六种血常规项目联合应用推断死亡时间的实验研究

韩 玮 马 原 唐 晖 李伟静 李常兰 任素萍 焦章平 于 群

1.北京市公安局丰台分局物证鉴定所，北京 100072；2.军事医学科学院野战输血研究所，北京 100850；3.北京市公安局朝阳分局物证鉴定所，北京 100036；4.北京市公安局法医检验鉴定中心，北京 100192

死亡时间推断在刑事案件的侦破工作中具有重要意义，可以为侦察工作提供线索、划定侦察范围、确定犯罪嫌疑人有无作案时间或确认案件性质、阐明作案过程等[1]。 本研究通过检测6 种血常规项目随保存时间的变化，并与红细胞ATP 含量参数[2]相比较，探讨6 种血常规项目联合应用推断死亡时间的可行性，以寻求更为简便推断死亡时间的方法。

1 材料与方法

1.1 材料

选取健康捐血者12 名， 均为来自北京市公安局丰台分局的志愿者，男、女各6 名，无血液疾病或代谢性疾病，年龄25～40 岁，采血前均告知采血量、可能风险并签订 《捐血志愿书》。 严格依照无菌操作规程，2010 年3 月由执业护士用EDTA 真空采血管各采集全血40 mL。

1.2 方法

1.2.1 血样分组及保存

将全血摇匀后， 即刻将各个血样以每份500 μL分装到EP 管中，置于25℃恒温箱中保存。 各组样本分别在0、4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44 h 时间点取1 份待检。

1.2.2 6 种血液常规项目检测

将血样摇匀， 然后将EP 管放入Sysmex-Poch-100i 血液分析仪（Sysmex 公司，日本）样品槽中，测定6 项指标，包括：平均红细胞体积（MCA）、平均血小板体积（MPV）、红细胞分布宽度（RDW）、血小板分布宽度（PDW）、淋巴细胞绝对值（W-SCC）、淋巴细胞百分率（W-SCR）；同时测定血红蛋白（HGB）浓度（g/L），以备计算红细胞ATP 含量。

1.2.3 红细胞ATP 含量测定

1.2.3.1 红细胞ATP 待检标本处理 取40 μL 血样加入装有1000 μL 等渗PBS 缓冲液的EP 管中，摇匀，置于干热器中100℃加热10 min，自然冷却后13 000 r/min离心3 min，取上清液即为ATP 待检标本。

1.2.3.2 ATP 含量测定 采用改良后生物发光法[3]。 全部试剂为中国科学院上海植物生理研究所产品。

1.2.3.3 红细胞ATP 含量计算 红细胞ATP 含量（μmol/gHb）=26×样本ATP 浓度值/血红蛋白浓度值。

1.3 统计学方法

全部数据采用SAS 9.2 统计软件进行统计学分析。

1.3.1 各指标回归方程及联合方程分析

对上述6 种血常规项目及红细胞ATP 含量 （用[项目]表示）随保存（死亡）时间（用PMI 表示）的变化分别进行线性回归分析，推导回归方程，并对相关系数进行相关性检验；6 种血常规项目的全部数据汇总，采用最小二乘法拟合出六元一次的联合方程。

1.3.2 各组残差（偏离时间）计算

以各项目、指标的原始数据分别代入线性回归方程和联合方程，计算残差（估计保存时间与实际保存时间之差），同一时间点上12 个残差绝对值的均值为各时间点推测的平均偏离时间，各血常规项目的残差分别与同一时间点的ATP 指标残差及联合方程的残差进行成对t 检验。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 6 种血常规项目、ATP 指标回归分析及联合方程拟合分析

6 种血常规项目及ATP 指标与保存时间的回归分析结果见表1。相关分析结果显示，6 种血常规项目及ATP 指标与保存时间的相关性差异有统计学意义（P ＜0.05）。

6 种血常规项目联合与保存时间的拟合分析，得到拟合方程PMI=-129.07-0.15[MCV]-27.75[W-SCR]-1.68[W-SCC]+3.18[RDW]+0.47[PDW]+2.54[MPV]，其r2为0.9663，拟合分析结果显示，6 种血常规项目在联合方程中与保存时间的相关性差异有统计学意义（P ＜0.05）。

比较来看各方程决定系数（r2）差距较大，6 种血常规项目的决定系数 （r2） 为0.7～0.8，ATP 指标r2为0.9126，联合方程的r2为0.9663。

2.2 6 种血常规项目、联合方程与ATP 指标残差（偏离时间）的比较

6 种血常规项目、联合方程与ATP 指标残差结果见表2。 6 种血常规项目平均残差值在2.44～2.99 之间，ATP 指标平均残差值为1.86， 联合方程平均残差值为1.35。 同时可以看到，6 种血常规项目残差值在各个时间点上与ATP 指标或联合方程的残差值进行成对t 检验，差异有高度统计学意义（P ＜0.01）；ATP指标残差值在各个时间点上与联合方程的残差值进行成对t 检验，差异有高度统计学意义（P ＜0.01）。

表1 6 种血常规项目及红细胞ATP 含量与保存时间的线性回归分析

表2 6 种血常规项目、联合方程与ATP 指标残差（偏离时间）的比较（h）

3 讨论

死亡时间常通过死后尸体现象、体液化学变化、直肠温度、昆虫学原理等方法进行分析推断[4-6]。Medea 等[7]曾指出，生命代谢在死后继续进行直到代谢底物耗竭为止。随着DNA 技术的发展，一些研究尝试利用DNA 降解和蛋白质降解规律推断死亡时间[8-9]。红细胞ATP 这一参数推断死亡时间亦具有较好的应用情景[1]。 上述方法或误差较大，或检测繁琐费时。 寻找简便快捷的死亡时间推断方法， 应该为广大法医工作者所关注。

至于如何判断某回归方程的应用价值，龚志强等[1]认为r2>0.9 的因子，其方程可用于死亡时间的推断。但是刘茜等[10]认为，评价方程不应仅考虑r2值，还应该注意评价方程在推断死亡时间时产生的预测偏离时间。 笔者较为认同刘茜等[10]的观点，根据法医办案经验，对死亡时间推断其误差应控制在2 h 左右为佳，否则其实际应用意义将大打折扣。

实验结果显示，6 种血常规项目其r2值明显低于ATP，且偏离时间高于ATP，误差偏大，不适于单独应用于死亡时间推断。 但同时也看到，6 种血常规项目的联合方程其r2值为0.9663，而且偏离时间为1.35 h，均明显优于ATP 指标，更远超各血常规单项。陈瑶清[11]和陶涛等[12]均报道应用多种人玻璃体液化学成分推断死亡时间，后者研究葡萄糖、钾、钙[13]、镁[14-15]、磷和微量蛋白等11 种指标，认为葡萄糖、钾离子和无机磷与死亡时间的相关性好， 并建立三指标联合回归方程；钾离子与死亡时间最具有线性关系，但由于各自研究中的影响因素差异，造成直线回归方程斜率和截距的不同[16-20]。用逐步回归法建立多元回归方程，可以提高对死亡时间估计的准确性。

综上所述，以偏离时间2 h 左右为标准，笔者认为，联合应用6 种血常规项目是一个较为准确实用的推断死亡时间的方法， 而且血常规项目检测极为方便、快捷，价格便宜，实际应用效果优于红细胞ATP含量这一参数。 这一研究结果还提示，多项目联合应用其实际推断效果远优于单个项目，在死亡时间推断这一重要研究领域应该对此给予高度重视。

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