黑素细胞移植治疗白癜风的研究进展

秦晓明 柯国琳 杨孔超

·综述·

黑素细胞移植治疗白癜风的研究进展

秦晓明 柯国琳 杨孔超

黑素细胞移植是治疗稳定期白癜风的方法之一，主要包括培养的黑素细胞移植和表皮细胞悬液移植。近年来动物实验证实脂肪干细胞可代替角质形成细胞与黑素细胞共培养移植治疗白癜风。白癜风患者自体黑素细胞的移植效率可通过皮损周围皮肤归巢CD8＋T细胞活动性来进行预测，真皮间充质干细胞可作为黑素细胞移植治疗白癜风的辅助剂。本文综述黑素细胞移植治疗白癜风的国内外进展，旨在为临床提供参考。

白癜风； 黑素细胞； 移植

白癜风是一种需要综合治疗的皮肤病。其病因及发病机制尚不明确，近年来认为基因遗传因素、神经学说、自身免疫假说和氧化应激等可直接或间接破坏黑素细胞，引起黑素合成及分布异常，使色素脱失导致白癜风。1对于稳定期的局限型、节段型、散发型及泛发型暴露部位的白斑，移植是一种有效的治疗手段。白癜风的移植治疗主要包括表皮移植和黑素细胞移植。2前者主要是指使用不同的技术使皮肤组织作为一个整体移植到受体区；而后者则需进一步从皮肤组织中分离出黑素细胞，然后将黑素细胞移植到受体区。而自体黑素细胞移植又包括非培养的自体黑素细胞移植和培养的自体黑素细胞移植。现对自体黑素细胞移植治疗白癜风的国内外新进展综述如下。

1 患者的选择

移植治疗白癜风取得良好美容效果的首要因素是选择合适的患者。考虑的因素主要包括:患者的年龄、发病部位、瘢痕体质及是否处在疾病的稳定期。3临床上，白癜风稳定期表现为原白斑无扩大，无新发皮损，无同形反应。IADVL专业组已达成共识:白癜风患者在过去的一年内白斑无扩大，无新发皮损，无同形反应为白癜风稳定期。4洪为松等5认为白癜风稳定期时间越长，移植疗效越好。近年来研究发现在过去的18个月内白斑无扩大，无新发皮损，无同形反应的白癜风患者更适合进行移植手术。6

2 黑素细胞移植

2.1 非培养的自体黑素细胞移植 非培养的自体黑素细胞移植是指表皮细胞悬液移植，该表皮细胞悬液是由角质形成细胞和黑素细胞组成的混合物，是一种相对简单的细胞移植治疗白癜风的方法。1992年Galus等7首先报道用含角质形成细胞的非培养黑素细胞移植治疗白癜风取得成功。1998年 Olsson和Juhlin也用表皮细胞悬液移植成功治疗白癜风。8随后该技术被改进和普遍应用，包括三个主要步骤:9(1)通过刃厚皮片移植或负压吸疱移植取供皮区皮肤；(2)制备富含黑素细胞的基底细胞悬液；(3)受皮区磨皮或者通过CO2激光磨削后将表皮细胞悬液移植于该区。同表皮移植相比该法具有以少量供皮区治疗较大范围皮损的优点，受皮区与供皮区面积比可达1∶8～1∶10。10此外该移植技术的复色效果佳，可以达到更好的美容效果。11但同时它具有以下缺点:3(1)需要特定的细胞培养基生化试剂及媒介；(2)同表皮移植相比花费更高；(3)手术室需配备培养箱、离心机及用于制备细胞悬液的无菌环境；(4)耗时较长。

非培养的自体黑素细胞移植治疗白癜风欲取得良好效果需注意以下几方面:(1)确保胰蛋白酶消化完全，如果胰蛋白消化不完全，可延长孵育时间；12胰

蛋白有冷热两种消化方法，冷消化法分离的细胞数量多，热消化法耗时少；13(2)将透明质酸掺入到表皮细胞悬液中以增加其黏着性，以使其在移植床部位稳定的附着；14(3)确保表皮细胞悬液均匀的涂于移植床部位，以减少复色区色素不均的可能性；3(4)表皮细胞悬液中的细胞成分需保持在理想的水平，以防止移植床部位色素过度沉着或者色素减退。供皮区和受皮区面积之比为1∶10可以达到最佳的复色效果，但是其科学性还有待验证；14(5)术后采用NB－UVB或PUVA照射可以加快复色的进程，而一些学者仅仅在复色延迟时才使用这些补充治疗；12，14(6)术中使用胶原蛋白敷料可以改善复色效果；3(7)通过计算所需表皮细胞悬液中黑素细胞数量可以得出供皮区面积:取得满意复色效果的黑素细胞数量为210～250/mm2。15

2.2 培养的自体黑素细胞移植 1987年Jeong等16首次成功应用培养的自体黑素细胞移植治疗白癜风。具体方法是:用胰蛋白酶分离表皮，然后分离出黑素细胞，将黑素细胞放于含有生长因子的黑素细胞培养基中培养15～30天后，将黑素细胞悬液移植到受体区。12该方法的最大优点是以较小的取皮面积治疗较大范围的皮损，受皮区与供皮区面积比可达1∶80～1∶100。17但此种方法的复色效果并不优于非培养的自体黑素细胞移植。此外培养的自体黑素细胞移植还有以下缺点:(1)实验室条件要求高，要有相应的人力、物力、技术等各方面的条件支持；(2)细胞培养基中的某些成分特别是TPA可以导致细胞突变；(3)对患者来说治疗费用相对较高。

2.3 角质形成细胞和黑素细胞共培养移植 1988年Lee等首次成功地建立角质形成细胞和黑素细胞体外共培养。18Andreassi等将黑素细胞和角质形成细胞共培养于经苯甲醇完全酯化的透明质酸生物聚合膜，移植治疗11例非泛发型白癜风患者，1个月后即有色素再生征象，至18个月时有6例色素完全再生。19角质形成细胞分泌的α－黑素细胞刺激素、促肾上腺皮质激素、碱性成纤维细胞生长因子、神经生长因子、内皮素、粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子、肝细胞生长因子等能通过受体介导的信号转导途径调节黑素细胞的增殖和分化。且黑素细胞可在移植部位形成色素沉着，而角质形成细胞保证了伤口快速愈合而不留瘢痕，可获得较佳的复色效果和皮损的完美愈合。20

2.4 脂肪干细胞与黑素细胞共培养移植 近年来研究发现，脂肪干细胞可以用来代替角质形成细胞与黑素细胞共培养移植治疗白癜风。Kim等通过用免疫组化和Boyeden小室等方法研究了脂肪干细胞对黑素细胞增殖、分化、迁移的影响。21通过共培养黑素细胞和脂肪干细胞发现，脂肪干细胞可以明显刺激黑素细胞的增殖和迁移，尽管由脂肪干细胞诱导黑素细胞的增殖和移行不及角质形成细胞，但却优于黑素细胞单独培养。这可能与脂肪干细胞可分泌干细胞因子、碱性成纤维细胞生长因子等有关。

Lim等22通过向裸小鼠和SD大鼠移植原代培养的人黑素细胞和不同比例原代培养的人脂肪干细胞，进一步验证了黑素细胞移植复色的耐久性及近期的安全性。培养的黑素细胞和脂肪干细胞按1∶1、1∶2、1∶3的比例混合移植，复色效果均优于纯黑细胞培养移植。其中黑素细胞和脂肪干细胞按1∶1及1∶2比例混合移植时，复色效果最佳。黑素细胞和脂肪干细胞共培养移植的效果与培养的黑素细胞混合培养的脂肪干细胞移植肤色效果相同。

2.5 CD8＋T细胞及真皮间充质干细胞与黑素细胞移植 Rao等23发现白癜风疾病活动期皮损中细胞毒性CD8＋T细胞的数量明显高于稳定期，皮损周边的CD8＋T细胞数量同黑素细胞移植治疗白癜风的效率相关，干扰CD8＋T细胞活性可能对黑素细胞移植治疗白癜风有益。白癜风皮损周边的CD8＋T细胞可以诱导自体黑素细胞凋亡，表明CD8＋T细胞在白癜风的发病机制中有重要作用。24Zhou等25研究了23例进行自体黑素细胞移植的白癜风患者，其中12例患者复色效果满意(恢复正常肤色的面积/原皮损面积≥90%)，6例患者复色效果良好(恢复正常肤色的面积/原皮损面积≥50%～89%)，5例患者复色效果一般或者较差(恢复正常肤色的面积/原皮损面积＜50%)。所有患者皮损周围均有CD8＋T细胞浸润，且移植效率同皮肤归巢CD8＋T细胞活动性密切相关。皮损周边CD8＋T细胞数量越多或其分泌的细胞因子、趋化因子越多则复色效果越差。体外实验中，他们成功分离并鉴定出人类真皮间充质干细胞和皮肤归巢CD8＋T细胞，并且建立了真皮间充质干细胞和皮肤归巢CD8＋T细胞共培养体系，发现真皮间充质干细胞可抑制CD8＋T细胞增殖，诱导CD8＋T细胞凋亡并调节CD8＋T细胞相关细胞因子及趋化因子的分泌。这些研究结果表明，白癜风患者自体黑素细胞的移植效率可通过皮损周围皮肤归巢CD8＋T细胞活动性来进行预测，真皮间充质干细胞可能被用作自体黑素细胞移植的辅助剂。

3 结语

综上所述，黑素细胞移植是治疗稳定期白癜风的方法之一，治疗面积大，复色效果好，值得临床推广应用。同时脂肪干细胞代替角质形成细胞与黑素细胞共培养移植治疗白癜风的安全性及疗效已在动物实验中被证实，真皮间充质干细胞在黑素细胞移植治疗白癜风方面也有重要作用，这些为黑素细胞移植治疗白癜风提供了新的思路。

1Malhotra N，Dytoc M.The Pathogenesis of vitiligo.JCutaneous Medicine Surgery，2013，17(3):153－172.

2 Sasaki M，Kondo M，Sato K.Rhododendrol，a depigmentationinducing phenolic compound，exerts melanocyte cytotoxicity via a tyrosinase dependentmechanism.Pigment Cell Melanoma Res. (IF 5.839)，2014，27(5):26－29.

3Majid I.Grafting in vitiligo:how to get better results and how to avoid complications.JCutan Aesthet Surg，2013，6(2):83－89.

4Parsad D，Gupta S.IADVL dermatosurgery task force.Standard guidelines of care for vitiligo surgery.Indian JDermatol Venereol Leprol，2008，74:S37－45.

5洪为松，傅丽芳，尉晓东，等.自体黑素细胞移植治疗243例面颈部白癜风疗效及相关因素分析.中华皮肤科杂志，2011，5(4):277－281.

6 Rao A，Gupta S，Dinda AK，et al.Study of clinical，biochemical and immunological factors determining stability of disease in patients with generalized vitiligo undergoing melanocyte transplantation.Br JDermatol，2012，166:1230－1236.

7Galus R，Niderla J，Ŝladowski D，et al.Fluvastatin increases tyrosinase synthesis induced byα－melanocyte－stimulating hormone in B16F10melanoma cells.Pharmacol Rep，2010，62(1): 164－169.

8 Park CW，Kim MA，Choi Y，et al.Analysis of PKCβ－mediated tyrosinase phosphorylation using proteoChip.BioChip Journal，2012，6(4):54－58.

9Mulekar SV.Long term follow up study of 142 patientswith vitiligo vulgaris treated by autologous non－cultured melanocyte－Keratinocyte cell transplantation.Int JDermatol，2005，44(10): 841－845.

10Holla AP，Sahni K，Kumar R，et al.Repigmentation of leukotrichia due to retrogrademigration ofmelanocytes after noncultured epidermalsuspension transplantation.Dermatol Surg，2014，40(2):169－175.

11Mulekar SV.Long－term follow－up study of segmental and focal vitiligo treated by autologous，noncultured melanocyte－keratinocyte cell transplantation.Arch Dermatol，2004，140(10): 1211－1215.

12Mysore V，Salim T.Cellular grafts inmanagement of leucoderma.Indian JDermatol，2009，54(2):142－149.

13Gauthier Y，Benzekri L.Non－cultured epidermal suspension in vitiligo:from laboratory to clinic.Indian JDermatol Venereol Leprol，2012，8(1):59－63.

14 Paul M.Autologous non－cultured basal cell－enriched epidermal cell suspension t－ransplantation in vitiligo:Indian experience.JCutan Aesthet Surg，2011，4(1):23－28.

15 Tegta GR，Parsad D，Majumdar S，etal.Efficacy ofautologous transplantation of noncultured epidermal suspension in two different dilutions in the treatment of vitiligo.Int J Dermatol，2006，45(2):106－110.

16 Jeong HS，Choi HR，Yun HY，et al.Ceramide PC102 inhibits melanin synthesis via proteasomal degradation of m icrophthalmia－associated transcription factor and tyrosinase.Mol Cell Biochem，2013，375(1):81－87.

17HongWS，Hu DN，Qian GP，et al.Ratio of size of recipient and donor areas in treatment of vitiligo by autologous cultured melanocyte transplantation.Br JDermatol，2011，165(3):520－525.

18 Lee JH，Cho B，Jun HJ，et al.Momilactione B inhibits protein kinase A signaling and reduces tyrosinase－related proteins 1 and 2 expression inmelanocytes.Biotechnol Lett，2012，34(5): 805－812.

19 Neifar A，SaibiW，Bradai MN，et al.Investigations on tyrosinase activity inmelanin－free ink from Sepia officinalis:potential for food proteins cross－linking.European Food Research Technology，2012，235(4):23－28.

20 Hirobe T.Roleof keratinocyte－derived factors involved in regulating the proliferation and differentiation ofmammalian epidermalmelanocytes.Pigment Cell Res，2005，18(1):2－12.

21 Kim JY，Park CD，Lee JH，et al.Co－culture of melanocytes with adipose－derived stem cells as a potential substitute for coculture withkeratinocytes.Acta Derm Venereol，2012，92(1): 16－23.

22 Lim WS，Kim CH，Kim JY，etal.Adipose－derived stem cells improve efficacy of melanocyte transplantation in animal skin. Biomol Ther(Seoul)，2014，22(4):328－333.

23Rao A，Gupta S，Dinda AK，etal.Study of clinical，biochemical and immunological factors determining stability of disease in patients with generalized vitiligo undergoing melanocyte transp lantation.Br JDermatol，2012，166(6):1230－1236.

24Wu J，Zhou M，Wan Y，et al.CD8＋T cells from vitiligo perilesional margins induce autologous melanocyte apoptosis.Mol Med Rep，2013，7(1):237－241.

25 Zhou MN，Zhang ZQ，Wu JL，etal.Dermalmesenchymal stem cells(DMCs)inhibit skin－homing CD8＋T cell activity，a determining factor of vitiligopatients'autologous melanocytes transplantation efficiency.PLoSOne，2013，8(4):e60254.

(收稿:2014－12－06 修回:2014－12－24)

Updata on transp lantion of melanocytes in the treatment of vitiligo

QIN Xiao-ming，KE Guo-lin，YANG Kong-chao.The Second Affiliated Hospital ofWangnan Medical College Dermatology，AnhuiWuhu，241000

Transplantion ofmelanocytes is one of the methods in the treatment of vitiligo at stable stage，including cultured melanocyte transplantation and epidermal cells suspension transplantation.Co－culturing of melanocyteswith adipose－derived stem cells may be a potential substitute for co－culturing with keratinocytes.The efficiency of autologousmelanocytes transplantation in vitiligo patientsmay be predicted by perilesional skin－homing CD8＋T cell activities and the dermalmesenchymal stem cellsmight be used as auxiliary agent to improve the efficacy.The progress on transplantion ofmelanocytes in the treatment of vitiligo is reviewed.

vitiligo；melanocytes；transplantion

皖南医学院第二附属医院皮肤性病科，安徽芜湖，241000