sample without Terminalia chebula

2.2.4 线性关系考察 采用微量注射器精密吸取没食子酸对照品贮备液 (50.0、100.0、200.0、400.0 和500.0 μL)，肉桂酸对照品贮备液(10.0、20.0、30.0、40.0 和50.0 μL)和连翘苷对照品贮备液(10.0、20.0、30.0、40.0 和50.0 μL)，分别置于100 mL 量瓶中，加甲醇配制成5 个不同质量浓度的系列对照溶液，0.45 μm 微孔滤膜过滤，分别取上述溶液20 μL，依上述色谱条件下进行测定，计算其回归方程式，结果见表1。

表1 线性关系考察Tab.1 Calibration curves of reference substances

2.2.5 精密度试验 分别取同一供试品溶液，在上述色谱条件下连续进样5 次，测定峰面积。计算没食子酸，肉桂酸和连翘苷的峰面积RSD，分别为1.2%、1.2%和1.2%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于制备后0、4、6、8、12 h 依法测定，以峰面积值计算没食子酸，肉桂酸和连翘苷的峰面积RSD，分别为1.5%、1.0%和1.1%，表明供试液在12 h内稳定。

2.2.7 重复性试验 取同一样品(内蒙古库伦药厂)5 份，按“2.2.1”项制备供试品溶液，进行测定，计算没食子酸，肉桂酸和连翘苷的质量分数，其RSD 分别1.1%、1.6%和1.3%。

2.2.8 回收率试验 精密称取样品(内蒙古库伦药厂)1.5 g，共6 份，每份中分别精密加入没食子酸、肉桂酸和连翘苷贮备液1、0.1 和0.1 mL，按“2.2.1”项制备供试品溶液，测定、计算加样回收率和RSD，结果见表2。

表2 回收率试验结果(n=6)Tab.2 Result of recovery tests (n=6)

2.2.9 样品测定 精密吸取不同来源样品的供试品溶液各6 份，每份20 μL，进样测定，按外标两点法计算样品中没食子酸、肉桂酸和连翘苷的质量分数，结果见表3。

表3 不同样品定量测定结果Tab.3 Quantitative determination result of various samples

3 讨论

本实验选择的薄层色谱条件下，连翘、荜拨和诃子供试品色谱与对照药材色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点，阴性样品无干扰。因石榴和诃子均含有没食子酸，故石榴薄层鉴别中阴性样品有一定的影响。

本实验用高效液相色谱法测定了消食十味丸中没食子酸、肉桂酸和连翘苷的量，不同来源该制剂中3 种成分的量变化不大。实验结果表明，所建立的方法可靠和准确，为有效控制消食十味丸的质量提供可靠依据。

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