归脾颗粒对饮酒小鼠血醇变化的影响

邓金明， 吴海英， 余 霜， 钟若曦

(浙江爱生药业有限公司，浙江 杭州310018)

中国是个酒文化历史非常悠久而且十分丰厚的国家。适量饮酒，可陶冶情操，愉悦身心，但过量及长期饮酒易带来的身体机能的损害，其中以酒精性肝损伤最为常见，包括脂肪肝、酒精性肝炎、肝硬化甚至肝癌［1-2］。归脾颗粒由十大经典古方归脾汤经现代工艺制备而来，包含党参、木香、茯苓、当归等11 味中药。在市场随机回访中有较多客户反映归脾颗粒具有解酒效果，能很好地解决饮酒后问题。本实验通过动物实验以作进一步研究。

1 材料

1.1 药物 归脾颗粒剂(浙江爱生药业有限公司，规格3 g/袋，相当于生药6 g)，用纯化水配成0.15 g/mL 的药液，4 ℃冰箱保存备用，使用时取所需量药液水浴加热至37 ℃，摇匀。

1.2 动物 ICR 雄性小鼠120 只，体质量20 ～22 g，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，合格证编号2008001634464。

1.3 主要试剂 56%二锅头白酒(V/V)，北京顺鑫农业股份有限公司牛栏山酒厂。其余试剂均为国产分析纯。

1.4 主要仪器 TGL 18C 高速台式离心机;BCD-241C 华日冰箱;FA2104 型电子分析天平;德国SLEE MEV 冷冻切片机;Lecia TCS SP2 激光共聚焦显微镜;GC 2010Plus 型气相色谱仪等。

2 实验方法

2.1 分组及灌胃［3-6］实验小鼠适应性饲养7 d 后，标记，称定质量，随机分成4 组(表1)，每组30 只。连续灌胃一个月，其中归脾颗粒或生理盐水按0.2 mL/20 g 体质量灌服，酒按0.25 mL/20 g 体质量灌服，记录相关实验数据。

表1 组别设置

2.2 检测［7-9］按表1 组别设置连续灌胃30 d，末次给酒后于30、60、90、120、150、180 min 摘除眼球取血，分离血清测血醇质量浓度。取血断颈处理后立即取小鼠肝脏大叶片，浸泡于福尔马林溶液中固定，用作组织病理切片。

3 结果

3.1 一般观察及死亡率 灌酒后小鼠先表现出兴奋状态，继而共济失调，毛发松散，呼吸急促，个别有呼吸衰竭现象。实验第3 ～4 天防醉对照组普遍出现活动减少，食量下降现象，至第10 天共死亡12 只，造模30 d 共死亡18 只;而归脾防醉组大部分活跃，至第10 天，共死亡3 只，造模30 d 共死亡8 只;长期保养组均无死亡。说明饮酒易造成小鼠生理机能的衰竭甚至导致死亡，而归脾颗粒有助于保护小鼠生理机能的修复，减少死亡率，防醉对照组的死亡率明显高于归脾防醉组，说明归脾颗粒有助于小鼠生理机能的修复，减少死亡率，同时延缓小鼠的死亡时间，详见表2。

表2 小鼠死亡情况统计

3.2 体质量变化［10］实验第30 天称量各组小鼠体质量，对比实验前后各组平均体质量，计算体质量增长率，见表3 及图1。从体质量增长率比较，归脾保养组＞保养对照组＞归脾防醉组＞防醉对照组。

表3 各组实验前后平均体质量变化及增长率

图1 各组实验前后平均体质量变化及增长率

归脾防醉组与防醉对照组比较，证明归脾颗粒对酒精的影响，有助于小鼠生理机能的修复，减少酒精的危害;归脾保养组与保养对照组比较，证明归脾颗粒对正常小鼠的影响，有助于增加小鼠的食欲，促进消化代谢功能;具体参考表中数据。

3.3 睡眠情况［11］实验进行第7 天，每组均灌酒后观察小鼠的活动情况。以小鼠爬行不稳、后腹拖地、毛松散、闭眼不动为醉酒指标，以活动自如、灵活、精神、毛滑顺为醒酒指标，记录小鼠入睡(醉酒)时间和苏醒(醒酒)时间，计算出睡眠潜伏时间(从灌酒至入睡的时间，min)及睡眠时间(从入睡到苏醒的时间，min)。

从表4 数据结果得知，服用归脾颗粒对小鼠的睡眠影响。一直服用归脾颗粒的归脾防醉组、归脾保养组平均睡眠潜伏期较2 个对照组防醉对照组、保养对照组短，睡眠时间长，表现为易醉晚醒的现象。推测为服用归脾颗粒增强了机体胃肠道的运化能力，后给酒，可促进对酒精的吸收，从而表现为易醉的效果。而归脾颗粒可能有“安神效果”，从而延长了睡眠时间。

表4 睡眠情况

3.4 血醇变化 睡眠情况的数据显示归脾组比对照组易醉，分析给酒后各时间点的血醇质量浓度发现归脾颗粒可以促进小鼠对酒精的吸收和代谢。促进酒精吸收具体表现即为睡眠潜伏期短的易醉，归脾颗粒促进酒精代谢与安神助眠双重作用下结果表现为睡眠时间长，血醇质量浓度变化具体情况见图2。

图2 血醇质量浓度-时间变化曲线

归脾防醉组，由于归脾颗粒的促进吸收和代谢作用，加之此组长期饮酒，推测小鼠胃肠道吸收功能得到锻炼、提高，使其吸收最快，表现为血醇质量浓度最高。代谢也最快。实验数据显示，在1 h 后血醇质量浓度下降到75 mg/100 mL，低于醉酒质量浓度(80 mg/100 mL)，并呈现继续缓慢下降趋势。

防醉对照组，由于酒精的长期刺激且没有归脾颗粒的保护作用，胃肠道功能可能受到一定程度损伤，导致此组吸收最差，肝功能受影响，代谢也最差。实验数据显示，3 h后仍然呈现醉酒状态 (血醇质量浓度高达87.9 mg/100 mL)。

归脾保养组，该组显示其对酒精的代谢能力不如归脾防醉组，说明归脾防醉组小鼠因为长期饮酒和服用归脾颗粒使得体内的乙醇代谢酶得到适应并强化，故能在1 h 就低于醉酒质量浓度，而归脾保养组达到相同质量浓度需要2 h。

保养对照组，该组为没有服用归脾颗粒(可作为空白对照组)，需要3 h 酒醒(以低于血醇质量浓度80 mg/100 mL 为标准)，比归脾防醉组(1 h)和归脾保养组(2 h)都慢，虽然血醇峰值与归脾防醉组相近，但达峰时间延后了1 h。数据显示，3 h 后血醇质量浓度降低为63.11 mg/100 mL，仅优于防醉对照组。

因此，长期服用归脾颗粒，可增强胃肠道运化吸收功能，促进肝脏代谢活力，即增强小鼠机体解酒能力。3.5 肝组织病理切片［12-13］各组小鼠肝组织经石蜡切片，HE 染色后在50 倍光学显微镜下观察，结果图3 所示。从结果可以看出，归脾防醉组的肝脏结构大致正常，肝细胞未见明显肿胀;防醉对照组的肝细胞肿胀，肝索排列紊乱，肝窦受压，可见血管充血和灶性坏死;归脾保养组的肝脏结构基本正常，清晰可见，肝索排列大致正常;保养对照组的肝脏结构正常，清晰可见，肝索排列大致正常。

因此，服用归脾颗粒对小鼠肝脏具有较明显的保护作用，可减少饮酒带来的损害。

图3 各组的肝组织病理切片(HE×50)

4 讨论

血醇测定实验表明归脾颗粒对灌酒小鼠胃肠道吸收及肝脏代谢功能有明显的提高作用;小鼠睡眠实验，表明归脾颗粒可延长睡眠时间和提高质量，具有一定的安神助眠效果，这与戴诗文等［14］开展的对归脾颗粒剂的药效学研究中提到归脾的安神之功效相符。此外，归脾颗粒还能增加小鼠食欲，从而增加体质量，大幅度降低死亡率。

由王绪平等［15］进行的归脾颗粒剂对肝灌流液中酶AST、ALT 的影响实验，测定肝灌流液中天门冬氨酸氨基转换酶(AST)和丙氨酸氨基转换酶(ALT)，两者是肝细胞内的主要功能酶，在肝组织损伤及坏死时，酶从细胞内漏出入血，故检测小鼠血中ALT 和AST 活性的高低可判断其肝细胞损伤的程度［16］，结果提示归脾颗粒剂对肝脏无毒性影响，这为归脾颗粒剂的临床合理用药提供了实验依据。结合本实验的肝组织病例切片，进一步证实了归脾颗粒剂对肝脏无毒性，且具有一定的修复作用。

本实验主要通过血醇-时间变化曲线、体质量及病理切片等因素一定程度上说明归脾颗粒对机体有较明显的正作用，而对于机体修复的程度，特别是胃肠道及肝脏具有保护及修复作用，还有待进一步实验论证。具体可对胃肠道生化指标作进一步研究，以确证归脾颗粒对胃肠道也有保护作用，增加其运化吸收能力。如胃黏膜中内皮素(ET)、一氧化氮合成酶(NOS)、生长抑素(SS)和血管活性肠肽(VIP)，内皮素(ET)和一氧化氮(NO)考察。对肝脏功能可进行天门冬氨酸氨基转换酶(AST)和丙氨酸氨基转换酶(ALT)的测定。以上指标的测定将是归脾颗粒对机能功能器官是否有明显的保护作用的有力佐证。

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